白介素2即白細(xì)胞介素-2(interleukin-2,IL-2),又名T細(xì)胞生長因子(T cellgrowth factor,TCRF)。主要由活化的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生的具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子。白細(xì)胞介素-2是趨化因子家族的一種細(xì)胞因子。
它是由多細(xì)胞來源(主要由活化T細(xì)胞產(chǎn)生),又具有多向性作用的細(xì)胞因子(主要促進(jìn)淋巴細(xì)胞生長、增殖、分化);對機(jī)體的免疫應(yīng)答和抗病毒感染等有重要作用,能刺激已被特異性抗原或致絲裂因數(shù)啟動(dòng)的T細(xì)胞增殖;
能活化T細(xì)胞,促進(jìn)細(xì)胞因子產(chǎn)生;刺激NK細(xì)胞增殖,增強(qiáng)NK殺傷活性及產(chǎn)生細(xì)胞因子,誘導(dǎo)LAK細(xì)胞產(chǎn)生;促進(jìn)B細(xì)胞增殖和分泌抗體;激活巨噬細(xì)胞。
可用于臨床研究和腫瘤治療。
截至2013年12月,已發(fā)現(xiàn)了至少38個(gè)白細(xì)胞介素,分別命名為IL-1~IL-38。它們功能復(fù)雜,成網(wǎng)絡(luò),復(fù)雜重疊。
中文名白細(xì)胞介素-2
外文名Interleukin-2;IL-2
別名T細(xì)胞生長因子,TCGF··
分子量14500
作用方式以自分泌和旁分泌方式發(fā)揮效應(yīng)
來源出處主要由T細(xì)胞產(chǎn)生
白介素家族白細(xì)胞介素是由多種細(xì)胞產(chǎn)生并作用于多種細(xì)胞的一類細(xì)胞因子。由于最初是由白細(xì)胞產(chǎn)生又在白細(xì)胞間發(fā)揮作用,所以由此得名,現(xiàn)仍一直沿用。
最初指由白細(xì)胞產(chǎn)生又在白細(xì)胞間起調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子,現(xiàn)指一類分子結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能已基本明確,具有重要調(diào)節(jié)作用而統(tǒng)一命名的細(xì)胞因子,它和血細(xì)胞生長因子同屬細(xì)胞因子。兩者相互協(xié)調(diào),相互作用,共同完成造血和免疫調(diào)節(jié)功能。白細(xì)胞介素
在傳遞信息,激活與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞,介導(dǎo)T、B細(xì)胞活化、增殖與分化及在炎癥反應(yīng)中起重要作用。
白細(xì)胞介素interleukin縮寫為IL,功能關(guān)系免疫反應(yīng)的表達(dá)和調(diào)節(jié),這種調(diào)節(jié)有來源于淋巴細(xì)胞或巨噬細(xì)胞等的許多因子參與。來源于淋巴細(xì)胞的有淋巴細(xì)胞活素,來源于巨噬細(xì)胞的總稱為monokine,其中的各個(gè)因子的生物活性各有不同(例如巨噬細(xì)胞活化,促進(jìn)T細(xì)胞繁殖等),因子自身的物理化學(xué)性質(zhì)多不清楚。
1979年這方面的研究團(tuán)體提出了在淋巴細(xì)胞活素及巨噬細(xì)胞因子(monoki-ne)中,已作為一種分子提純并弄清了性質(zhì)的稱為白細(xì)胞間殺菌素。[1]
最初測定的為IL1和IL2。IL1屬于monokine,以前曾以淋巴細(xì)胞活化因子(lymphocyte?activating?factor)命名。細(xì)胞促進(jìn)蛋白質(zhì)(mitogenic?protein)以及B細(xì)胞活化因子(B?cell-activating?factor)等七種名稱稱之。
而IL2屬于淋巴細(xì)胞活素,以前曾以胸腺細(xì)胞刺激因子(thymocyte?stimulating?factor)、T細(xì)胞生長因子(T?cell?growth?factor)等六種名稱稱之。
在對免疫應(yīng)答的研究過程中,在絲裂原刺激的細(xì)胞培養(yǎng)上清中發(fā)現(xiàn)了許多具有生物活性的分子,研究者各以自己測得的活性進(jìn)行命名,十幾年報(bào)道了近百種因子。
后來借助分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行比較研究發(fā)現(xiàn),以往許多以生物活性命名的因子實(shí)際上是具有多效性的同一物質(zhì)。為了避免命名的混亂,1979年第二屆國際淋巴因子專題會(huì)議將免疫應(yīng)答過程中白細(xì)胞間相互作用的細(xì)胞因子統(tǒng)一命名為白細(xì)胞介素(interleukin,IL),在名稱后加阿拉伯?dāng)?shù)字編號(hào)以示區(qū)別,例如IL-1、IL-2……,新確定的因子依次命名。
只有取行克隆化的基因、明確產(chǎn)物的性質(zhì)和活性才能得到國際會(huì)議的認(rèn)可。
白細(xì)胞介素是非常重要的細(xì)胞因子家族,截至2013年12月,得到承認(rèn)的成員至少達(dá)38個(gè);它們在免疫細(xì)胞的成熟、活化、增殖和免疫調(diào)節(jié)等一系列過程中均發(fā)揮重要作用,此外它們還參與機(jī)體的多種生理及病理反應(yīng)。
生物學(xué)活性1.刺激T細(xì)胞生長各種刺激物活化的T細(xì)胞一般不能在體外培養(yǎng)中長期存活,加入IL-2則能其長期持續(xù)增殖,因此IL-2曾被命名為T細(xì)胞生長因子(T?cell?growth?factor,TCGF)。
靜止的T細(xì)胞表面不表達(dá)IL-2R,對IL-2沒有反應(yīng);受絲裂原或其它刺激活化后T細(xì)胞才能表達(dá)IL-2R,成為IL-2的靶細(xì)胞;而IL-2又可誘導(dǎo)靶細(xì)胞增加IL-2R的表達(dá)。
在活體內(nèi),IL-2對CD4+T細(xì)胞的作用是通過自分泌途徑實(shí)現(xiàn)的,因?yàn)榛罨腃D4+T細(xì)胞能夠產(chǎn)生大量的IL-2;而CD8+T細(xì)胞則通過旁分泌途徑來維持細(xì)胞的生長。
IL-2R在T細(xì)胞上的表達(dá)是一過性的,一般在活化后2~3天達(dá)到高峰,6~10天左右消失。隨著IL-2R的消失,T細(xì)胞即失去對IL-2的反應(yīng)能力。因此若要維持正常T細(xì)胞在體外長期生長,必須不斷地用絲裂原或其它刺激物去刺激T細(xì)胞,以維持IL-2R的表達(dá)。
2.誘導(dǎo)細(xì)胞毒作用
①接受了預(yù)刺激信號(hào)的CD8+T細(xì)胞可以受IL-2的作用活化為CTL,發(fā)揮細(xì)胞毒作用;在一定條件下,CD4+T細(xì)胞也可受IL-2的誘導(dǎo)而具有殺傷作用。
②NK細(xì)胞是唯一正常情況下表達(dá)IL-2R的淋巴樣細(xì)胞,因此始終對IL-2保持反應(yīng)性。然而靜止的NK細(xì)胞上只表達(dá)IL-2R的β鏈和γ鏈,對IL-2的親和力低,只能對高濃度的IL-2發(fā)生反應(yīng)。一旦NK細(xì)胞活化,就表達(dá)IL-2R的α鏈,成為高親和力的受體;大劑量的IL-2誘導(dǎo)的LAK活性主要NK細(xì)胞。
③使T細(xì)胞作NK細(xì)胞產(chǎn)生IFNγ、TNFβ和TGFβ等因子,促進(jìn)非特異性細(xì)胞毒素;還可誘導(dǎo)產(chǎn)生某些B細(xì)胞生長因子以及造血生長因子等,從而發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)作用。
3.對B細(xì)胞的作用IL-2對B細(xì)胞的生長及分化均有一定的促進(jìn)作用。活化的或惡變的B細(xì)胞表面表達(dá)高親和力IL-2R,但是密度較低;較高密度的IL-2可誘導(dǎo)B細(xì)胞生長繁殖,促進(jìn)抗體分泌,并誘使B細(xì)胞由分泌IGM向著分泌IGG2轉(zhuǎn)換。
4.對巨噬細(xì)胞的作用人類單核-巨噬細(xì)胞表面在正常時(shí)興有少量IL-2Rβ鏈的表達(dá),但是受到IL-2、IFNγ或其它活化因子作用后,可表達(dá)高親和力IL-2R。
單核-巨噬細(xì)胞受到IL-2的持續(xù)作用后,其抗原遞呈能力、殺菌力、細(xì)胞毒性均明顯增強(qiáng),分泌某些細(xì)胞因子的能力也得到加強(qiáng)。
應(yīng)用研究由于IL-2能誘導(dǎo)和增強(qiáng)細(xì)胞毒活性,應(yīng)用IL-2治療某些疾病、特別是對腫瘤治療的研究得到了廣泛開展,單獨(dú)使用IL-2或與LAK細(xì)胞等(詳見鏈接第四章)聯(lián)合使用治療腫瘤取得了一定的療效;還可望用于病毒感染、免疫缺陷病及自身免疫病的治療。
但I(xiàn)L-2的副作用也日益引起人們的注意:IL-2可引起發(fā)熱、嘔吐等一般癥狀,還可導(dǎo)致水鹽代謝紊亂和腎、肝、心、肺等功能異常;最常見、最嚴(yán)重的是毛細(xì)血管滲漏綜合征,使患者不得不中止治療。
IL-2的副作用常與IL-2的劑量及用藥時(shí)間呈相關(guān),停止用藥后癥狀多迅速減輕或消失。IL-2引起副作用的機(jī)制是多方面的,但主要是間接性的,即IL-2誘導(dǎo)產(chǎn)生的某些因子或殺傷性細(xì)胞起著重要作用;現(xiàn)已知LAK細(xì)胞可通過溶解血管內(nèi)組織而導(dǎo)致多種副作用。
給予適當(dāng)藥物(如吲哚美辛、哌替啶、對乙?;狈拥龋⒉扇÷?lián)合用藥、改進(jìn)給藥方式(如少量多次短時(shí)間輸注)和給藥途徑(如改全身用藥為腫瘤局部用藥)等將有效地減輕不良反應(yīng)。
制備方法材料和方法1.1制備粗制IL2無菌采血,肝素抗凝,用RPMI1640按1∶1將血液稀釋,然后重層于菲可液面上,以1500r/min離心30min,取白細(xì)胞層,用RPMI1640洗2次,按1~3×10細(xì)胞/ml濃度加入10%胎牛血清RPMI1640,注入一裝有磁棒的大瓶中,置37℃攪拌培養(yǎng)4天,取出,分裝于50ml離心管中,1500r/min離心20min,棄上清液,將細(xì)胞懸浮于1%胎牛血清RPMI1640培養(yǎng)液中,使細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/ml。
同時(shí)加入純質(zhì)PHA1~2μg/ml以及多種B淋巴母細(xì)胞株,使其濃度為106細(xì)胞/ml,37℃攪拌培養(yǎng)18~24h后,取出以1500r/min離心30min,取上清,用045μg濾膜過濾除菌,濾液即為粗制IL2。
制備精品IL-2
2.1硫酸銨沉淀與真空濃縮透析:在4℃下將硫酸銨粉末按50%飽和量加入上述粗制IL2中,攪拌2h,12000g離心30min,取上清液,再加入80%飽和硫酸銨,4℃過夜,次日以12000g離心30min,棄上清液,將沉淀溶于01%PEG6000的1∶2PBS溶液(pH值73)中,置真空負(fù)壓濃縮透析器中透析濃縮至所需容量。
2.2SephadexG100凝膠過濾:用2×180cm的過濾柱及PBS(同上),以80ml/h流速過濾。將各管洗脫液用紫外分光光度計(jì)280nm檢測其OD值。
同時(shí)將幾種不同分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白也用相同條件過濾及檢測其OD值,繪出IL2及標(biāo)準(zhǔn)蛋白OD值的曲線。將各管洗脫液過濾除菌后,作白細(xì)胞生物活性試驗(yàn),按試驗(yàn)結(jié)果繪出曲線,找出具有最高IL2活性的幾管洗脫液,混合后,作下一步精制。
2.3BlueSepharo層析:將上述混合后的洗脫液加入BlueSepharo柱中,流速約15ml/h,按每管10ml收集流出液,當(dāng)樣品全部流出柱中以后,用上述PBS洗滌樣品柱,再用梯度NaCl溶液(從0075mol/L至06mol/LNaCl的PBS溶液)洗脫,按2ml/管收集洗脫液。
NaCl溶液梯度及流速均由梯度混合器調(diào)節(jié)控制。洗脫完畢后,作各管OD值及NaCl濃度的測定。各管洗脫液過濾除菌后,作出生物活性測定。將峰值前后的數(shù)管洗脫液混合,即為精制的IL2。置-20℃冰箱保存。
檢定3.1活性測定用10%胎牛血清RPMI1640將上述IL2稀釋為50%、25%、125%、625%,而后再將每個(gè)百分濃度以及100%濃度的IL2倍比稀釋,自1∶2至1∶128,將每個(gè)稀釋度分別加入多孔板的孔中,每孔01ml。
然后取CT6細(xì)胞株(小鼠的IL2依賴性T細(xì)胞株),調(diào)整濃度為106細(xì)胞/ml,每孔加入01ml,同時(shí)用培養(yǎng)基代替IL2作對照。將多孔板培養(yǎng)24h后,取出按每孔1μci的濃度加H3標(biāo)記胸腺嘧啶核苷繼續(xù)培養(yǎng)4h。
取出后用MESHⅡ細(xì)胞收集器過濾洗滌細(xì)胞,用β計(jì)數(shù)器測定各孔細(xì)胞的cpm。必要時(shí)按此結(jié)果繪出曲線,確定活性單位。3.2蛋白含量測定采用分光光度計(jì),分別測得OD280及OD260,然后按下式計(jì)算:蛋白含量(mg/ml)=(144×OD280-075×OD260)×稀釋倍數(shù)。
3.3毒性試驗(yàn)及細(xì)菌檢查參考胸腺肽制備部分。
應(yīng)用領(lǐng)域臨床治療藥品說明
【中文名稱】白細(xì)胞介素-2
白細(xì)胞介素-2
白細(xì)胞介素-2(5張)
【簡寫拼音】BXBJS-2
【英文名稱】Interleukin-2
【藥物類別】免疫增強(qiáng)劑、其他抗腫瘤藥及輔助治療藥
【所屬類別】生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑
【別名】白間素,欣吉爾,T細(xì)胞生長因子,白細(xì)胞介素-2
【適應(yīng)癥】主要用于腎癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效(Rosnberg)。LAK細(xì)胞代表1個(gè)有單核巨噬細(xì)胞,B和T淋巴細(xì)胞特征的異原的細(xì)胞體。這些LAK細(xì)胞似乎對癌細(xì)胞有特異作用。此外,LAK細(xì)胞(不象T細(xì)胞)介導(dǎo)殺傷不受MHC的約束。
【藥理作用】本品可促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖與分化,誘導(dǎo)具有細(xì)胞毒樣活力的殺傷細(xì)胞,誘導(dǎo)及增強(qiáng)殺傷性T細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的活力等。
【不良反應(yīng)】常見發(fā)熱、寒戰(zhàn)等反應(yīng)。1.消化系統(tǒng):惡心、嘔吐、腹瀉、結(jié)腸局部壞死或穿孔。
2.呼吸系統(tǒng):可致間質(zhì)性肺水腫、呼吸性堿中毒。
3.神經(jīng)系統(tǒng):可發(fā)生行為變化、認(rèn)知障礙。
4.心血管系統(tǒng):可出現(xiàn)低血壓、心動(dòng)過速、心律失常等癥狀。
5.血液系統(tǒng):可出現(xiàn)中性粒細(xì)胞上升,淋巴及單核細(xì)胞下降。
6.泌尿系統(tǒng):出現(xiàn)少尿、體液潴留、氨質(zhì)血癥??沙霈F(xiàn)內(nèi)分泌功能紊亂,血鈣、血磷下降,維生素C缺乏。
【規(guī)格】粉針劑:1000u,10000u,10萬u,100萬u.
【注意事項(xiàng)】癲癇、嚴(yán)重低血壓,心、腎功能不全,高熱者禁用。孕婦、患有心臟病或肺部疾病、60歲以上者慎用。用藥期間應(yīng)定期查肝、腎功能。
作用機(jī)理1.IL-2的主要生理作用是刺激和維持T細(xì)胞的分化增殖。IL-2有關(guān)腫瘤的生物學(xué)活性包括:
(1)刺激自然殺傷(NK)細(xì)胞的增殖和活化,并增強(qiáng)其活性。
(2)誘導(dǎo)細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞,增強(qiáng)其溶細(xì)胞活性。
(3)誘導(dǎo)淋巴因子活化殺傷(LAK)細(xì)胞。LAK細(xì)胞具有廣譜的抗腫瘤活性,可以溶解多種腫瘤細(xì)胞。
IL-2不僅是產(chǎn)生LAK細(xì)胞的必需淋.巴因子,而且在它的存在下還能維持LAK細(xì)胞的增殖和長期生長,因此,在臨床抗腫瘤治療時(shí)往往把IL-2和IAK細(xì)胞同時(shí)給予,這就是惡性腫瘤的過繼免疫性治療(adoptive?immune?therapy,AIT)。
(4)刺激腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(TIL)的增生并增強(qiáng)其活性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明,TIL較LAK細(xì)胞的抗腫瘤活性高50~100倍。
(5)不僅能促進(jìn)T細(xì)胞增殖,且對細(xì)胞有促增殖和促分化作用。
在腫瘤治療的動(dòng)物模型中已證明,當(dāng)T細(xì)胞中介抗瘤反應(yīng)強(qiáng)烈時(shí),很低量的IL-2已足以激化抗瘤作用;但當(dāng)T細(xì)胞中介的抗瘤反應(yīng)很弱時(shí),則需要很高劑量的IL-2。
低劑量可以顯著地刺激T細(xì)胞,而激活NK及LAK細(xì)胞則要求很大劑量。因IL-2不能直接抗癌,用藥目的是最大限度地興奮免疫機(jī)制,以加強(qiáng)抗癌作用。
適應(yīng)癥1.腎癌、惡性黑色素瘤、結(jié)腸癌等。
2.與LAK、手術(shù)、放療、化療相結(jié)合用于小腦星形細(xì)胞瘤、舌癌、喉癌、鼻咽癌、肝癌、肺癌和胃癌手術(shù)轉(zhuǎn)移的患者。
3.癌性胸腹水。
因癌癥患者IL-2的產(chǎn)生能力低下,注入IL-2可激活體內(nèi)免疫活性細(xì)胞而產(chǎn)生抗癌作用。
且給IL-2的途徑不同所產(chǎn)生的抗癌效果也不同。迄今臨床應(yīng)用表明,對于中、晚期惡性腫瘤病人,經(jīng)常規(guī)手術(shù)、化療、放療無效或現(xiàn)仍缺乏有效療法者,采用IL-2和LAK治療,可獲一定客觀療效。
用法用量①皮下注射:IL-2,20萬~40萬IU/m加入無菌注射用水2m1溶解,每日1次,每周連用4日,4周為1個(gè)療程。
②靜脈滴注:IL-2,20萬~40萬IU/m,加人生理鹽水500ml,靜脈滴注2~3小時(shí),每日1次,每周連用4日,連用4周為1個(gè)療程。
③腔內(nèi)灌注:先盡量抽去腔內(nèi)積液或插管引流,再將IL-240萬~50萬IU/m加入生理鹽水20ml注入,每周1~2次,每3~4周為l療程,如療程中積液消失,宜中止治療。
④瘤內(nèi)或瘤周注射:IL-2,10萬~30萬IU,加入生理鹽水3~5ml,分多點(diǎn)注射到瘤內(nèi)或瘤體周圍,每周2次或2次以上,連用2周為1個(gè)療程。
2.IL-2LAK細(xì)胞的用法IL-2的劑量及用法與上述IL-2的靜脈或皮下給藥途徑相同。在接受了IL-2靜脈或皮下注射共2天,靜脈抽血制備自體LAK并回輸給病人,全療程回輸LAK細(xì)胞平均數(shù)為1.2×10;
通過血細(xì)胞分離器分離血淋巴細(xì)胞制備的自體LAK,全療程LAK細(xì)胞回輸?shù)钠骄鶖?shù)為5.4×10;個(gè)別病例接受異體LAK細(xì)胞回輸,全療程LAK細(xì)胞回輸平均數(shù)為6.1×10。
動(dòng)力學(xué)IL-2在體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)符合二室模型。其血漿分布時(shí)相半衰期為6~13分鐘,β清除時(shí)相半衰期為30~120分鐘。肌內(nèi)注射IL-2的生物可利用率為37%(15%~64%)。IL-2的總體清除率為120ml/min,腎臟是主要的清除途徑。
不良反應(yīng)1.IL-2的不良反應(yīng)通常與劑量、用藥間隔、輸注速度和療程長短有關(guān)。減少劑量可望降低其不良反應(yīng)發(fā)生率。局部或靜脈外途徑用藥的副作用多為輕至中度。
2.大劑量IL-2相關(guān)的劑量限制性不良反應(yīng)最常為低血壓、水腫和腎功異常。低血壓系血流動(dòng)力學(xué)改變所致,若平均動(dòng)脈壓下降2.7~4.0kPa,則需擴(kuò)容治療,只有少數(shù)患者需用升壓藥物。
水腫原因與毛細(xì)血管滲漏綜合征有關(guān)。腎臟損害表現(xiàn)為氮質(zhì)潴留、血肌酐升高。IL-2對腎細(xì)胞癌患者的腎毒性并不比其他腫瘤明顯。
3.IL-2最常見的一般不良反應(yīng)包括畏寒、發(fā)熱、乏力、厭食、惡心、嘔吐、腹瀉、皮疹等。預(yù)防性給予撲熱息痛或非類固醇類抗炎藥可減少發(fā)熱的發(fā)生率和減輕癥狀。皮疹可用抗組胺治療。
4.IL-2加用LAK細(xì)胞時(shí),并不增加單用IL-2所伴隨的治療相關(guān)毒性。靜注LAK細(xì)胞可引起寒戰(zhàn)、發(fā)熱,靜注度冷丁(一次25~50mg)可奏效。一般不主張使用皮質(zhì)激素,因其可影響LAK細(xì)胞的活性。
上述不良反應(yīng),患者多能耐受,且均為暫時(shí)性和可逆的,停止治療后可很快消失。
注意事項(xiàng)與療效評價(jià)在4℃儲(chǔ)存。
1.應(yīng)用IL-2可明顯提高患者細(xì)胞免疫功能,改善其生活質(zhì)量和預(yù)后。
2.對癌性胸水有效率68%(28/41),癌性腹水有效率67%(4/6)。
3.瘤內(nèi)或瘤周注射時(shí),對喉癌、黑色素瘤、食管癌的原發(fā)性和轉(zhuǎn)移癌的有效率為33%(9/27)。
4.IL-2LAK細(xì)胞的用法,對晚期腎癌的有效率為22%(5/23),黑色素瘤有效率23%(21/90)。
參考值IL-2R:ELISA為<200U/ml
臨床意義白介素2主要由活化的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生的具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子。
是所有T細(xì)胞亞群的生長因子,并可促進(jìn)活化B細(xì)胞增殖,故為調(diào)控免疫應(yīng)答的重要因子,也參與抗體反應(yīng)、造血和腫瘤監(jiān)視。21世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃對于白介素2的研究取得了突破性的進(jìn)展。
IL-2R:對急性排斥反應(yīng)和免疫性疾病有診斷意義,可作為病情觀察和藥效監(jiān)測的一項(xiàng)指標(biāo)。
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