大腸桿菌生理生化鑒定路線：
氧化酶 （-）→苯丙氨酸脫氨酶（-）→H2S（-）→DNA酶（-）→乳糖（+）→檸檬酸鹽（-）→D-阿東醇（-）→賴氨酸脫羧酶（+）→纖維二糖（-）
1、氧化酶 巴氏桿菌
1、原理：
氧化酶亦即細胞色素氧化酶，為細胞色素呼吸酶系統的終末呼吸酶，氧化酶先使細胞色素C氧化，然后此氧化型細胞色素C再使對苯二胺氧化，產生顏色反應。
2、試劑
鹽酸二甲基對苯撐二胺(或四甲基對苯撐二胺)1%水溶液于茶色瓶中在冰箱中貯存。
3、方法
在干凈培養皿里放一張濾紙，滴上二甲基對苯撐二胺的1%水溶液，僅使濾紙濕潤即可，
不可過濕，用金絲接種環(不可用鎳鉻絲)取18~24 h的菌苔，涂沫在濕潤的濾紙上，在10 s內涂抹的菌苔現紅色者為陽性，（四甲基對苯撐二胺為藍色）10~60 s現紅色者為延遲反應，60 s以上現紅色者不計，按陰性處理。
4、注意事項：
a.鹽酸二甲基對苯撐二胺溶液容易氧化，溶液應裝在棕色瓶中，并在冰箱內保存，如溶液變為紅褐色，即不宜使用。
b.鐵、鎳鉻絲等金屬可催化二甲基對苯撐二胺呈紅色反應，若用它來挑取菌苔，會出現假陽性，故必須用白金絲或玻璃棒（或牙簽）來挑取菌苔。
c.在濾紙上滴加試劑，以剛剛打濕濾紙為宜，如濾紙過濕，會防礙空氣與菌苔接觸，從而延長了反應時間，造成假陰性。
2、苯丙氨酸脫氨酶 變形桿菌
1、原理：
某些細菌（如變形桿菌）具有苯丙氨酸脫氨酶，能將苯丙氨酸氧化脫氨，形成苯丙酮酸，苯丙酮酸遇到三氯化鐵呈藍綠色。本試驗用于腸肝菌科和某些芽孢桿菌屬的鑒定。
2、培養基
酵母膏 3g
NaCl 5g
Na2HPO4 1g
DL-苯丙氨酸 2g
(或L-苯丙氨酸) 1g
蒸餾水 1000 ml
pH為7.0，分裝試管，121℃蒸氣滅菌10min,擺成長斜面。
3、試劑
10%(W/V)的FeCl3溶液
4、方法
適當濃度接種，37℃培養4h或8~24h測定。將試劑4~5滴滴到生長菌的斜面上，當斜面上和冷凝水中產生綠色時為陽性反應，即表明己形成了苯丙酮酸，不變則為陰性。
3、H2S(TSI) 變形桿菌 雞白痢沙門氏
1、原理：
有些細菌可分解培養基中含硫氨基酸或含硫化合物，而產生硫化氫氣體，硫化氫遇鉛鹽或低鐵鹽可生成黑色沉淀物。
2、培養基：
牛肉膏 7.5g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
明膠 100~120g(或瓊脂15g)
10%FeCl2 (培養基滅菌后無菌加入) 5 ml
蒸餾水 1000 ml
pH 7.0，112℃滅菌20min
在明膠培養基尚未凝固時，加入新制備的過濾滅菌的FeCl2，用無菌試管分裝，培養基高度約為4~5 cm，立即置冷水冷卻凝固。
3、方法
用穿刺法接種，30℃培養，1、3、7天，觀察，變黑者為陽性，不變為陰性。
4、注意事項
①此方法適用于腸桿菌科細菌鑒定
②在實驗過程中可用硫酸亞鐵代替氯化亞鐵
③可同時測定明膠液化，20℃培養
4、DNA酶 金黃色葡萄球菌
1、培養基
酪朊水解物 15g
大豆蛋白胨 5g
NaCl 5g
DNA 2g
甲苯胺藍 0.1g
瓊脂 15g
蒸餾水 1000 ml
除DNA和甲苯胺藍之外，加熱熔化后調pH至7.2，加入DNA和甲苯胺藍，混勻后分裝，121℃滅菌30 min
2、方法
①將培養基倒平板，點接幼齡種于培養皿上，適溫培養2天
②結果觀察：在接種部位周圍出現粉紅色暈圈為陽性，沙雷氏菌可作陽性對照
5、糖、醇發酵實驗[乳糖、纖維二糖、D-阿東醇]
1、培養基：
蛋白胨水（pH7.6） 100ml
需要的糖(醇)類 1g
1.6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1ml （或0.2%溴麝香草酚藍酒精溶液1.2ml）
制法：
1、將所需糖（醇、苷）1克，加入100ml蛋白胨水中，并按比例加入0.5%~0.7%瓊脂制成半固體培養基，加熱溶解。
2、加入1.6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1ml （或0.2%溴麝香草酚藍酒精溶液1.2ml），搖勻。
3、分裝于試管內， 10 磅高壓滅菌20 分鐘，檢驗備用。
附：蛋白胨水培養基：
蛋白胨 1 克 氯化鈉 0.5 克
蒸餾水 100ml
1、將以上成份混合，加熱溶解，校正pH 至7.4~7.6。
2、過濾、分裝試管，每管約3ml。
2、方法：
以18—24h幼齡菌種作種子，穿刺接種，每株2支。同時還要有標準株和不按種管作對
照。37℃培養1、3、5天后觀察，如指示劑變黃，表示產酸，為陽性；不變或變藍（紫）則為陰性。
6、檸檬酸鹽利用試驗 枯草芽孢桿菌
1、原理：
某些細菌能夠利用檸檬酸鈉作為碳的唯一來源和無機磷酸銨作為氨的來源，因此能夠在含有上述成分的合成培養基上生長，并且分解檸檬酸鹽最后生成碳酸鹽，使培養基變為堿性。在指示劑溴麝香草酚藍溶液的存在下，培養基由綠色變為深藍色。
2、培養基：Simmons培養基
氯化鈉 5g
硫酸鎂 0.2g
磷酸二氫銨 1g
磷酸氫二鉀 1g
檸檬酸鈉 1g
蒸餾水 1000ml
1％溴麝香草酚藍 10ml
瓊脂 20g
將除瓊脂和溴麝香草酚藍溶液處的各成分溶解后，調pH值為6.8~7.0，加入瓊脂融化，再加入溴麝香草酚藍溶液，分裝試管，經121℃滅菌15 min，制成斜面備用。
3、方法
①取待檢菌在培養基上先劃線再穿刺，37℃培養觀察2~4d
②結果判定：陽性者在培養基斜面上生長，并且Simmons培養基由草綠色變為藍色
7、賴氨酸脫羧酶
1、培養基
蛋白胨 5g
酵母膏浸 3g
葡萄糖 1g
蒸餾水 1000 ml
0.2%溴麝香草酚藍 12 ml
待測氨基酸 5g
將以上氨基酸和溴麝香草酚藍溶液外的各種成分加入蒸餾水中，加熱溶解，調pH值至6.8，加入0.2%溴麝香草酚藍溶液和待測氨基酸。
氨基酸應先溶解于NaOH溶液中，比例為0.5g L-α-賴氨酸+1.5% NaOH溶液0.5ml，再調pH至6.8，分裝于小試管內，每管1ml，121℃滅菌10min.
2、方法
用幼齡培養物作為種菌，直針接種于培養基中，上面加一層滅菌的液狀石蠟。將試管放在37℃培養4d，每天觀察結果。培養液先變黃后又變為藍色為陽性，黃色者為陰性。
