巢蛋白對維持足細(xì)胞形態(tài)作用的探討

?

１５６?

中國病理生理雜志Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ２００９，２５（１）：１５６—１５９

［文章編號］１０００—４７ｌ８（２００９）０１－０１５６—０４

巢蛋白對維持足細(xì)胞形態(tài)作用的探討術(shù)

蘇蔚 ，房成 ，楊海春 ， 陳靖 ，顧勇 ， 郝傳明

（ 復(fù)旦大學(xué)附屬華ｔｈＮ院腎臟科，上海２０００４０；

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院病理教研室，河南新鄉(xiāng)４５３００３）

［摘要］ 目的：觀察細(xì)胞骨架蛋白巢蛋白（ｎｅｓｔｉｎ）在體外培養(yǎng)的小鼠足細(xì)胞中的表達(dá)及在維持足細(xì)胞形態(tài)

方面的作用。方法：應(yīng)用免疫熒光技術(shù)檢測ｎｅｓｔｉｎ在條件性永生的足細(xì)胞中的表達(dá)；應(yīng)用ＲＮＡ干擾技術(shù)抑制巢蛋

白ｎｅｓｔｉｎ在足細(xì)胞中的表達(dá)，觀察足細(xì)胞形態(tài)的變化并計算ｎｅｓｔｉｎ ｓｉＲＮＡ組和無關(guān)序列ｓｉＲＮＡ組中有足突的足細(xì)

胞數(shù)量。結(jié)果：體外培養(yǎng)的足細(xì)胞中巢蛋白呈絲狀分布于胞漿；轉(zhuǎn)染ｎｅｓｔｉｎ ｓｉＲＮＡ質(zhì)粒的足細(xì)胞，足突變短或消

失，而轉(zhuǎn)染無關(guān)對照序列ｓｉＲＮＡ質(zhì)粒的足細(xì)胞形態(tài)未見改變；無關(guān)對照組有足突的足細(xì)胞數(shù)為７７．Ｏ％±６．３％，轉(zhuǎn)

染ｎｅｓｔｉｎ ｓｉＲＮＡ序列質(zhì)粒組有足突的細(xì)胞數(shù)為１６．Ｏ％±４．６％，兩組差異顯著（ｎ＝３，Ｐ＜０．０１）。結(jié)論：巢蛋白ｎｅｓ?

ｔｉｎ對于維持足細(xì)胞正常形態(tài)具有重要作用。

［關(guān)鍵詞］足細(xì)胞；巢蛋白；ＲＮＡ干擾；免疫熒光

［中圖分類號］Ｒ３ ［文獻(xiàn)標(biāo)識碼］Ａ

Ｒｏｌｅ ｏｆ ｎｅｓｔｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ

ＳＵ Ｗｅｉ ，ＦＡＮＧ Ｃｈｅｎｇ ，ＹＡＮＧ Ｈａｉ—ｃｈｕｎ ，ＣＨＥＮ Ｊｉｎｇ ，ＧＵ Ｙｏｎｇ ，ＨＡＯ Ｃｈｕａｎ一

?

１

ｍｌｎｇ

（‘Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，Ｈｕａｓｈａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｄａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００４０，Ｃｈｉｎａ； Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，

Ｘｉｎｘｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３００３，Ｃｈｉｎａ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｎｓｗｅｉ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｅｎ）

［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］ ＡＩＭ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｅｓｔｉｎ，ａ ｋｉｎｄ ｏｆ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｌａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｍｕｒｉｎｅ

ｏｐｄｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｎｅｓｔｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｄｏｃｙｔｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｔｈｅ ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ ｍｕｒｉｎｅ ｐｏｄｏ－

ｃｙｔｅｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｅｓｔｉｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．Ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ．ｔｈｅ ｅｘ－

ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｅｓｆｉｎ ｗａｓ ｋｎｏｃｋ—ｄｏｗｎ ｂｙ ＲＮＡｉ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｅｓｔｉｎ ｋｎｏｃｋ—ｄｏｗｎ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ａｎｄ ｉｍ?

ｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．Ｔｈｅ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎｓ ｌｏｎｇｅｒ ｔｈａｎ ｍａｘｉｍａｌ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｂｏｄｙ ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｃｅｎｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｉＲＮＡ

ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｅｃｔｏｒ ｔｈａｔ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｎｏｎｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｏｌｉｇｏ ｗｅｒｅ ｃｏｕｎｔｅｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＲＥＳＵＬＴＳ：Ｎｅｓｔｉｎ ｓｉＲＮＡ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｒｅ—

ｄｕｃｅｄ ｏｒ ａｂｏｌｉｓｈｅｄ ｎｅｓｔｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｉｎ ｃｅｉｌｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｎｅｓｔｉｎ ｓｉＲＮＡ，ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｗａｓ ｓｉｇ－

ｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｅｃｔｏｒ（７７．０％±６．３％ＶＳ １６．０％±４．６％，ｎ：３，Ｐ＜０．Ｏ１）．

ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｎｅｓｔｉｎ ｍａｙ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ ｎｏｒｍａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｄｏｅｙｔｅｓ．

［ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ］Ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ；Ｎｅｓｔｉｎ；ＲＮＡ ｉｎｔｅｌｆｅｒｅｎｃｅ；Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ

Ｎｅｓｔｉｎ（巢蛋白）是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第Ⅵ類中間

本實驗應(yīng)用ＲＮＡ干擾技術(shù)沉默巢蛋白ｎｅｓｔｉｎ在足細(xì)

絲蛋白，被稱為中樞神經(jīng)系統(tǒng)多能干細(xì)胞的標(biāo)志性

胞中的表達(dá)，以觀察ｎｅｓｔｉｎ對于維持足細(xì)胞形態(tài)方面

蛋白。Ｎｅｓｔｉｎ在嚙齒類動物腎臟發(fā)育過程中，可表達(dá)

的作用。

于來源于后腎間充質(zhì)的腎小管上皮細(xì)胞及小球內(nèi)皮

細(xì)胞，而在腎臟發(fā)育成熟后，ｎｅｓｔｉｎ只表達(dá)于分化成

材料和方法

熟的足細(xì)胞中 Ｊ。足細(xì)胞是腎小球濾過膜的重要組

１材料

成成分，是一種巨大胞體的上皮細(xì)胞，依靠其指狀足 條件性永生的小鼠足細(xì)胞由Ｐｅｔｅｒ Ｍｕｎｄｅｌ教授

突附著在毛細(xì)血管基底膜表面，足突之間形成曲折 （Ｍｏｕｎｔ Ｓｉｎａｉ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）饋贈。該細(xì)胞含有１

的濾過裂隙，足細(xì)胞的功能是血液選擇性濾過的保

個溫度敏感的ＳＶ４０一Ｔ抗原基因，該基因可由

障，足細(xì)胞功能障礙將導(dǎo)致蛋白尿形成及慢性腎臟 ＩＦＮ一＾ｙ誘導(dǎo)的Ｈ一２Ｋｂ啟動子控制，因此，當(dāng)細(xì)胞培

病變的小球硬化性損傷。作為細(xì)胞骨架蛋白，ｎｅｓｔｉｎ 養(yǎng)在３３℃，有ＩＦＮ一 存在，細(xì)胞將處于未分化狀態(tài)，

在維持足細(xì)胞形態(tài)和功能方面是否具有特殊作用，

以保持其永生性。當(dāng)細(xì)胞置于３７℃，并去除ＩＦＮ一

［收稿日期］２００７—１０—１８ ［修回日期］２００８—０４—１５

［基金項目］國家自然科學(xué)基金資助項目（Ｎｏ．３０５７０８６１）

△通訊作者Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｎｓｗｅｉ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｃｎ