蛋白裂解液

細胞裂解液成分及類型

1.裂解液成分了解：

（1）?多有效成分都是去垢劑，那么去垢劑是什么呢？

去垢劑功能的關(guān)鍵是具有兩親結(jié)構(gòu)。所有的去垢劑都具有親?“頭部”區(qū)域和疏?“尾部”區(qū)域這?特征，常?的陰離?去垢劑SDS結(jié)構(gòu)如圖：

這些結(jié)構(gòu)特性使得去垢劑可以在?性介質(zhì)中聚集。在?夠?的濃度下，每個分?的極性親?區(qū)域朝向極性溶質(zhì)（?），?疏?區(qū)域聚集在?起，形

成?個具有疏?核?的熱?學(xué)穩(wěn)定的膠束。去垢劑膠束的疏?核?區(qū)域與蛋?質(zhì)的疏?表?結(jié)合，形成可溶性的蛋?質(zhì)-去垢劑復(fù)合物。

去垢劑根據(jù)其親?基團的不同分為：陰/陽離?去垢劑、?離?型兩性去垢劑、兩性去垢劑。

a陰/陽離?型去垢劑：作?強烈，會更?程度的改變蛋?質(zhì)的結(jié)構(gòu)，更容易受到pH、離?強度和反離?的性質(zhì)等因素影響；

b?離?型去垢劑：作?溫和，由于不分離蛋?質(zhì)-蛋?質(zhì)鍵，?離?型去垢劑使得蛋?質(zhì)可以保留其天然的結(jié)構(gòu)和功能，不易變形（疏?鏈長度

較短的去垢劑更易引起蛋?質(zhì)失活）；

c兩性去垢劑：相對于離?型去垢劑其更少產(chǎn)?變性，相對于?離?型去垢劑，?可以更有效的破壞蛋?質(zhì)-蛋?質(zhì)鍵并減少聚集。

（2）配置裂解液都需要Tris緩沖液，?是什么呢？

學(xué)名叫三羥甲基氨基甲烷，它和Tris-ba是?個東西，1M的Tris溶液的pH值?約是10～11，即常說的Tris堿；

-cl和Tris-HCl是?個東西，就是寫法上有所不同，即常說的Tris酸；

-HCl就是在Tris-ba的溶液中加?適當量的鹽酸，調(diào)成你所需要的PH值。

2.常?裂解液種類：

（1）NP40lysisbuffer：

a.主要成分50mMTris(pH7.4)，150mMNaCl，1%NP-40。

b.概述：NP-40是?種很溫和的?離?型去垢劑，1%濃度基本可以破壞掉細胞膜，?對核膜的破壞作?較弱，結(jié)合特定的緩沖液可以獲得胞漿蛋

?。與蛋?結(jié)合?強，?于防?物質(zhì)分?疏?間相互作?，確保蛋?的充分溶解和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。

c.?途：常規(guī)的Western、IP和co-IP和ELISA，本實驗室是做核蛋?的，由于獲取核蛋?需要裂解細胞核膜，因此本labWB實驗?

1%NP40+0.1%SDS（可使蛋?變形），IP/pulldown實驗?1%NP40+超聲（保留蛋?結(jié)構(gòu)）。

（2）SDSlysisbuffer：

a.主要成分：50mMTris(pH8.1)，1%SDS

b.概述：是?種?較強烈的細胞組織裂解液，可裂解核膜。在SDS-PAGE電泳中，SDS能使蛋?氫鍵和疏?鍵打開并結(jié)合蛋?分?，使各種蛋?

質(zhì)-SDS復(fù)合物都帶上相同密度電荷且遠遠超過蛋?分?原有電荷，從?掩蓋蛋?間電荷差別，使得電泳遷移率只取決于分???這?因素。

c.?途：?于常規(guī)Western、ChIP等