琥珀酸脫氫酶

實(shí)驗(yàn)十六:丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用

【實(shí)驗(yàn)名稱】：丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用

09救援一班第三大組李嵐宇2009222336

室溫：25℃

（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、學(xué)習(xí)和掌握競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用的特點(diǎn)。

2、觀察丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。

（二）實(shí)驗(yàn)原理：化學(xué)結(jié)構(gòu)與酶作用的底物結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)，可與底物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶的活性中

心，使酶的活性降低甚至喪失，這種抑制作用稱為競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。琥珀酸脫氫酶是機(jī)體內(nèi)

參與三羧酸循環(huán)的一種重要的脫氫酶，其輔基為FAD，如心肌中的琥珀酸脫氫酶在缺氧的

情況下，可使琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下之氫可將藍(lán)色的甲烯藍(lán)還原成無(wú)色的甲烯白。

這樣，便可以顯示琥珀酸脫氫酶的作用。

丙二酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)與琥珀酸相似，它能與琥珀酸競(jìng)爭(zhēng)而和琥珀酸脫氫酶結(jié)合。若琥珀酸脫氫

酶已與丙二酸結(jié)合，則不能再催化琥珀酸脫氫，這種現(xiàn)象稱為競(jìng)爭(zhēng)性抑制。如相對(duì)地增加琥

珀酸的濃度，則可減輕丙二酸的抑制作用。

（三）實(shí)驗(yàn)材料與儀器：

1器材大白鼠、手術(shù)剪、鑷子、磁盤(pán)、勻漿器、量筒、燒杯、紗布、濾紙、試管及試管

架、恒溫水箱、電熱水浴鍋

2試劑0.2mol/L琥珀酸溶液、0.02mol/L琥珀酸溶液、0.2mol/L丙二酸溶液、0.02mol/L

丙二酸溶液、1/15mol/L磷酸緩沖液、0.02％甲烯藍(lán)、液體石蠟。

（四）實(shí)驗(yàn)步驟:

1、酶提取液的制備：去大白鼠的肝臟、心臟、腎臟，用冷水洗3次，加入1/15mol/L磷酸

緩沖液pH在7.4。在勻漿器中進(jìn)行勻漿，然后用紗布過(guò)濾，用干凈的燒杯收集過(guò)濾的備用。

2、取試管6支，編號(hào)，在按圖步驟操作，

酶提

取液

（ml）

磷酸

緩沖

液

（ml）

0.2mol/L

琥珀酸

（滴）

0.02mol/

L琥珀酸

（滴）

0.2mol/L

丙二酸溶

液（滴）

0.02mol/L

丙二酸溶液

（滴）

蒸餾

水

（滴）

甲烯

藍(lán)

（滴

）

褪色時(shí)間

（分鐘）

試管12-8---833分33秒

試管22-8--8-35分30秒

試管32-8-8--36分04秒

試管42--88--37分28秒

試管5-28---83無(wú)限大

試管62-8---83無(wú)限大

試管6，在酶提取液先在100℃的水浴加熱煮沸5min。

各管溶液立即混均勻，沿試管壁加入液體石蠟，約0.5cm，各管置于37℃的水浴中保溫，

切勿搖動(dòng)試管，隨時(shí)觀察比較各試管顏色的變化，記錄褪色時(shí)間。

（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄：

表1

（六）實(shí)驗(yàn)討論：

1、酶提取液中有琥珀酸脫氫酶活性，表1所示，在試管1中沒(méi)有抑制劑，但琥珀酸

依然能脫氫，使得甲烯藍(lán)反應(yīng)得甲烯白。

2、各管的褪色有明顯的時(shí)間差別，褪色時(shí)間隨[I]/[S]逐漸增大，而增大。

3、丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶抑制作用的類型是競(jìng)爭(zhēng)性抑制，其特點(diǎn)：最大反應(yīng)速率

Vmax不變，米氏常數(shù)Km增大，競(jìng)爭(zhēng)性抑制可以通過(guò)增大底物濃度來(lái)減輕抑制程度。

4、本實(shí)驗(yàn)中5號(hào)、6號(hào)試管的作用是做對(duì)照，5號(hào)試管和1號(hào)試管做對(duì)照，說(shuō)明酶

提取液中有琥珀酸脫氫酶的存在，6號(hào)試管中的酶提取液在100℃的水浴加熱煮沸過(guò)，所以

琥珀酸脫氫酶是失活的。

【注意事項(xiàng)】：

1、酶提取液的制備應(yīng)操作迅速，以防止酶活性降低。

2、加入液體石蠟的作用是隔絕空氣，以避免空氣中的氧氣對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響，

因此加石蠟時(shí)試管壁要傾斜，注意不要產(chǎn)生氣泡。

3、37℃水浴保溫過(guò)程中，不能搖動(dòng)試管，避免空氣中的氧氣接觸反應(yīng)溶液，

使得還原型的甲烯白重新氧化成藍(lán)色。

4.、37℃水浴保溫過(guò)程中，要注意隨時(shí)觀察各試管的褪色情況。

5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)束后，一定要洗干凈試管內(nèi)的液體石蠟。

2010年10月9號(hào)

褪色時(shí)間

（分鐘）

[I]/[S]

試管13分33秒0

試管25分30秒0.1

試管36分04秒1

試管47分28秒10

試管5無(wú)限大0

試管6無(wú)限大0