實驗四 阿司匹林片的分析
【實驗目的】
1 了解溶出度測定的方法與原理；
2 熟悉片劑分析的項目與方法;
3 掌握阿司匹林鑒定試驗的原理及與藥物結構的關系;
4 掌握本實驗中藥物特殊雜質的來源和檢查原理；
5 掌握兩步滴定法測定阿司匹林片含量的原理與操作，及容量分析法測定片劑含量的計算方法。
【實驗原理】
1. 藥物
本品為白色片；遇濕氣易變質。本品含阿司匹林應為標示量的95.0%~105.0%。
2.原理：
⑴ 鑒別
1 三氯化鐵反應：水楊酸及其鹽在中性或弱酸性條件下，與三氯化鐵試液反應，生成紫堇色配位化合物。阿司匹林加熱水解生成水楊酸，可用三氯化鐵反應鑒別。
2 水解反應：阿司匹林與碳酸鈉試液加熱，酯健水解，得水楊酸鈉和醋酸鈉，加過量稀硫酸酸化后，生成白色水楊酸沉淀，并發生醋酸的臭氣，因此可用水解反應鑒別。
⑵ 檢查
阿司匹林中游離水楊酸的檢查
a. 雜質來源 游離水楊酸為阿司匹林生產中未反應的原料或貯存過程中的水解產物。
b. 檢查方法 阿司匹林無游離酚羥基，不與高鐵鹽溶液作用，而水楊酸則可與之反應生成紫堇色，此種方法稱之對照法，極為靈敏，可檢出1ug的游離水楊酸。
⑵ 含量測定
阿司匹林分子結構中有酯健，易水解生成水楊酸和醋酸，片劑中為防止酯健水解加入少量酒石酸或枸櫞酸做穩定劑，因此在片劑中有酸性雜質，含量測定時為消除酸性雜質干擾，采用兩步滴定法。
第一步 中和，消除酸性雜質〔酸性附加劑和降解產物〕的干擾
第二步 水解后剩余滴定
【實驗儀器與試劑】
㈠儀器
試管，納氏比色管，溶出度測定儀，紫外-可見分光光度計，10~25ml注射器，0.8um微孔濾膜，酸式滴定管，容量瓶，移液管，漏斗。
㈡試劑
1. 酚酞指示液
取酚酞1g，加乙醇100ml使溶解，既得。變色范圍：pH8.3~10.0〔無色→紅色〕。
2. 稀硫酸鐵銨溶液
取鹽酸溶液〔9→100〕1ml，加硫酸鐵銨指示液2ml后，再加水適量使成100ml，搖勻，既得。
3. 水楊酸標準溶液
精密稱取水楊酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml，搖勻，再加水使成1000ml，搖勻，既得。
4. 中性乙醇
中性乙醇的“中性”是對中和法所用指示劑而言的。中和法用酚酞為指示劑時，中性乙醇的制取方法為：取適量乙醇，加入酚酞指示液3滴，用氫氧化鈉滴定液〔0.1mol/L〕滴定至淡紅色，既得。
5. 三氯化鐵試液
取三氯化鐵9g，加水使溶解成100ml，既得。
6.碳酸鈉試液
取一水合碳酸鈉12.5g或無水碳酸鈉10.5g，加水使溶解成100ml，既得。
7.稀硫酸
取硫酸57ml，加水稀釋至1000ml，既得。本液含硫酸應為9.5%~10.5%。
阿司匹林、三氯甲烷、無水乙醇
㈢滴定液的配制與標定
1.氫氧化鈉滴定液〔0.1mol/L〕
⑴配制 取氫氧化鈉適量，加水振搖使溶解成飽和溶液，冷卻后，置聚乙烯塑料瓶中，靜置數日使澄清。取澄清的氫氧化鈉飽和溶液5.6ml，加新沸過的冷水使成1000ml，搖勻。
⑵標定 取在105℃干燥至恒重的基準鄰苯二甲酸氫鉀約0.6g，精密陳定，加新沸過的冷水50ml，振搖，使其盡量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定；在接近終點時，應使鄰苯二甲酸氫鉀完全溶解，滴定至溶液顯粉紅色。每1ml氫氧化鈉滴定液〔0.1mol/L〕相當于20.42mg的鄰苯二甲酸氫鉀。根據本液的消耗量與鄰苯二甲酸氫鉀的取用量，算出本液的濃度，既得。
2.硫酸滴定液〔0.05mol/L〕
⑴配制 取硫酸3.0ml，緩緩注入適量水中，冷卻至室溫，加水稀釋至1000ml，搖勻。
⑵標定 取在270~300℃干燥至恒重的基準無水碳酸鈉約0.15g，精密稱定，加水50ml使溶解，加甲基-溴甲酚綠混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由綠色轉變為紫紅色時，煮沸2min，冷卻至室溫，繼續滴定至溶液由綠色變為暗紫色。每1ml硫酸滴定液〔0.05mol/L〕相當于5.30mg的無水碳酸鈉。根據本液的消耗量與無水碳酸鈉的取用量，算出本液的濃度，既得。
【實驗操作】
㈠鑒別
⑴取本品的細粉適量〔約相當于阿司匹林0.1g〕，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化鐵1滴，即顯紫堇色。
⑵取本品的細粉適量〔約相當于阿司匹林0.5g〕，加碳酸鈉試液10ml，振搖后，放置5min，濾過，濾液煮沸2min，放冷，加過量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并發生醋酸的臭氣。
㈡檢查
游離水楊酸：
取本品5片，研細，用乙醇30ml分次研磨→移入100ml量瓶中，充分震蕩→用水稀釋至刻度，濾過→精密量取續濾液2ml置50ml納氏比色管中，用水稀釋至50ml→立即加新制硫酸鐵銨3ml，搖勻→與對照液比較
㈢含量測定
取本品10片，精密稱取，研細，精密稱取適量〔約相當于阿司匹林0.1g〕，置錐形瓶中，加中性乙醇20ml，振搖使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氫氧化鈉滴定液〔0.1mol/L〕至溶液顯粉紅色，再精密加氫氧化鈉滴定液〔0.1mol/L〕40ml，置水浴上加熱15min并時時振搖，迅速放冷至室溫，用硫酸滴定液〔0.05mol/L〕滴定，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml的氫氧化鈉滴定液〔0.1mol/L〕相當于18.02mg的CHO。
計算方法：
【注意事項】
1. 溶出度測定中所用溶劑應經過脫氣處理。溶出液必須濾過，取連續濾液進行測定。
2. 阿司匹林微溶于水，易容于乙醇。因此含量測定時，為了使供試品易于溶解，以及防止酯健水解，用中性乙醇為溶劑進行滴定。
3. 測定阿司匹林片的含量時，第一次中和時應迅速，并不可劇烈搖振，否則酯健水解，影響測定結果。近終點時，應輕輕搖振，中和至溶液呈粉紅色并持續15秒不褪色為準。長時間振搖由于空氣中的二氧化碳的影響，紅色又消失。為便于掌握，可用一無色溶液為對照液，滴定至終點時，與對照液進行比較。
【實驗思考】
1. 簡述兩步滴定法測定阿司匹林片含量的原理。
答：阿司匹林分子結構中有酯鍵，易水解生成水楊酸和醋酸，片劑中為防止酯鍵水解加入少酒石酸或枸櫞酸做穩定劑，因此在片劑中有酸性雜質，含量測定時為消除酸性雜質干擾，采用兩步滴定法。第一步，消除酸性雜質的干擾，第二步加NaOH將乙酰水楊酸。
2. 測定阿司匹林片的含量時為什么要做空白試驗？氫氧化鈉滴定液的濃度可否為未知？可否不用0.1mol/L？
答：因為除了阿司匹林其他外界因素都會影響實驗結果，需要校正實驗。氫氧化鈉滴定液的濃度不能為未知，但可以不用0.1mol/L。
