重組腸激酶使用說明

更新時間:2023-12-12 22:30:19 閱讀：評論：0

2023年12月12日發(作者：金屬分析)

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重組腸激酶使用說明

重組腸激酶使用說明貨號：E8350規格：100U保存：-20℃保存?？稍诔叵逻\輸，25℃可穩定保存一周。產品簡介：腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶。該酶經HPLC純化，純度高，特異性高，并且不含其他蛋白酶。腸激酶（EC3.4.21.9）是一個特定的蛋白酶，它可以切割前面含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-賴氨酸。腸激酶可去除位于蛋白質N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標簽。來源：重組大腸桿菌理論MW：25,850Da活性：1U定義為在25℃，12h~16h之內，將0.5mg融合蛋白在25mMTris-HClpH8.0緩沖液中的切割95%所需的酶量。產品優勢：高純度：高特異性1）特定的蛋白酶，切割前面含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-賴氨酸(DDDDK)。2）不含其他蛋白酶,無非特異性切割。圖一：SDS-PAGE檢測結果，純化的腸激酶一個單一的主帶。圖二：0.1U的EK作用于50μg底物0min,10min,20min,30min,40min,50min,60min后的SDS-PAGE分析。酶切條件：按照酶活性定義，重組EK酶切條件舉例：25mMTris-HClpH8.0體系中：融合蛋白濃度重組EK用量溫度0.1-1mg/ml（蛋白總量0.5-1.0mg）1-2U25℃過夜酶切，或完全酶切需12h-16h。常見影響腸激酶活性的因素:在＞200mM咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影響?？蓞⒄找韵峦扑]方法進行酶切：1）為獲得理想酶切結果，請將樣品透析到25mMTris-HClpH8.0緩沖液中，再進行酶切。2）若不便透析，可將樣品稀釋，咪唑含量在100mM以下，NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變（即1U酶切0.5mg蛋白）。3）如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時適當增加酶量或延長酶切時間，也可達到較好酶切效果。