什么是標記基因?
標記基因是幫助對轉基因生物工程體進行篩選和鑒定的一類外源基因,包括選擇標記基因和報告基因。在選擇壓下,不含標記基因及其產物的非轉化細胞和組織死亡,轉化細胞由于有抗性而可以繼續存活。
常用的選擇標記基因有抗生素抗性基因和除草劑抗性基因,常用的報告基因有熒光素酶(emphasis:role=italiclucemphasis)、氯霉素乙酰轉移酶(emphasis:role=italiccatemphasis)以及綠色熒光蛋白(emphasis:role=italicgfpemphasis)基因等。有時,標記基因本身就是目的基因,如除草劑抗性基因。另外,還包括轉入的載體骨架,如啟動子序列、T-DNA左右邊界等。
什么是標記基因 到底什么是標記基因
1、什么是標記基因:標記基因就是載體上的一個記號,用來檢測目的基因是否成功導入受體細胞。
2、機理是:前提目的基因,標記基因都在質粒上,只要知道標記基因進入受體細胞就證明質粒也進入受體細胞了,又因為目的基因也在質粒上,所以也就證明目的基因進入到受體細胞了。一般都是一些抗性基因作為標記基因。
3、普通的大腸桿菌會被四環素殺死,但是導入的質粒上如果帶有抗四環素的標記基因的話,就不會被四環素殺死了。
4、因此,只要把大腸桿菌放在四環素上培養,只要大腸桿菌不死,就證明四環素基因進去了,進一步證明,重組質粒進去了,然后目的基因也進去了,相反,如果大腸桿菌死了,那就是目的基因沒進去。
標記基因的作用
標記基因,原本是基因工程的專屬名詞,但是現在它已經成為一種基本的實驗工具,廣泛應用于分子生物學、細胞生物學、發育生物學等方面的研究。作用如下:
1、標記基因是一種已知功能或已知序列的基因,能夠起著特異性標記的作用;
2、在基因工程意義上,它是重組DNA載體的重要標記,通常用來檢驗轉化成功與否;
3、在基因定位意義上,它是對目的基因進行標志的工具,通常用來檢測目的基因在細胞中的定位。
標記基因,報告基因傻傻分不清?
什么是標記基因?什么是報告基因?
標記基因(marker gene)是一種能夠起特異性標記作用的基因。其實就是一種已知功能或已知序列的基因,能夠起著特異性標記的作用。在基因工程意義上來說,它是重組DNA載體的重要標記,通常用來檢驗轉化成功與否;在基因定位意義上來說,它是對目的基因進行標志的工具,通常用來檢測目的基因在細胞中的定位。
報告基因(reporter gene)是一種編碼可易于鑒定的蛋白質或酶的基因,可用于標定目的基因的表達調控,并篩選得到轉化成功的生物個體,通常稱為轉化體。把它的編碼序列和基因表達調節序列相融合形成嵌合基因,或與其它目的基因相融合,在調控序列控制下進行表達,從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控,篩選得到轉化體。
它們有什么關系呢?
報告基因都可以看做是標記基因。報告基因也有標記的作用,標記目的基因是否成功轉化的作用,但是它們又有著各自的特點。
它們各自都有什么特點?又有什么用處呢?
標記基因通常用來檢驗重組DNA載體轉化成功與否,或者檢測目的基因在植物細胞或組織中的定位。常用的標記基因是一些抗生素抗性基因,如卡那霉素抗性基因、潮霉素標記基因等。
如:某種具有氨芐抗性基因質粒(該基因即可認為標記基因),與外源DNA片段組合形成重組質粒,并被轉入受體細胞后,就可以根據受體細胞是否具有氨芐抗性來判斷受體細胞是否獲得了目的基因。當用選擇培養基(比如含有氨芐的培養基),來培養受體細胞時,能夠在培養基中存活下來的受體細胞就可以認為是成功的導入了外源DNA,標記基因就起作用了。
作為報告基因,在遺傳選擇和篩選檢測方面必須具有以下幾個條件:(1)已被克隆和全序列已測定;(2)表達產物在受體細胞中不存在,即無背景,在被轉染的細胞中無相似的內源性表達產物;(3)其表達產物能進行定量測定。目前常用的報告基因有氯霉素乙酰轉移酶基因(cat)、熒光素酶基因(luc)、β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)、分泌型堿性磷酸酶基因(ap)、綠色熒光蛋白基因(gfp)等。
如:綠色熒光蛋白(gfp)基因。綠色熒光蛋白來源于海洋生物水母,其基因可在異源組織中表達并產生光,GFP Cdnad
開放閱讀框架長度約740bp,編碼238個氨基酸殘基,其肽鏈內部第65-67位絲氨酸-脫氫酪氨酸-甘氨酸通過自身環化和氧化形成一個發色基因,在長紫外波長或藍光照射下發出綠色熒光。轉染后的細胞可在熒光顯微鏡或流式細胞儀(FACS)中直接觀察基因的表達。