鼠源單抗IgM的純化
做單抗大家都比較“歧視”IgM亞型，上文我們也討論了如何盡量避開IgM亞型，如果我們躲之不及怎么辦呢？
其實，IgM類單抗也沒有你們想的那么糟糕，純化也沒有你們想象的那么困難；小福就來給大家簡單說說。
IgM屬于優球蛋白，什么是優球蛋白呢？百度百科是這么講的：低離子強度下或在蒸餾水中不溶解的血漿球蛋白稱為優球蛋白；一般情況下，血清蛋白質在蒸餾水或低鹽離子白蛋白為可溶，球蛋白一般不溶，而偏偏那部分“不聽話的”，能溶解的球蛋白我們稱其為偽球蛋白，大部分不溶解的那部分稱其為優球蛋白。
我們從以上的描述中可以知道，IgM有不溶于水或者低離子溶液的特性，所以，對付IgM純化第一招：去離子水透析法。把腹水裝到透析袋里面放在去離子水里面透析。當然，透析之前，需要把腹水里面的降植烷/液體石蠟等這些油脂類去除，去除的辦法是二氧化硅粉末，同時要去除不溶物。我們透析完成之后，IgM在沉淀里面，需要用PBS等溶液復溶，并結合其他的手段進一步處理；在蛋白純化領域，一步法親和層析不是萬能鑰匙。
IgM純化第二招：抗IgM特異性親和層析法。
此法成本偏高，需要購買高品質的抗IgM亞型的抗體幾毫克，將這些抗體通過共價偶聯結合到活性瓊脂糖凝膠上，制備成親和柱;親和柱制備好以后，其純化IgM的方法，與Protein A，Protein G純化抗體方法相同，此處不贅述；至于抗體共價偶聯到活性瓊脂糖凝膠上的步驟與方法，在福因德官網都可以找到，如果還有疑問，可以與我們技術支持聯系。
做蛋白和抗體純化比較少的實驗者，往往只了解親和層析純化法，因為寫方法簡單，對于大部分的蛋白和抗體來說，純化步驟比較穩定，純化工藝不需要詳細摸索（其實，這是一個誤區，如果項目一個抗體或者蛋白純化好，純化方案摸索和優化少不了）。
IgM純化第三招：羥基磷灰石（HAP）層析法
羥基磷灰石是什么東西？ 它的英文：Hydroxyapatite；分子式Ca10(PO4)6(OH)2，是磷酸鈣的晶體；晶體表面有大量帶正電荷的Ca2+離子和帶負電的PO43-離子，還有OH集團；這些離子一般不與小分子結合，只與生物大分子結合，并且結合力最強，磷酸鹽濃度梯度洗脫，可以把不同的抗體組分分別洗脫；對于抗體純化而言，用pH6.8的磷酸鈉緩沖液濃度從10mM到350mM,最后洗脫峰是IgM，純度可達93%以上。
羥基磷灰石（HAP）層析法具體實施步驟，我們在之后分享
IgM純化其他招：粗沉淀加上分子篩（顆粒排阻法）
沉淀法有硫酸銨沉淀和PEG沉淀，等等。
硫酸銨沉淀沒什么好說的，50%飽和硫酸銨沉淀。但是這個飽和硫酸銨的配制和滴加還是很有技巧的，保持4℃。
PEG沉淀法這個大家只聽說，很少使用；我們簡單介紹下，分子量選擇5000-7000的，配成30%的溶液，逐滴加入經過粗處理的腹水溶液(等體積PBS與腹水混合)中至終濃度4%，滴加過程在磁力攪拌器上進行。
最后再說分子篩（顆粒排阻法）
分子篩原理是：凝膠顆粒直徑大小不同，顆粒內部有很多孔徑，分子量小于顆粒孔徑的就會“鉆”入顆粒內部，多走一程，分子量較大的，”鉆不進去“，會從顆粒之間的間隙通過，由于走的路程不一樣，所以每個分子從柱子底部流出來的時間也不一樣，接收不同的峰值，不同的蛋白分子處于相應峰值內。
以上的方法，似乎都很折騰，一步到位似乎不行，這個時候你不妨試試基因工程抗體，將細胞株的抗體基因都調取出來，構建抗體表達載體，利用哺乳動物細胞表達系統無血清表達抗體，抗體非常容易純化，最高每升可以達到幾百號毫克到克級。
在不斷解決合作伙伴的技術難題的時候，針對魚類IgM的純化，我們研發出了好用的試劑：魚IgM純化試劑盒（Cat No.:IGP0021K）,小伙伴們不妨試試。
