錢德明

第九批絨促性素國家標準品的建立

816中國藥事2007年第21卷第1O羽毛球的英語 期

第九批絨促性素國家標準品的建立

錢德明,劉群麗,張媛,邵燕,楊贅昀,孫圓媛,華曉東,張月玲,

芮菁,朱社敏.,匡榮.(中國藥品生物制品檢定所,北京100050;北京市藥品檢驗

所;天津市藥品檢驗所;.浙江省藥品檢驗所)

摘要:制備,標定第九批絨促性素(HumanChorionicGondotrophin,HCG)國家標準品.

以第四批絨

促性素國際標準品(NIBSCCode:75/589)為標準,全國有4個實驗室參加,用幼齡小

鼠子宮增重法進

行協作標定.采用4個實驗室共18個標定結果,經合并計算,測得本批待標品每支

含生物效價為6O個國

際單位.本批待標品可以作為絨促性素第九批國家標準品使用,其批號為150513

—200409.2007年6月份

正式分發使用.

關鍵詞:絨促性素;標準品;生物效價

中圖分類號:R977.1+2文獻標識碼:A文章編號:1002—7777(2007)10—0816—03

Establishthe9thNationalStandardforHumanChorionicGonadotrophin

QianDeming,LiuQunli,ZhengYuan,ShaoYan,YangBinyun,SunYuanyuan,HuaXiaodon

g2,

ZhangYuelingz,RuiJing,ZhuShemin.,KuangRonga(NationalInstitutefortheControlof

Pharmaceutica1andBiologica1Products,Beijing100050;BeijingInstituteforDrugContro

l;

TianjinInstituteforDrugControl;.ZhejiangInstituteforDrugContro1)

A基因克隆技術 BSTRACTTopreparedanddeterminethe9thnationa1standardofHumanChorionicGona

dotroDhin

(H0G).Determinethe9th六年級語文試卷分析 nationa1standardofHCGbyyoungfemalemiceuterusweightassa

y,which

regardedthe4ththeinternationa1standardofHCG(NIBSCCode:75/589).Thepotenciesoft

he9th

ascombinativecalculated18res

ultsfrom4

9thnationa1standardofHCGwastablishedsuccessfully,who1Otwas

150513—

200409,andwasdistributedinJune2007.

KEYWoRDSHumanChorionicGonadotrophin(HCG);standard;potency

絨促性素可提取于孕婦尿液,胎盤等_l1≈],是

胎盤滋養層細胞分泌的一種促性腺激素,具有促黃

體生成素(L讀書筆記100字 H)活性,而促卵泡成熟素(FSH)樣作

用甚微,可促使雌性卵泡成熟及排卵,并使破裂卵

泡轉為黃體,促使其分泌孕激素.對雄性則具有促

間質細胞激素(ICSH)作用,能促進曲細精管功能,

特別是睪丸間質細胞的活性,使其產生雄激素,促

使性器官和副性征發育,成熟,促使睪丸下降和精

子生成.臨床常用來治療性功能障礙,不孕癥,先

兆流產或習慣性流產,功能性子宮出血,閉經,隱

睪癥,男性性腺機能減退癥,精子過少等.

絨促性素國家標準品是該產品生產中進行生物

效價測定的重要標準,該標準品自1960年以來已

經延續了8個批次,1988年制備的第八批絨促性

素國家標準品現已用完,為了檢驗的需要,使本品

種的國家標準品得以延續,特制備和標定第九批絨

促性素國家標準品.同時也考察了第八批長期保存

的穩定性.現將結果報告如下.

1材料

絨促性素(HumanChorionicGonadotrophin):

原料由上海麗珠制藥有限公司提供,批號:

030703,生物效價:4074IU?mg-(按干燥品計

算);人血白蛋白:批去俄羅斯旅游 號:20010909,中泰藥業有

限公司產品;乳糖:藥用規格,上海麗珠制藥有限

公司提供;第四批絨促性素國際標準品,批號:

75/589,每支650IU;第八批絨促性素國家標準

品,批號:513—8808,每支57IU;第九批絨促性

素國家待標品(估計效價每支56IU)的組分和制

中國藥事2007年第21卷第10期817

備:絨促性素原料126.8mg,乳糖83g,259/5人血

白蛋白100mL,lmol?L醋酸83mI,蒸溜水

加至8300mI,充分混勻后,測得pH值3.8.溶

液經0.45#m濾膜抽濾.濾液分裝到2mL的安瓿

中,每支裝量0.8mL(機器灌裝),分裝完畢進入

凍干機進行凍干(48小時),然后出箱封口.

動物:SPF級KM小鼠,雌性,體重10～

13g,日齡15～16天,由中國藥品生物制品檢定所

實驗動物種子中心提供,動物質量合格證號:

SCXK(京)2005—0004.實驗動物使用許可證號:

SYXK(京)2006—0004.飼料合格證號:SCXK

(京)2005—0007,(北京科奧協力飼料有限公司).

北京市藥檢所實驗動物:清潔級ICR雌性小鼠,

體重9~12g,合格證號:SCXK(京)2002—0003,

由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供.天津

市藥品檢驗所實驗動物:SPF級雌性ICR小鼠,

體重11～13g,合格證號:SCXK(京)2002—

0003,由北京維通利華實驗動物技術有限公司提

供.浙江省藥品檢驗所實驗動物:清潔級ICR雌

性小鼠,體重10～13g,合格證號:SYXK(浙)

2005—0057,由浙江省動物中心提供,清潔級KM

雌陛小鼠,體重9～12青銅角 ,合格證號:SCXK(浙)

2004—0012,由浙江省藥品檢驗所實驗動物房提供.

2方法E43與結果

2.1效價測定結果

每次實驗取上述小鼠190只,按體重隨機均勻

分成12組,每組15只,剩余動物為空白對照組.

實驗設計為33法,分別取1支絨促性素國際標

準品,1支s8國家標準品,2支待標品(設T1和

T2).實驗當日先用0.9氯化鈉注射液將每個制

品溶解稀釋成10IU?mL的溶液,再取一定量的

10IU?mI稀釋液,用0.5羧甲基纖維素鈉溶

液分別稀釋成高,中,低3種濃度的溶液(標準品

和待標品溶液濃度相同,濃度為0.20,0.12,

0.07IU?mL,劑距為1獅子資料 :0.6),于每日同一時

間經背部皮下注射給予各組動物對應濃度的待標品

或標準品溶液0.2mL,連續3日,空白對照組給

相同體積的0.59/6羧甲基纖維素鈉溶液.最后一次

給藥24小時后,按給藥順序將動物處死,稱體重

后解剖,摘取子宮,剝離附著的組織,用濾紙吸干

子宮外液,立即稱重(精度0.1mg).采用沈連忠

等編制的BS2000生物統計軟件中量反應平行線測

定隨機設計法計算生物效價及實驗誤差.可靠性測

驗應通過,可信限率不得大于259/6,實驗結果成

立【_5].用第四批絨促性素國際標準品作標準,測得

待標品8個實驗成立的結果,合并計算生物效價每

支為59.980IU,可信限率為6.0018;測得S8

絨促性素國家標準品3個實驗成立的結果,合并計

算生物效價每支為6O.000IU,可信限率為

10.4800;用S8絨促性素國家標準品作標準,測

得待標品8個實驗成立的結果,合并計算生物效價

每支為56.090IU,可信限率為6.3156.

另外,本批標準品的標定邀請了北京市,天津

市藥品檢驗所和浙江省藥品檢驗所藥理室參加,標

定結果分別為:用第四批絨促性素國際標準品作標

準,測得待標品分別有4,2,4個實驗成立的結果

(北京,天津和浙江所),合并計算生物效價每支為

55.255IU,59.247工作進度 IU,68.352IU,可信限率為

5.15729/6,15.8850,7.0424;測得S8絨促性

素國家標準品分別有1,2,2個實驗成立的結果

(北京,天津和浙江所),合并計算生物效價每支為

55.515IU,59.347IU,68.695IU,可信限率為

9.72589/6,13.5850,11.5360;用S8絨促性

素國家標準品作標準,測得待標品分別有2,2,3

個實驗成立的結果(北京,天津和浙江所),合并計

算生物效價每支為53.713IU,58.141lid,55.914IU,

可信限率為7.0980,16.43809/6,11.3330.

4個實驗室用第四批絨促性素國際標準品作標

準,對第八批絨促性素國家標準品進行標定,生物效

價合并計算,結果不均一,經校正權重計算,生物效

價每支為6O.548IU,可信限率為10.50,見表1.

表1標定結果

用第四批絨促性素國際標準品作標準,對第九

批絨促性素國家待標品進行標定,生物效價合并計

算,結果不均一,經校正權重計算嘲,生物效價每

支為6O.5275IU,可信限率為9.05,見表2.

818中國藥事2007年第21卷第1O期

表2標定結果

實驗室被采用實驗的序號(I效價

U/5~)

可率

北京市藥檢所1

2

3

4

天津市藥檢所

浙江省藥檢所

中國藥品生物

制品檢定所

合并計算結果均一

1

2

合并計算結果均一

1

2

3

4

合并計算結果均一

1

2

3

4

5

6

7

8

合并計算結果均一

-四個宴驗竄結果的合并(校權螢)計算

12.653

14.024

11.964

7.3663

5.1572

22.398

22.946

15.885

13.716

10.049

19.719

24.172

7.0424

16.921

17.050

17.902

16.653

15.762

19.227

18.414

16.909

6.O018

9.O5

用第八批絨促性素國家標準品作標準測得第九

批絨促性素國家待標品的生物效價合并計算,結果

均一,生物效價每支為55.346IU,可信限率為

4.57,見表3.

表3標定結果

2.2干燥失重測定

按《中國藥典》2005年版二部絨促性素檢查項

下,經60~C真空減壓干燥,第九批絨促性素國家標

準品的干燥失重為3.42.

3討論

根據實驗結果分析,本批待標品可作為第九批

絨促性素國家標準品使用,批號為150513—200409.

根據合并計算和國家標準品生物效價確定的原

則,第九批絨促性素國家標準品生物效價是以第四

批絨促性素國際標準品作標準測得的效價為依據,

其他標準測得的效價為參考.本批標準品每支的生

物效價定為6O個國際單位.

絨促性素生物效價測定(33)法可靠性測驗

結果分析中經常出現二次曲線,反向二次曲線或偏

離平行顯著(P<O.05或P<O.01)的情況,使得

實驗失敗.本次協作標定結果中也發現此問題,主

要解決辦法是:(1)每次實驗時一定要有1個空白

對照組,這樣可以與標準品的低劑量組動物的反應

值作比較,只要標準品的低劑量組動物的反應值

(子宮重me/體重g)稍大于(有明顯的差別)空白

對照組動物的反應值,說明選擇的低劑量是有效劑

量,否則需要重新調節劑量.(2)實驗中高,中,

低3個劑量的反應值有時出現低和中劑量組反應值

差的小,中和高劑量組反應值差的大,這種情況是

由于實驗劑距設計不合理所造成的,應該重新調整

合適的劑距,如原來劑距是1:o.5,可調整為1:

o.6,使高,中,低3個劑量的反應值能均勻地分

開,與標準品的高,中,低3個劑量引起的反應值

相當,這樣可以提高實驗的成功率.(3)實驗動物

的日齡,體重和管理,給藥部位,溶液配制等都會

影響實驗結果,也應該引起重視.

第八批絨促性素國家標準品在一20"C保存18年,

本次經用第四批絨促性素國際標準品作標準,4個

實驗室標定得每支生物效價為60.548IU,相當于原

標示量(每支57IU)的lO6,實驗結果證明,絨

促性素標準品在一20~C存放是穩定的.

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