蠶豆根尖微核檢測(cè)

2024年1月12日發(fā)(作者：我是中國(guó)的孩子)

蠶豆根尖微核檢測(cè)

一、實(shí)驗(yàn)背景和目的

本組實(shí)驗(yàn)運(yùn)用蠶豆根尖微核檢測(cè)技術(shù)，分別用不同牌子0.25mg/mL洗發(fā)露（歐萊雅、力士、沙宣）對(duì)蠶豆根尖做處理，同時(shí)以0.25mg/mL的醋酸鉛溶液處理蠶豆根尖做陽(yáng)性對(duì)照，自來(lái)水作陰性對(duì)照。

洗發(fā)露是我們生活中的日用品，洗發(fā)露主要成分為：界面活性劑，也就洗干凈的成分。以SLS及sls的乙基衍生物類(lèi)：月桂醇聚醚硫酸酯鈉鹽、十二酯硫酸銨（月桂酸硫酸酯納）為主，SLS爭(zhēng)議很多，主要表現(xiàn)在對(duì)皮膚的刺激性，容易讓你頭皮變得敏感，雖然SLS也有用在牙膏中，但是在舒適達(dá)等國(guó)外牙膏中，是沒(méi)有SLS的存在的，從這一點(diǎn)上，也看出SLS的刺激性是廠商的心知肚明的。

微核（micronucleus, 簡(jiǎn)稱(chēng)MCN），也叫衛(wèi)星核，是真核類(lèi)生物細(xì)胞中的一種異常結(jié)構(gòu)，是染色體畸變?cè)陂g期細(xì)胞中的一種表現(xiàn)形式。微核往往是各種理化因子，如輻射、化學(xué)藥劑對(duì)分裂細(xì)胞作用而產(chǎn)生的。在細(xì)胞間期，微核呈圓形或橢圓形，游離于主核之外，大小應(yīng)在主核1/3以下。微核的折光率及細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣，也具合成DNA的能力。一般認(rèn)為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的染色體斷片產(chǎn)生的。有實(shí)驗(yàn)證明，整條染色體或幾條染色體也能形成微核。這些斷片或染色體在分裂過(guò)程中行動(dòng)滯后，在分裂末期不能進(jìn)入主核，便形成了主核之外的核塊。當(dāng)子細(xì)胞進(jìn)入下一次分裂間期時(shí)，它們便濃縮成主核之外的小核，即形成了微核。已經(jīng)證實(shí)，微核率的大小是和作用因子的劑量或輻射累積效應(yīng)呈正相關(guān)，這一點(diǎn)與染色體畸變的情況一樣。所以許多人認(rèn)為可用簡(jiǎn)易的周期微核計(jì)數(shù)來(lái)代替繁雜的中期畸變?nèi)旧w計(jì)數(shù)。由于大量新的化合物的合成，原子能的應(yīng)用，各種各樣工業(yè)廢物的排出等都存在污染環(huán)境的可能性，欲了解這些因素對(duì)機(jī)體潛在的遺傳危害，需要有一套高度靈敏，技術(shù)簡(jiǎn)單易行的測(cè)試系統(tǒng)來(lái)監(jiān)測(cè)環(huán)境的變化。只有真核類(lèi)的測(cè)試系統(tǒng)更能直接推測(cè)誘變物質(zhì)對(duì)人類(lèi)或其它高等生物的遺傳危害，在這方面，微核測(cè)試是一種比較理想的方法。

目前，國(guó)內(nèi)外不少部門(mén)已把微核測(cè)試用于輻射損傷、輻射防護(hù)、化學(xué)誘變劑、新藥試驗(yàn)、食品添加劑的安全評(píng)價(jià)，以及染色體遺傳疾病和癌癥前期診斷等各個(gè)方面。微核檢測(cè)技術(shù)靈敏度高，可靠性強(qiáng)；技術(shù)簡(jiǎn)單，易于操作，而且有顯而易見(jiàn)的實(shí)用性；實(shí)驗(yàn)周期短，且蠶豆根尖細(xì)胞周期中大部分時(shí)間處于對(duì)誘變劑敏感

的間期，便于遺傳毒性檢測(cè)試驗(yàn)，精確度也比較高。

本實(shí)驗(yàn)為不同牌子洗發(fā)露的毒性提供了理論依據(jù)，同時(shí)引起人們的高度重視，也希望有關(guān)部門(mén)對(duì)日用品中的有害物質(zhì)含量進(jìn)行嚴(yán)格控制和檢測(cè)。

二、實(shí)驗(yàn)部分

1．材料與試劑儀器

材料：蠶豆 (為當(dāng)年生無(wú)蟲(chóng)飽滿(mǎn)，大小均一蠶豆種子)、3種不同牌子的洗發(fā)露（歐萊雅、力士、沙宣）

試劑：5mol/L鹽酸，甲醇，醋酸鉛，CrO3,NaN3處理液，甲基磺酸乙酯（EMS），蒸餾水，冰醋酸，卡諾氏固定液，乙酸乙酯

儀器：顯微鏡，計(jì)數(shù)器，鑷子，載玻片，蓋玻片，燒杯，磁盤(pán)，培養(yǎng)箱，分析天平，水浴鍋，酒精燈，剪刀，解剖針，濾紙，鉛筆，標(biāo)簽紙，膠水等。

2.實(shí)驗(yàn)預(yù)處理

實(shí)驗(yàn)流程圖：

取材、固定

恢復(fù)培養(yǎng)

誘導(dǎo)處理根尖

陽(yáng)性對(duì)照

催芽 不同洗發(fā)露預(yù)處理 自來(lái)水對(duì)照

浸種

材料制備與處理

3．實(shí)驗(yàn)步驟

3.1 浸種催芽 選擇粒大飽滿(mǎn)、大小均勻的蠶豆種子按需要量放入盛有自來(lái)水的燒杯中 ,在 25 ℃下浸泡 24 h, 期間至少換水 2 次。 種子吸脹后 , 用紗布松散后裹置瓷盤(pán)中 , 保持濕度 ,在25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中催芽12 ～ 24 h , 待初生根長(zhǎng)2～ 3mm，取發(fā)芽良好的種子，放入鋪滿(mǎn)濾紙的瓷盤(pán)中25 ℃繼續(xù)催芽，經(jīng)約36 ～ 48 h, 大部分初生根長(zhǎng)至 1 ～ 2cm，根毛發(fā)育良好，這時(shí)即可用于檢測(cè)了。

3.2 誘變劑處理

取不同洗發(fā)露濃度為-1；分別稱(chēng)取洗發(fā)露樣約0．25 g加水至1L混勻，放置離心機(jī)(2000 r／min)中離心20 min，此溶液含洗發(fā)劑0.25mg/mL，取適量體積置于培養(yǎng)皿中用于處理蠶豆根尖。

取和洗發(fā)水等體積的自來(lái)水作陰性對(duì)照，用0.25mg／L醋酸鉛溶液作陽(yáng)性對(duì)照。當(dāng)初生根長(zhǎng)到2～3cm時(shí)，各選初生根生長(zhǎng)良好的蠶豆6～8粒，分別放入四個(gè)培養(yǎng)皿中中，染色24～27h。

3.3 恢復(fù)培養(yǎng) 處理后的種子用自來(lái)水和蒸餾水共浸洗 3 ～ 5次 , 每次

2 ～ 3 min，洗凈后，再置入鋪有濕潤(rùn)濾紙的瓷盤(pán)中中,25 ℃恢復(fù)培養(yǎng) 22 ～ 24

h 。

3.4 取材、固定 將恢復(fù)培養(yǎng)后的種子，從根尖頂端，切下1cm長(zhǎng)的幼根。用卡諾氏液固定24h。

3.5解離、制片觀察 用蒸餾水浸洗兩次，每次5min，吸干，加入6mol/L鹽酸將幼根浸沒(méi)，室溫下酸解10min，幼根軟化即可。吸取鹽酸，用蒸餾水浸洗三次，每次1～2min，最后浸于水中；取根置于載玻片上，截下1～2mm長(zhǎng)的根尖，滴一滴醋酸洋紅染液，染色5～8min，加蓋玻片壓片觀察。

3.6 微核計(jì)數(shù) 微核是游離于蠶豆根尖細(xì)胞漿中圓形或橢圓形小體．其太小不解離、制片觀察

超過(guò)主核1／3，染色性與主核相一致。每組隨機(jī)取3個(gè)根尖，高倍鏡觀察l000個(gè)間期細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)徽核數(shù)及徽核率，然后用方差分析做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

4．結(jié)論

4.1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

通過(guò)鏡檢后得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下表所示：

處理物質(zhì)

觀察的細(xì)胞個(gè)數(shù)

微核數(shù)

微核率

根據(jù)上表中的數(shù)據(jù)可進(jìn)一步計(jì)算污染指數(shù)［污染指數(shù)=樣品實(shí)測(cè)微核千分率平均值/對(duì)照組（自來(lái)水）微核千分率平均值］

19

13.05‰

15

12.58‰

21

13.20‰

101

9.16‰

101

31.78‰

0.25mg/mL0.25mg/ml 0.25mg/mL自來(lái)水 0.25mg/mL的醋歐萊雅洗力士洗發(fā)沙宣洗發(fā)露（陰性對(duì)照） 酸鉛溶液（陽(yáng)性發(fā)露溶液 露溶液 溶液 對(duì)照）

1456 1192 1592 11025 3278

分析：由上面數(shù)據(jù)可知，自來(lái)水微核率最低，在10‰以下，說(shuō)明基本沒(méi)有污染，二陽(yáng)性對(duì)照醋酸鉛的微核率最高，明顯污染最大，微核率大于30‰,屬于重污染。還有相同量的力士、歐萊雅、沙宣微核率沙宣最高，其次是歐萊雅，最后是力士，說(shuō)明使用相同量的三種洗發(fā)水，毒性：沙宣＞歐萊雅＞力士。均在10‰-19‰內(nèi)，所以都屬于輕污染。

4．2、綜述

綜上可見(jiàn)，使用一定劑量的三種洗發(fā)露洗發(fā)也不會(huì)有很強(qiáng)的毒性，但如果使用頻繁，對(duì)人體細(xì)胞的誘導(dǎo)作用加強(qiáng)，很可能會(huì)致癌。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)不同牌子洗發(fā)露對(duì)染色體的危害進(jìn)行了研究，進(jìn)而推斷出其對(duì)人體的危害，以引起人們的高度重視，同時(shí)也為以后選用洗發(fā)露提供了依據(jù)。

顯微鏡下的微核

自來(lái)水：

醋酸鉛

沙宣：

歐萊雅：

力士

（以上純屬個(gè)人小組實(shí)驗(yàn)，對(duì)各洗發(fā)水無(wú)任何偏見(jiàn)，謝謝！）