
中國臨床醫學
2012
年
12
月
第
19
卷
第
6
期
Chinese
Journal
of
Clinical
Medicine
,
2012.Vol.19
,
No.6
論著
還原型谷胱甘肽對大鼠急性肺損傷的保護作用
劉振威1
李玉霞1
方閱1a
高風英2
(
1.
上海交通大學附屬第一人民醫院呼吸科
,a藥劑科
,
上海
200080
;
2.
上海市建工醫院呼吸科
,
上海
200083
)
摘要
目的
:
研究還原型谷胱甘肽對大鼠急性肺損傷
(
acute
lun
g
in
j
ur
y
,
ALI
)
的保護作用
。
方法
:
SD
大鼠
24
只
,
隨機分為假
手術組
、
模型對照組和研究組
。
模型對照組和研究組制作失血性休克模型
,
造成
ALI
,
然后在
20
min
內復蘇
,
研究組復蘇時應
用還原型谷胱甘肽
;
假手術組只進行相應的手術操作
。
測定各組大鼠動脈血漿中腫瘤壞死因子
-
(
tumor
necrosis
factor
-
,
TNF
-
)
含量
、
支氣管肺泡灌洗液
(
bronchoalveolar
lava
g
e
fluid
,
BALF
)
中巨噬細胞
(
p
ulmonar
y
alveolar
macro
p
ha
g
es
,
PAM
)
和
中性粒細胞
(
p
ol
y
mor
p
honuclear
leukoc
y
te
,
PMN
)
總數
、
BALF
中蛋白含量和肺組織中超氧化物歧化酶
(
su
p
eroxide
dismutase
,
SOD
)
含量
;
計算肺組織含水率
;
光鏡下觀察肺組織形態學改變
。
結果
:
與假手術組比較
,
復蘇后模型對照組
、
研究組血漿中
TNF
-
含量
、
BALF
中的蛋白含量和
PMN
總數
、
肺組織含水率顯著升高
,
SOD
含量顯著降低
,
但研究組的變化程度均顯著小
于模型對照組
。
光鏡下可見
,
模型對照組肺組織間質水腫
、
細考研歷年錄取分數線 胞浸潤明顯
,
而研究組肺組織的上述改變較輕
。
結論
:
還原型谷
胱甘肽對
SD
大鼠的急性肺損傷具有保護作用
。
關鍵詞
還原型谷胱甘肽
;
急性肺損傷
;
保護作用
中圖分類號
R563
文獻標識碼
A
Protective
Effects
of
Reduced
Glutathione
on
稻草人讀后感
Acute
Lun
g
In
j
ur
y
in
Rats
LIU
Zhenwei1
LI
Yuxia1
FANG
Yue1a
GAO
Fen
gy
in
g2
1.De
p
artment
o
f
Res
p
irator
y
Medicine
,aDe
p
artment
o
f
Medication
,
First
Peo
p
le
’
s
Hos
p
ital
A
ff
iliated
to
Shan
g
hai
Jiaoton
g
Universit
y
,
Shan
g
hai
200080
,
China
;
2.
De
p
artment
o
f
Res
p
irator
y
Medicine
,
Shan
g
hai
Jian
g
on
g
Hos
p
ital
,
Shan
g
hai
200083
,
China
Abstract
Ob
j
ective
:
To
stud
y
the
p
rotective
effects
of
reduced
g
lutathione
on
acute
lun
g
in
j
ur
y
(
ALI
)
in
rats.Methods
:
Twen
-
t
y
-
four
SD
rats
were
divided
into
3
g
rou
p
s
randoml
y
.One
g
rou
p
was
non
-
o
p
eration
g
rou
p
.Hemorrha
g
ic
shock
models
were
p
erformed
in
both
model
control
g
rou
p
and
stud
y
g
rou
p
.Then
the
shock
rats
were
resuscitated
in20
min.Reduced
g
lutathione
was
used
in
stud
y
g
rou
p
durin
g
resuscitation.The
arterial
blood
of
rats
was
taken
in
different
time
to
determine
the
p
lasma
tumor
necrosis
factor
-
(
TNF
-
)
concentration.The
amount
of
p
ulmonar
y
alveolar
macro
p
ha
g
es
(
PAM
)
and
p
ol
y
mor
p
honucle
-
ar
leukoc
y
tes
(
PMN
)
in
bronchoalveolar
lava
g
e
fluid
(
BALF
)
were
counted
at
the
end
of
ex
p
eriment.At
the
same
time
,
the
p
rotein
contents
in
BALF
and
su
p
eroxide
dismutase
(
SOD
)
contents
in
lun
g
tissues
were
measured
,
and
the
water
ratio
of肉絲湯
lun
g
tissues
was
calculated.The
histolo
g
ical
mor
p
holo
gy
of
lun
g
tissues
were
examined
under
o
p
tical
microsco
p
e.Results
:
Com
-
p
ared
with
non
-
o
p
eration
g
rou
p
,
in
stud
y
g
rou
p
and
model
control
g
rou
p
,
TNF
-
concentration
,
the
p
rotein
contents
and
the
a
-
mount
of
PMN
in
BALF
,
and
the
water
ratio
in
lun
g
tissues
went
u
p
obviousl
y
after
resuscitation
;
SOD
contents
of
lun
g
tissues
went
down
,
more
si
g
nificantl
y
in
model
control
g
rou
p
.Lun
g
tissue
edema
and
neutro
p
hil
accumulation
have
be
observed
both
in
model
control
g
rou
p
and
stud
y
g
rou
p
,
but
the
chan
g
es
in
the
latter
were
less
serious.Conclusions
:
Reduced
g
lutathione
has
p
rotective
effects
on
ALI
in
SD
rats.
Ke
y
Words
Reduced
Glutathione
;
Acute
lun
g
in
j
ur
y
;
Protective
effect
基金項目
:
上海市虹口區衛生局課題
(
編號
:
1202
-
09
)
通訊作者
高風英
,
E
-
mail
:
g
aofen
gy
in
g
3366
@
163.com
失血性休克時發生的急性肺損傷
(
acute
lun
g
in
j
ur
y
,
ALI
)
嚴重時可發展為急性呼吸窘迫綜合征
(
acute
res
p
irator
y
distress
s
y
ndrome
,
ARDS
),
威脅
患者的生命
。
目前
,
還原型谷胱甘肽已被廣泛用應
于心肌梗死
、
腦缺血和急性腦損傷等的治療[
1
]。
但
是
,
還原型谷胱甘肽對
ALI
是否具有保護作用
,
尚
鮮見相關文獻報道
。
本研究通過建立失血性休克的
大鼠模型
,
造成
ALI
,
復蘇時應用還原型谷胱甘肽
,
然后檢測大鼠動脈血漿中腫瘤壞死因子
-
(
tumor
necrosis
factor
-
,
TNF
-
)
和肺組織中超氧化物歧化
酶
(
su
p
eroxide
dismutase
,
SOD
)
含量以及支氣管肺
泡灌洗液
(
bronchoalveolar
lava
g
e
fluid
,
BALF
)
中
肺泡巨噬細胞
(
p
ulmonar
y
alveolar
macro
p
ha
g
es
,
506
Chinese
Journal
of
Clinical
Medicine
,
2012.Vol.19
,
No.6
中國臨床醫學
2012
年
12
月
第
19
卷
第
6
期
PAM
)、
中性粒細胞
(
p
ol
y
mor
p
honuclear
leuko
-
c
y
tes
,
PMN
)
總數和蛋白質含量
,
并觀察肺組織含水
率
、
組織形態學等指標的變化
,
探討還原型谷胱甘肽
對
ALI
的保護作用
。
1
資料與方法
1.1
實驗動物
取健康
SD
大鼠
(
復旦大學上海醫
學院動物中心
)
24
只
,
體質量
(
276.51.5
)
g
,
雌雄
各半
。
1.2
試劑與藥品
TNF
-
測定試劑盒
(
中國人民
解放軍第四軍醫大學免疫學教研室
,
批號
20110113
);
SOD
測定試劑盒
(
南京建成生物工程研
究所
,
批號
20110108
);
還原型谷胱甘肽
(
北京協和
藥廠
,
批號
20040223
,
每支
600
m
g
)。
1.3
儀器
AXSYM
全自動酶免分析儀
(
美國雅培
公司
);
AU640
全自動生化分析儀
(
日本奧林帕斯公
司
);
SF23000
全自動血球計數儀
(
日本東亞公司
);
ML780
型
MacLab
生理記錄儀
(
澳大利亞
ADI
公
司
);
DX51
光學顯微鏡
(
日本奧林帕斯公司
);
H27500
透射電鏡
(
日本東芝株式會社
)。
1.4
研究方法
1.4.1
失血性休克
SD
大鼠模型的建立
按照
Wi
gg
ers
改良法建立失血性休克模型[
2
]。
通過三通
接頭連接生理記錄儀
,
記錄平均動脈壓
(
MAP
)
和心
率
(
HR
)。
1.4.2
實驗分組
將
24
只大鼠隨機分為假手術
組
、
模型對照組和研究組
,
每組
8
只
,
試驗前
12
h
禁
食
、
禁飲
。
失血性休克后復蘇時
,
模型對照組靜脈滴
注
0.9%
氯化鈉液
,
1.5
mL
/
k
g
;
研究組靜脈滴注還
原型谷胱甘肽
,
40
m
g
/
k
g
;
假手術組只進行手術操
作
,
不建立休克模型
,
并靜脈滴注
0.9%
氯化鈉液
,
1.5
mL
/
k
g
。
1.5
觀察指標
1.5.1
TNF
-
含量
于大鼠休克前
、
休克
90
min
、
復蘇
1
h
末
、
復蘇
3h
末
,
分別經股動脈取血
1壁紙手機高清圖片
mL
,
離心后分離血漿
,
-70℃
保存
,
按照
TNF
-
測定試
劑盒說明書操作
。
1.5.2
BALF
中
PAM
、
PMN
和蛋白含量
實驗結
束即刻
,
迅速剖胸取左肺
,
用
0
~
4℃0.9%
氯化鈉液
8
mL
灌洗支氣管和肺
,
灌洗
5
次
,
并收集灌洗液
。
甲紫染色后計數
BALF
中吞噬細胞總數
;
用瑞氏液
染色計數
PAM
和
PMN
,
計算百分率
,
將百分率乘
以細胞總數即得到細胞的絕對數
。
將
BALF
以
1500
r
/
min
離心
5
min
,
取上清液用考馬斯亮蘭法
測定其中蛋白含量
。
1.5.3
SOD
含量
取肺組織勻漿
,
按試劑盒說明
書操作
。
1.5.4
肺組織含水率
含水率
=
(
濕質量
-
干質
量
)/
濕質量
100%
,
計算肺組織的含水率
。
1.5.5
形態學觀察
在光鏡下觀察肺組織形態學
變化
。
1.6
統計學處理
采用
SPSS
10.0
軟件包進行統
計學分析
。
全部數據采用均數
標準差
(
珚
xs
)
表
示
,
組間比較采用
t
檢驗
。
P
<
0.05
為差異有統計
學意義
。
2
結
果
2.1
血漿
TNF
-
含量的變化
休克前
3
組大鼠
TNF
-
含量見表
1
。
2.2
BALF
中細胞數量
、
蛋白含量的變化
見表
2
。
表
1
3
組血漿
TNF
-
含量比較
(
n
g
/
L
)
組別
n
失血性休克前失血性休克后
90
min
復蘇后
1
h
復蘇后
3
h
假手術組
8
53.883.56
73
.5611.13a84.76312.65a97.8514.83b
模型對照組
8
58.765.38
159
.1512.34b
,
c
236.5641.50b
,
c
470.7940.94b
,
d
研究組
8
54.374.85
135
.5812.12b
,
c
197.8311.45b
,
c
,
e
323.5418.32b
,
d
,
f
注
:
與失血性休克前比較
,aP
<
0.05
,b
P
<
0.01
;
與假手術組比較
,c
P
<
0.05
,d
P
<
0.01
;
與模型對照組比較
,e
P
<
0.05
,f
P
<
0.01
表
2
3
組
BALF
中細胞數量和蛋白含量比較
組別
n
巨噬細胞數量
(
109)
中性粒細胞數量
(
109)
蛋白含量
(
g
/
L
)
假手術組
8
2.190.19
0.250.02
4.330.19
模型對照組
8
1
.180.15b
2.390.19b
7.010.23a
研究組
8
1.190.18
1
.390.21d
5.410.21c
注
:
與假手術組比較
,aP
<
0.05
,b
P
<
0.01
;
與模型對照組比
較
,c
P
<
0.05
,d
P
<
0.01
2.3
肺組織
SOD
含量
、
含水率的比較
見表
3
。
表
3
3
組復蘇后肺組織
SOD
含量和含水率比較(
珚
xs
,
n=8
)
組別
n
SOD
含量
(
nU
/
m
g
)
含水率
(
%
)
假手術組
8
7.370.38
70.231.90
模型對照組
8
4.010.34a79.450.99a
研究組
8
6
.350.12b
75.090.96b
注
:
與假手術組比較
,aP
<
0.01
;
與模型對照組比較
,b
P
<
0.01
2.4
肺組織形態學觀察
光鏡下可見假手術組肺
組織的肺泡壁薄
,
相鄰肺泡僅隔以薄層間質
;
模型對
照組肺組織間質增厚
,
粒細胞浸潤
,
部分區域呈肺不
606
中國臨床醫學
2012
年
12
月
第
19
卷
第
6
期
Chinese
Journal
of
Clinical
Medicine
,
2012.Vol.19
,
No.6
張狀態
;
研究組肺組織間質增厚以及粒細胞浸潤的
程度顯著輕于模型對照組
。
3
討
論
Bhetia
等[
2
]研究證實
,
體內
TNF
-
水平的升高
是失血性休克導致
ALI
的重要因素
,
而且其升高程
度與
ARDS
的發生有一定的相關性
。
本研究顯示
,
SD
大鼠失血性休克后血漿
TNF
-
含量持續升高
,
以復蘇后
3
h
最為明顯
;
應用還原型谷胱甘肽后
,
血
漿
TNF
-
升高幅度降低
,
提示還原型谷胱甘肽在一
定程度上抑制了
TNF
-
的合成或釋放
,
進而對肺損
傷起到保護作用
。
本研究中假手術組的
TNF
-
含
量也出現小幅度上升
,
可能因手術操作使局部組織
損傷所致
。
Bhatia
等[
2
]研究認為
,
PMN
在肺泡腔的
大量積聚是
ALI
的特征性變化
,
檢測
BALF
中的
PMN
數量可以直接反映
PMN
浸潤的程度
。
肺毛
細血管通透性增高是肺損蠶食的意思 傷后的基本病理改變
,
表
現為血管中水和蛋白漏出血管壁
,
故測定
BALF
中
的蛋白含量以及肺組織含水量可在一定程度上反映
肺血管內皮細胞的損傷
。
本研究發現
,
復蘇后模型
對照組
、
研究組肺組織
BALF
中
PMN
的數量
、
蛋白
含量
、
含水率高于假手術組
,
表明失血性休克導致了
肺水腫等
ALI
的表現
,
這與光鏡下觀察到的肺間質
增寬
、
粒細胞浸潤等組織學變化相符
;
還原型谷胱甘
肽能夠顯著改善肺水腫
。
SOD
可以清除氧自由基
,
保護細胞免受損傷
。
應用氧自由基清除劑可以降低
多器官功能衰竭的發生率[
3
-
4
]。
測定
SOD
活力可反
映組織抗氧化能力
。
本研究中
,
模型對照組肺組織
中
SOD
活力較假手術組低
,
提示肺損傷過程中自由
基清除不足
,
故組織細胞損傷較重
。
綜上所述
,
還原型谷胱甘肽因能夠抑制
ALI
時血
漿
TNF
-
含量的升高
,
減輕
PMN
浸潤
,
清除氧自由
基
,
減輕肺組織水腫程度
,
從而對
ALI
起到有效的保護
作用
。
參考文獻
[
1
]
Wu
J
,
Ferrance
JP
,
Landers
JP
,
et
al.Inte
g
ration
of
a
p
reco
lumn
fluoro
g
enic
reactio左眉尾有痣 n
,
se
p
aexcel宏 ration
,
and
detection
of
re
-
duced
g
lutathione
[
J
]
.Anal
Chem
,
2010
,
82
(
17
):
7267
-
7273.
[
2
]
Bhatia
M
,
Zemans
RL
,
Je
y
aseelan
S
,
et
al.Role
of
chemo
-
kines
in
the
p
atho
g
enesis
of
acute
lun
g
in
j
ur
y
[
J
]
.Am
J
Res
p
ir
Cell
Mol
Biol
,
2012
,
46
(
5
):
566
-
572.
[
3
]
Alastair
G
,
Pr巨蟹座女星 oudfoot
,
Dann
y
F
,
et
al.Human
models
一袋干糧的故事
of
acute
lun
g
in
j
ur
y
[
J
]
.Dis
Model
Mech
,
2011
,
4
(
2
):
145
-
153.
[
4
]
Perl
M
,
Lomas
-
Neira
J
,
Venet
F
,
et
al.Patho
g
enesis
of
indi
-
rect
(
secondar
y
)
acute
lun
g
in
j
ur
y
[
J
]
.Ex
p
ert
Rev
Res
p
ir
Med
,
2011
,
5
(
1
):
115
-
126.
706
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