第三章TOC分析方法的驗證
一、分析方法驗證的要求
分析方法學驗證包括線性、檢測限( MD )、定量限(COG)、準確度、精確度以及擦拭回收率。
Refrence:USP<1226>and ICHQ2(R1)
?只有在分析方法是可靠的和可重復的時，驗證才可通過。
?USP<1226>與ICH Q2(R1)闡述了分析方法的驗證程序。
二、TOC分析方法驗證的前提：TOC分析儀的性能確認
?分析儀器確認是一個過程，確保對特定測試使用分析方法是能符合目標用途的。
?根據cGMP規定，“企業所使用的檢測方法的準確度、靈敏度(檢測限)、專屬性和重現性(精確度)必須確立并有文件證明。”在這種情況下用TOC法進行清潔過程驗證的測試之前，對分析儀器進行嚴格的確認就尤為重要。此方法包括由USP<1058>所建議的安裝確認、運行確認和性能確認(IQ/OQ/PQ)。
《中國藥典》(2015版)四部0682 制藥用水中總有機碳測定法
三、系統適用性試驗
要求：響應效率應為85%～115%。
試劑：
?蔗糖標準溶液(含碳量0.500mg/L)
?1，4-對苯醌標準溶液(含碳量0.500mg/L)
四、分析方法驗證的要點
?專屬性(%碳)
?線性度：5點
?范圍：最高和最低之間的濃度覆蓋域
?準確度：(總有機碳)
?精確度：%RSD百分標準偏差
?最低檢測限(LOD)、最低定量限(LOQ)
?可靠性：在不同的使用條件
五、TOC方法驗證的具體內容
?專屬性
專屬性：專屬性是能能非常準確地確定所存被測物質。ICH Q2(R1)如能對目標物質進行準確的定量檢測，有機碳，就顯示出這分析方法對有機碳具有專屬性。這可通過檢測具有代表性的一些有機——可選一些含有除碳、氫、氧以外元素的有機物，比如含有氯、硫、氮或磷的有機物。
Example：FDA缺陷例子
“Your firm failed to establish and follow writtenprocedures to assure the cleaning and maintenance of equipment ud in themanufacturing of drug products. Forexample, cleaning validation for the CIP process vesl, which is utilized inthe aptic formulation of the CIP process vesl, which is utilized in theaptic formulation of trivalent bulk influenza vaccine… The study did notinclude swab sampling of the product transfer lines.”
貴司未能建立和遵循已寫的操作規程，在藥品制造中確保清潔和維護設備。例如，流感疫苗的CIP過程罐清潔驗證未包括對生產線的棉簽取樣實驗。
?線性和范圍
線性：是指測定結果與試樣中被測物濃度呈正比關系的程度。
范圍：是指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區間。
?定量檢查應至少測試5個濃度范圍并且包含清潔的最低限和最高限度。
?線性的相關系數應不低于0.98%。
?濃度范圍應達到殘留物限度的50%-150%。
?淋洗法和棉簽法用于限度檢查時不需做線性/范圍驗證。
Example：TOC測量值和目標物濃度的相關性
參考文獻：《藥物分析雜志》2013.33.(3)
?精密度和準確度
要顯示TOC法的精密度和準確度，以含10-6碳的標準品溶液連續檢測10次。這里選用此碳濃度來評估精密度和準確度是因為通常殘留物的TOC限度一般為此水平左右。在此TOC水平，精密度為1%，準確度為±5%。
?回收率試驗
確定合適取樣方法(沖洗方法、擦拭方法、取樣人員的操作培訓及檢測方法)可使污染物/殘留被有效收回，最終為驗證方法提供證據。
通過回收率試驗驗證取樣過程的回收率和重現性。
通常取樣回收率和檢驗方法回收率結合進行。
?取樣方法
?擦拭法回收率
可接受標準回收率：≥50%
重現性：≤20%
步驟舉例：
1、準備1塊500 mm ×500 mm的平整光潔的不銹鋼板。
2、在鋼板上用鋼錐劃出400 mm ×400 mm的區域每隔100 mm劃線形成16塊100 mm ×100mm的方塊。
3、配制濃度為160 mg/L的妥布霉素水溶液定量裝入噴霧器。
4、將約10 mL溶液盡量均勻地噴在400 mm ×400 mm的區域內。
5、根據實際噴出的溶液量計算單位面積上的妥布霉素量約1μg/100mm2。
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6、自然干燥或用電吹風溫和地吹干不銹鋼板。
7、用注射用水潤濕棉簽按擦拭取樣操作規程擦拭鋼板每擦一個方塊，100 cm2換一根棉簽。在鋼板上取均布的8個方塊。
8、將棉簽分別放入試管中定量加入注射用水10 mL，加塞輕搖試管并放置10 min，使物質溶出。然后將溶液稀釋10倍。
9、使用TOC分析儀測定此清潔驗證水樣的TOC值。
