羥基磷灰石填料
——純化蛋白、多肽、核酸
分離機理：羥基磷灰石具有獨特的分離機理，是唯一直接用于蛋白質和核酸純化的無機層析填料，高度耐堿，生物安全性最高。其中磷酸離子與帶正電的蛋白質以離子鍵結合，具有離子交換特性，可由NaCl濃度梯度或磷酸鈉濃度梯度洗脫，其中的Ca2＋離子與帶負電蛋白質的自由羧基以金屬螯合方式結合，該結合方式對NaCl不敏感，可由磷酸鈉濃度梯度洗脫。因此該填料既可以用磷酸鈉單梯度洗脫，也可以采用NaCl梯度洗脫后以低濃度磷酸鈉緩沖液平衡，再以磷酸鈉濃度梯度洗脫的雙梯度洗脫模型，以達到更高的分辨率。
羥基磷灰石類型選擇：羥基磷灰石因陶瓷化工藝不同分為2種類型：I型和II型，I型對蛋白質具有更大的保留，對普通蛋白質具有更大的動態載量，主要純化大部分蛋白質（分子量一般在100kd一下）；II型由于孔徑較I型大，因而對抗體和部分重組疫苗等大分子量蛋白質的動態載量更高，而對HSA幾乎無保留，因而更適合于抗體的純化，同時II型對核酸具有更大的保留，能夠分辯單、雙鏈、超螺旋等各種高級結構的DNA，因而也適合純化核酸。
●高動態載量、高流速、高產率
●更好的化學穩定性和機械強度，更長的壽命
●剛性結構，保證了其在PH>的范圍內使用，可用NaOH清洗
●良好的批次重現性，容易放大化
●可隨意選用陽離子和金屬螯合兩個模式分離純化蛋白或其他分子
●能用于層析系統、重力流柱、AcroPrep多孔板等
應用
●堿性蛋白的純化（免疫球蛋白）
●抗體純化
●酸性蛋白（白蛋白）
●去除DNA和內毒素
●純化磷多肽
●分離純化復雜的蛋白混合物
●純化質粒
流動相：平衡液：5mM的磷酸鈉緩沖液，PH=
洗脫液：的磷酸鈉緩沖液，或2M的氯化鈉緩沖液，PH=
使用步驟：建議使用干法填柱
Step 1:tup take a cell lysate and draw it into the syringe through the tubing tip
Draw any residual sample into syringe
Attach syringe and tubing tip to a pre-equilibrated
Bio-canal column
步驟1：平衡安裝
首先用至少5倍柱體積的平衡液預平衡柱子，將細胞裂解吸入注射器，并安裝在柱頭上。
Step 2:binding sample
Slowly load the lysate onto the column
The proteins will bind to the resin and non-proteins will flow through the column
步驟2：上樣
將細胞裂解液慢慢注入柱子中，蛋白會結合在柱子中的填料中，非蛋白將會流出柱子
Step 3:washing column
After loading the column,add a syringe with wash buffer
Wash any remaining non-specifically bound proteins off the column with wash buffer
(collect fraction3 if needed)
步驟3：淋洗柱子
上樣后，用淋洗液（一般為平衡液）將所有的非蛋白清洗分離出柱子。如果上樣量超出柱子的載樣量，如果需要，可以考慮收集。
Step 4:elution
Attach a syringe with elution buffer
Slowly elute your protein with elution buffer
This will allow you to capture>90% of your protein in the first elution fraction
步驟4：洗脫
選擇合適的洗脫液，用注射器將目標蛋白洗脫并收集，如果需要，可以自行配制不同濃度梯度的洗脫液進行必要的梯度洗脫。
保存：長時間應保存在1MNaOH溶液中，至于室溫密封保存
注意：長時間保存在1MNaOH溶液中的層析柱，上樣前一定注意PH值，建議使用洗脫液將PH值洗下來，再使用平衡溶液平衡后上樣。
建議使用標準層析設備（如AKTA）以達到更好的分離純化效果
