病毒基因組RNA提取試劑盒使用說明書

北京厚生博泰科技有限公司

Beijing Hooen Biotech Co., Ltd.

病毒RNA提取試劑盒

Virus RNA Kit

(目錄號：HS0408)

產(chǎn)品包裝

試劑盒成分 50 preps

Buffer GB 15 ml

Buffer RD 30 ml

Buffer RW 60 ml

Buffer RE 10 ml

Proteina K 1 ml

Spin Columns CG 50個

Collection Tubes (2 ml) 50個

RNaFree Tubes (1.5 ml) 50個

自備試劑

無水乙醇

儲存條件

蛋白酶K于-20℃，其他組分室溫（15 ~ 25℃）

產(chǎn)品簡介

本試劑盒適用于從新鮮或冷凍的血漿、血清和無細(xì)胞體液中提取高質(zhì)量的病毒RNA。無

需使用苯酚、氯仿等有機溶劑抽提，獨特的緩沖液/蛋白酶K體系能迅速裂解病毒，使病毒

蛋白與RNA分離，在蛋白酶K的作用下降解病毒蛋白，在高鹽狀態(tài)下將病毒RNA選擇性吸附

于硅基質(zhì)膜上，再通過快速的漂洗、離心步驟，去除蛋白等雜質(zhì)，最后低鹽的洗脫緩沖液將

高純度的病毒RNA從吸附柱膜上洗脫下來。

本試劑盒操作簡單、快速，所得病毒RNA不含蛋白、核酸酶和其他雜質(zhì)，可直接用于

RT-PCR、Real-Time PCR、印跡等分子生物學(xué)實驗。

產(chǎn)品特點

1.簡便快速，1小時內(nèi)可獲得高純度的病毒RNA。

2.無需有機溶劑抽提，使用安全。

*

3.重復(fù)性好，產(chǎn)量高。

4.所得病毒RNA純度高，無污染物和抑制劑，方便下游應(yīng)用。

注意事項

1.血清或血漿避免反復(fù)凍融，否則會使蛋白變性或產(chǎn)生沉淀，導(dǎo)致提取的RNA片段小，提

取量下降。

2.如緩沖液Buffer GB、Buffer RD結(jié)晶或產(chǎn)生沉淀，可在56℃水浴溶解。

3.所有離心步驟均為室溫下操作。

4.本試劑盒也可提取高質(zhì)量的病毒DNA，操作步驟相同。

操作步驟

1. 取1.5 ml離心管（自備），加入20 ul的Proteina K溶液。

2. 向離心管中加入200 ul血清或血漿，然后再加入200 ul Buffer GB，渦旋震蕩15 c。

（注意：1、樣本體積不足200 ul可以加入0.9% NaCl（自備）補足。2、為確保樣本有效裂解，加入Buffer

GB后，需將樣本與Buffer GB充分混勻。）

3．56℃孵育15 min，短暫離心，將管壁上的溶液收集到管底。

4. 加入250 ul無水乙醇，渦旋震蕩15 c，室溫放置5 min，使溶液溫度降至室溫，短暫離

心，將管壁上的溶液收集到管底。

(

注意：如果環(huán)境溫度超過25℃，無水乙醇應(yīng)在冰上預(yù)冷后使用。)

5．

將一個Spin Columns CG放入Collection Tubes(2 ml)中，將上一步所得溶液轉(zhuǎn)移到離

*

心吸附柱中，10 000 rpm離心30 c，棄收集管中的廢液。

6. 向吸附柱內(nèi)加入500 ul的Buffer RD，室溫10 000 rpm離心30 c，棄收集管中廢液。

（注意：Buffer RD中含有乙醇，用后及時蓋緊，以防乙醇揮發(fā)）

7. 向吸附柱內(nèi)加入500 ul的Buffer RW，室溫10 000 rpm離心30 c，棄收集管中廢液。

（注意：如需進一步提高RNA純度，可重復(fù)步驟7一次。Buffer RW中含有乙醇，用后及時蓋緊，以防乙

醇揮發(fā)）

8．向吸附柱中加入500 ul無水乙醇，10 000 rpm離心30 c，倒掉收集管中的廢液，將吸

附柱重新放回收集管中。

9．室溫12 000 rpm離心3 min，甩干殘留液體。

（注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會影響質(zhì)粒的后續(xù)使用）

10. 將離心吸附柱置于一個RNaFree Tube (1.5 ml)中，小心打開吸附柱的蓋子，室溫放

置3 min，使吸附膜完全變干。加入30 ~ 100 ul的洗脫液，室溫放置2 ~ 5 min。12 000 rpm

離心1 min，離心管底溶液即病毒RNA。

（注意：為增加洗脫效率，可將洗脫液在50 ~ 60℃預(yù)熱。如需使用去離子水洗脫，可用NaOH調(diào)整其pH值

在7.0 ~ 8.5之間，為了增加RNA回收率，可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置2 min，再次離

心收集）