細(xì)胞培養(yǎng)皿

細(xì)胞傳代培養(yǎng)詳細(xì)操作步驟

細(xì)胞傳代培養(yǎng)是一種常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，用于維持細(xì)胞的生長(zhǎng)和擴(kuò)增。在進(jìn)

行細(xì)胞傳代培養(yǎng)前，首先需要準(zhǔn)備好所需的培養(yǎng)基和培養(yǎng)器具，并保持無(wú)菌環(huán)境。

接下來(lái)將介紹細(xì)胞傳代培養(yǎng)的詳細(xì)操作步驟。

第一步是收集細(xì)胞。在培養(yǎng)細(xì)胞之前，需要將之前的細(xì)胞進(jìn)行收集。方法是將

細(xì)胞培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基吸掉，用無(wú)菌PBS洗滌細(xì)胞，再用胰酶等消化酶將細(xì)胞從

培養(yǎng)皿上剝離，收集到離心管中。

第二步是計(jì)數(shù)和制備細(xì)胞懸液。將收集到的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，以確定需要多少細(xì)

胞才能達(dá)到所需的密度。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的培養(yǎng)皿中，并制備細(xì)胞懸液。

制備細(xì)胞懸液的方法是將細(xì)胞沉淀在離心管中，去除上清液后，用足夠量的培養(yǎng)基

將細(xì)胞懸浮均勻。

第三步是進(jìn)行第一次傳代。將制備好的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)皿中，放入培

養(yǎng)箱中，使其在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境中生長(zhǎng)。在細(xì)胞數(shù)量達(dá)到一定程度時(shí)，將進(jìn)行第一次傳

代。傳代時(shí)，先將培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基吸掉，用PBS洗滌細(xì)胞，再用胰酶等消化酶

將細(xì)胞從培養(yǎng)皿上剝離，按照所需比例加入新的培養(yǎng)皿中。

第四步是繼續(xù)培養(yǎng)。將新的培養(yǎng)皿放回培養(yǎng)箱中，使其在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境中繼續(xù)生

長(zhǎng)。在細(xì)胞數(shù)量達(dá)到一定程度時(shí)，進(jìn)行下一次傳代。根據(jù)所需的細(xì)胞數(shù)量和密度，

可以進(jìn)行多次傳代，直到達(dá)到所需的數(shù)量和密度。

需要注意的是，在進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí)，要保持無(wú)菌環(huán)境，避免細(xì)胞被污染。

同時(shí)，要注意細(xì)胞的狀態(tài)，確保其生長(zhǎng)正常，維持其穩(wěn)定的遺傳特性。