無溶劑體系中酶催化小桐籽油制備生物柴油

2023年12月27日發(作者：春節作文)

第２７卷第４期　化學反應＿Ｔ程與工藝　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｖｏｌ　２７．Ｎｏ　４　Ａｕｇ．２０１１　２０１１年８月　文章編號：１００１－－７６３１（２０１１）０４—０３２２—０５　無溶劑體系中酶催化小桐籽油制備生物柴油　伍世夏　，劉幽燕　，李青云　，石滿　（１．廣西大學化學化工學院，廣西南寧５３０００４；２．廣西生物煉制重點實驗室，廣西南寧５３０００３）　摘要ｔ考察了無溶劑體系中固定化脂肪酶Ｎｏｖｏｚｙｍ　４３５催化小桐籽油制得生物柴油的工藝條件。結果表明，加入　硅膠有利于提ｉ島反應速率和轉化率，且當硅膠存在時，甲醇可一一次性加入，簡化Ｊ　實驗的操作步驟。當無外加水　分存在時，甲醇與小桐籽油的物質的量之比為３．固定化酶用量為小桐籽油質量的７％，硅膠加入量與小桐籽油質　量比０．４，在４０＂Ｃ￣ｌｌ轉速１５Ｏ　ｒ／ｍｉｎ的條什下，酶催化小桐籽油制崳生物柴油反應性能較好，反應２４　ｈ后，其轉化　率為８９％，連續反應ｌＯ個批次后，固定化酶活力基本不變。　關鍵詞：生物柴油小桐籽油固定化酶無溶劑　中圖分類號ｌ　ＴＱ６４５；ＴＱ４２６．９７　文獻標識碼：Ａ　目前，制備牛物柴油的原料大多是高品質的食用級植物油，如美國用大豆油、英國用菜籽油，然ｍ，　高價的食用級植物汕增加了生物柴汕的原料成本，從而限制其在經濟欠發達地區的推廣應用［１】。岡此，開　發和利用廉價的非食用油脂作為原料，可大大增加生物柴油的經濟實用性。近年來，小桐籽油被認為是具　有巨大發展潛力的生物柴油原料。在我Ｉ玉ｌ，小桐樹主要分布于Ｊ’。‘東、Ｊ　西和云南等省區，它對環境的適應　性較強，可在高熱、干早少雨等各種貧瘠的－十地上生存ｌ　。小桐籽汕岡含有毒性的佛波酯而成為非食Ｊ｛｛性　油脂，其脂肪酸組成與理化性質與大豆油相似，含有４４．０％油酸、３４．０％亞油酸、ｌ２．８％棕櫚酸　Ｉ　７．３％硬　脂酸Ｌ３Ｊ。無溶劑體系對環境污染小、節約成本、轉化效率　寄，且產物的分離提純簡單，　而在產業化中具　有較強的競爭性［４】。賀芹　比較了　同商品化脂肪酶和自制的華根霉全細胞脂肪酶（Ｒｈｉｚｏ　ｐｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ＣＣＴＣＣＭ２０ｌＯ２ｌ，ＲＣＬ）催化油脂的轉化效率，發現ＲＣＬ能有效應用于丸溶劑體系中催化合成牛物柴油，　甲醇分３次加入，在最佳條件下所得甲酯的收率可達９３％。Ｋｏｓｅ１６］在無溶劑體系中采用吲定化脂肪酶催化　棉籽油的醇解反應，發現當反應溫度為５Ｏ℃，醇和油物質的量之比４，酶用量為３０％，反應７　ｈ時，甲酯　收率高達９１．５％。許多學者研究采用分步加入甲醇的方法來減輕其對脂肪酶的毒性，為了簡化操作，奉工　作通過在體系巾添加硅膠，將甲醇一次性加入，考察以小桐籽油為原料在無溶劑體系巾脂肪酶催化制備生　物柴油的＿Ｔ藝條件。　１實驗部分　１．Ｉ小桐籽油的轉酯化反應　在５０　ｍＬ具塞三角瓶巾，依次加入１　ｇ小桐籽汕、１５０　甲醇和０．４　ｇ硅膠，置于４０℃和１５０　ｒ／ｍｉｎ　空氣浴搖床中預熱２０　ｍｉｎ，然后加入固定化脂肪酶Ｎｏｖｏｚｙｍ　４３５，開始反應并計時。每隔一定時　取出　收稿日期：２０１ｌ一０４．１３：修訂日期：２０１１－０５．３１　作者簡介：伍世夏（１９８６－），女，碩士研究生：劉幽燕【１９７１－），女，教授。Ｅ．ｍａｉｌ：ｌｉｕｙｏｕｙａｎｇｘ＠１６３　ｃｏｒｎ　基金項目；廣ｉＪｌｉ自然科學基金（０９９１００１）；廣兩理工科學實驗中心最點項目（ＬＧＺＸ２０１００８）　

第２７卷第４期　伍世夏等．無溶劑體系中酶催化小桐籽油制備生物柴油　３２３　２０　ｌａＬ樣品，并用８０　ＩｘＬ石油醚溶解，然后加入十三酸甲酯內標物混合均勻，用氣相色譜分析其中的脂肪　酸甲酯含量。　制備生物柴油的轉酯化反應式如下：　Ｈ　２　——ｏＯｃ——Ｒ１　Ｒ１一ｃ０Ｏ——Ｒ‘　Ｈ：ＣＤＯＨ　Ｉ　Ｃａｔａｌｙｓｔ　Ｈｅ～。。ｃ—Ｒ　２　＋３Ｒ‘ＯＨ；＝　Ｒ２－－ＣＯＯ—Ｒ．　＋　ＨＣ——－—０Ｈ　Ｈ２　——００ｃ——Ｒ３　　ｌＲ３－－ＣＯ０－－－Ｒ’　Ｈ　２Ｃ—１　ＯＨ　ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｇｌｙｃｅｒｏｌ　１．２固定化酶穩定性　以２４　ｈ為一個批次，在每一批反應結束時，分離出產物、硅膠和固定化酶。用少量Ｌ內酮洗滌固定化　脂肪酶表面兩次，靜置，待丙酮揮發后，加入新物料進行下…批次的反應，以考察固定化酶的穩定性。　１．３分析方法　采用Ａｇｌｉｅｎｔ　６８９０ｓ型氣相色譜儀分析產物的含量，檢測器為火焰離子化檢測器（ＦＩＤ），色譜柱為ＨＰ－１　非極性毛細管柱（３０　ｍｘ０．５３　ｍｍｘ０．８８岬）。汽化室溫度為２８０℃，檢測室溫度為２９０℃。柱溫采用程序　升溫：初始溫度ｌ５０℃，以２０￣Ｃ／ｍｉｎ升至２００℃，再以２￣Ｃ／ｍｉｎ升至２３０℃并保持１　ｍｉｎ，最后以１Ｏ℃／ａｒｉｎ　升溫至２６０℃，保持８　ｍｉｎ。載氣為高純氮氣，流速為３６　ｍＬ／ｍｉｎ。　２結果與討論　２．１溶劑對轉酯化反應的影響　有機溶劑可降低底物汕脂的粘度，增強傳質效果，而＋日．可以增大與酶的接觸面積，從而提高轉酯化效率。　在疏水性較強的石油醚有機溶劑中進行反應，脂肪酶可以保持較ｉ岳的活性，但與無溶劑體系相比，有機溶　劑體系中的底物濃度低，會導致反應速率的減慢【７】。在醇和小桐籽油物質的量之比為３，酶用量為小桐籽　油質量的７％￣１１硅膠與小桐籽油的質量比為０．４的條件下，比較石油醚溶劑體系和無溶劑體系中酶催化小　桐籽油的轉酯化反應，結果如圖ｌ所示。由圖可知，反應２４　ｈ　ｕ，ｌ‘無溶劑體系的轉化率達８９％，而有溶劑　體系的轉化率僅為６０％。表明無溶劑體系的反應速率高于石汕醚溶劑體系的反應速率。這與文獻【８】的結　果不同，可能與原料油特性及反應操作方式不同有關。此外，由于無溶劑體系生產對環境污染小、可節約　生產成本，因此在后續實驗ｒｆ１采用無溶劑體系制備生物柴油。　１００　１Ｏ０　８０　８０　６０　蓋　６０　４０　５　４０　０　２０　２０　０　０　０　１０　２０　３０　４０　５０　０　１０　２０　３０　ｔ，ｈ　ｆ，ｈ　圖１有機溶劑對轉酯化反應的影響　圖２硅膠對轉酯化反應的影響　Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｏｒｇａｎｉｃ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｏｎ　ｔａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｏｎ　ｔａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　

３２４　化學反應：【程與：Ｉ　藝　２０１　１年８月　２．２硅膠對轉酯化反應的影響　在甲醇和小桐籽汕物質的量之比為３，酶用量為小桐籽油質量７％的條＃Ｉ￣－Ｆ，考察硅膠對轉酯化反應　的影響，結果見圖２。山圖可知，當體系中無硅膠存在時，轉酯化反應的初速率較小，反應２４　ｈ轉化率為　５０％，且延長反應時間對甲酯得率無明顯影響。這是因為…‘次性加入過量的甲醇塒脂肪酶產生了毒害作用　。　當體系中存在硅膠時，反應的初速率較大，反應２４　ｈ所得的甲酯得率比米加硅膠的高３０％左　。這是由　于硅膠是一種極性較強的多孔物質，具有較大的比表面積，可通過吸附平衡來控制甲醇的濃度　，避免甲　醇對脂肪酶的毒害作用，使轉化率大大提高【ｌｏ】。　２．３酶用量對轉酯化反應的影響　在甲醇和小桐籽油物質的量之比為３，硅膠與小桐籽油的質量比為０．４的條件下，考察酶用量對轉酯　化反應的影響，結果見圖３。由圖可知，當酶用量（基于小桐籽油的質量）由３％增　７％Ｒ，Ｊ‘，酶量的變化　對轉酯化反應的影響較為顯著，此時反應速率隨著酶濃度的增加而增火，轉化率也不斷增人；當酶　｝＿｝ｊ量高　于７％時，反應速率變化不明顯，而總的轉化率有所下降。這是由于在一?定的范圍內，酶用量越大，底物　與酶活性位點接觸的機會越多，催化反應速率就越大，當酶用量達到一定量時，增加酶用量，底物　酶活　性位點接觸的機會增加有限，反應速率變化不大，而進一步增加酶，　過量的酶會與硅膠團聚，導致反應過　ｒ．　程中的傳質阻力增加。因此，綜合考慮反應速率和固定化酶的成木，　選擇酶的用量為７％較合適。　５；　＿＿∞　Ｌ；●　蓋　５　Ｕ　暑　‘西　璽　５　０　２　４　６　ｔ，ｈ　Ｍｏｌａｒ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍｅｔｈａｎｏｌ　ｔｏ　ｏｉＩ　圖３酶用量對轉酯化反應的影響　Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｌｉｐａｓｅ　ｄｏｓａｇｅ　ｏｎ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｃａｔｉｆｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　圖４甲醇和小桐籽油物質的量之比對轉酯化反應的影響　Ｆｉｇ．４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｍｏｌａｒ　ｒａｔｉｏ　ｏｆｍｅｔｈａｎｏｌ　ｔｏ　ｏｉｌ　ｏｎ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｃａｔｆｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　２．４醇油比對轉酯化反應的影響　在酶用量為小桐籽汕質量的７％、硅膠與小桐籽汕的質量比為０．４的條件下，考察醇和小桐籽油物質　的量之比對轉酯化反應的影響，結果見圖４。由圖可知，醇油比小于３時，轉化率隨著醇油比的增加而增　大；在醇汕比為３～４時，轉化率幾乎不受醇汕比的影響，均能保持在８７％左右：若繼續增人醇油比，轉　化率急劇下降，當醇油比為６時，轉化率僅有１０％。這是山＿ｒＪ：甲醇濃度較低時，轉酯化反應不完全，　甲　醇濃度較高時，會剝奪維持脂肪酶柔性結構的必需水，從而破壞維持蛋白功能構象的氫鍵體系，使酶的活　性降低或喪失…】。從原料的經濟性考慮，選擇醇油比為３較合適。　２．５外加水對轉酯化反應的影響　一定量的水分是維持酶的構象以及發揮其催化作用所必需的，但過多的水分會使酶分子聚集成　，增　大傳質　力，降低酶的催化效率，而且還會影響反應平衡，促使酯化反應逆向進行，降低甲酯得率【Ｉ引，兇　此，反應體系中的水分含量需嚴格控制。本實驗所用小桐籽油中水的質量分數為０．１８％，在　醇￥１１ｄ￣桐籽　

第２７卷第４期　伍世夏等．無溶劑體系中酶催化小桐籽油制備生物柴油　３２５　油物質的量之比為３，酶用量為小桐籽油質量的７％，硅膠與小桐籽油的質量比為０．４的條件下，考察外加　水量對轉酯化反應的影響，結果如圖５所示。可見，當沒外加水時，轉化率高達８６．９％，隨著水分逐漸增　高，轉化率逐漸下降，當水的質量分數為１．５％時，轉化率為６０％。說明小桐籽油本身所含殘留的微量水　分已足夠維持脂肪酶的催化活性，無需外加水到反應體系中。　１００　ｒ…　。。卜　～　；蓋　５　０　６０　～ｌ一一一　－Ｊ　景　瑩　４０　２０　瑩　若　０　０　０　Ｏ　０．５　１．０　１　５　２０　Ｏ．０　０２　０　４　０．６　０　８　ＭａＳＳｆｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　怕ｔｅｒ．％　Ｍａｓｓ　ｒ酬ｏｏｆｓｉｌｉｃａ　ｇｅＩｔｏ　ｏＩ／幻．　’）　圖５水的質量分數對轉酯化反應的影響　Ｆｉｇ．５　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｗａｔｅｒ　ｍａｓｓ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　圈６硅膠用量對轉酯化反應的影響　Ｆｉｇ．６　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｄｏｓａｇｅ　ｏｎ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｃａｔｉｔｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　∞　∞　∞　柏　∞　Ｏ　２．６硅膠用量對轉酯化反應的影響　∞　∞　∞　∞　∞　在甲醇和小桐籽油物質的量之比為３，酶用量為小桐籽油質量的７％的條件下，考察硅膠用量對轉酯　化反應的影響，結果如圖６所示。可以看出，隨著硅膠加入量的增加，轉化率先增大后減小的，當硅膠與　小桐籽油的質量比為０．４時，轉化率最大。當硅膠與小桐籽油的質量比小于Ｏ．４時，轉化率隨硅膠用量的　增加而增大。這是岡為硅膠加入＝亳＝少，吸附甲醇的最也相對較少，此時液相主體中存在的大量甲醇仍然會　對酶有一定的毒害作用。當硅膠與小桐籽汕的質量比大于０．４時，轉化率反而有所降低。這可能是硅膠量　過大，對甲醇的Ｉ吸附量隨之增人，　從而導致體系中甲醇的濃度低，反應速率減慢。　２．７固定化酶的穩定性　在甲醇和小桐籽油物質的量之比為３，酶用量為小　桐籽油質量的７％、硅膠與小桐籽汕的質量比為０．４的條　件下，進行連續批次反應，考察吲定化酶Ｎｏｖｅｚｙｍ　４３５　的穩定性，結果見圖７。由圖可知，同定化酶重復使用ｌ０　次后，轉化率仍保持在８５％左右。說明該酶使用多次后，　Ｏ　１　２　３　４　５　６　７　８　９　１０　１１　酶活力基本沒有損失，具有較好的穩定性。　Ｂａｔｃｈ　３結論　在反應體系中不加溶劑而添加硅膠，將甲醇一?次性　圖７固定化酶的穩定性　Ｆｉｇ．７　Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｌｉｐａｓｅ　加入，與小桐籽汕在脂肪酶催化作用下制備生物柴汕，發現采用無溶劑體系中酶促小桐籽油轉酯化的反應　效率高，脂肪酶催化性能穩定，且該工藝對環境污染小、可節約牛產成本，因此具有較好的應用前景。　參考文獻：　【Ｉ】Ｃａｎａｋｃｉ　Ｍ，Ｓａｎｌｉ　Ｈ　Ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｆｅｅｄ　ｓｔｏｃｋｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｆｕｅｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ［Ｊ］Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ｎｄ　Ｂｉａｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２００８，３５（５）：４３　１－４４　１．　，ｆ２】　Ｋａｒｍａｋａｒ　Ａ，Ｋａｒｍａｋａｒ　Ｓ，Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ　Ｓ　Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｐｌａｎｔｓ　ａｎｄ　ａｎｉｍａｌｓ　ｆｅｅｄｓｔｏｃｋｓ　ｆｏｒ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ【Ｊ】ｌ　Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ　

３２６　嗍　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，１０１（１９）：７２０１－７２ｌ０．　吲　＝。　化學反應工程與工藝　…　２０１　１年８月　Ｓｈａｈ　Ｓ，Ｇｕｐｔａ　Ｍ　Ｎ　Ｌｉｐａｓｅ　ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｆｒｏｍ　Ｊａｔｒｏｐｈａ　ｏｉｌ　ｉｎ　ａ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｔｒｅｅ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７，　４２（３）：４０９．４１４．　Ｄｏｎｇｎｉｎｇ　Ｄ，Ｍａｓａｙａｓｕ　Ｓ．Ｒｅｐｅａｔｅｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　ｗｉｔｈ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｂｌｅａｃｈｉｎｇ　ｅａｒｔｈ　ｉｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ－ｔｒｅｅ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｙ，２００６，４１（ｒ８）：１８４９－１８５３　賀芹，徐巖，滕云，等．華根霉全細胞脂肪酶催化合成生物柴油【Ｊ】催化學報，２００８，２９（１）：２３．２８．　Ｈｅ　Ｑｉｎ，Ｘｕ　Ｙａｎ，Ｔｅｎｇ　Ｙｕｎ，ｅｔ　ａ１．Ｂｉｄｉｏｅｓｅｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｗｈｏｌｅ—ｃｅｌｌ　ｌｉｐａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ［Ｊ］Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｔａｌｙｓｉｓ，　２００８，２９（１）：２３—２８　Ｋｏｓｅ　Ｏ，Ｔｕｔｅｒ　Ｍ，Ａｋｓｏｙ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ　Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｃａｎｄｉｄａ　ａｎｔａｒｃｔｉｃａ　ｌｉｐａｓｅ－ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ａｌｃｏｈｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｃｏｔｔｏｎ　ｓｅｅｄ　ｏｉｌ　ｉｎ　ａ　ｓｏｌｖｅｎｔ．ｆｒｅｅ　ｍｅｄｉｕｍ［Ｊ］　Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００２，８３（２）：１２５—１２９．　高靜，王芳，譚天偉，等．固定化脂肪酶催化廢油合成生物柴油【Ｊ］．化１：學報，２００５，５６（９）：Ｉ７２７．１７３０．　Ｇａｏ　Ｊｉｎｇ，Ｗａｎｇ　Ｆａｎｇ，Ｔａｎ　Ｔｉａｎｗｅｉ，ｅｔ　ａ１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｆｒｏｍ　ｗａｓｔｅ　ｏｉｌ　ｂｙ　ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｌｉｐａｓｅ［Ｊ］Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｙ　ａｎｄ　ｒＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００５，５６（９）：１７２７?１７３０　Ｔａｌｕｋｄｅｒ　Ｍ　Ｒ，Ｗｕ　Ｊ　Ｃ，Ｎｇｕｙｅｎ　Ｔ　Ｂ　Ｖ，ｅｔ　ａ１．Ｎｏｖｏｚｙｍ　４３５　ｆｏｒ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｆｒｏｍ　ｕｎｒｅｆｉｎｅｄ　ｐａｌｍ　ｏｉｌ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｍｅｔｈａｎｏｌｙｓｉｓ　ｍｅｔｈｏｄｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃａｔａｌｙｓｉｓ　Ｂ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ，２００９，６０（３．４）：１０６．１１２．　Ｓｚｃｚｅｓｎａ　Ａ　Ｍ，Ｋｕｂｉａｋ　Ａ，Ａｎｔｃｚａｋ　ｅｔ　ａ１　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ－ｋｅｙ　ｆａｃｔｏｒｓ　ａｆｆｅｃｔｉｎｇ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ［Ｊ１　Ｒｅｎｅｗａｂｌｅ　Ｅｎｅｒｇｙ，２００９，３４（５）：ｌ１　８５，１　Ｉ　９４．　陳敏，劉幽燕，庾樂，等．酶催化茶油轉酯化反應制備生物柴油的研究【Ｊ】．現代化工，２００８，２８（２）：１５３．１５５．　Ｃｈｅｎ　Ｍｉｎ，Ｌｉｕ　Ｙｏｕｙａｎ，Ｙｕ　Ｌｅ，ｅｔ　ａ１．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｅｎｚｙｍｅ　ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｅｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｍｅｌｌｉａ　ｏｉｌ　ｆｏｒ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］Ｍｏｄｅｒｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，２００８，２８（２）：１　５３—１　５５　Ｙｕｅ　Ｗ，Ｌｉｎｇｈｕａ　Ｚ－Ｅｃｔｏｉｎｅ　ｉｍｐｒｏｖｅｓ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｌｉｐａｓｅ［Ｊ１．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃａｔａｌｙｓｉｓ　Ｂ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　２０１０，６２（１）：９０－９５．　余旭亞，黃遵錫．生物酶法制備生物柴油的研究進展【Ｊ］．中國油脂，２００９，３４（６）：４８—５３　Ｙｕ　Ｘｕｙａ，Ｈｕａｎｇ　Ｚｕｎｘｉ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｏｎ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｂｉｏ—ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｃａｔａｌｙｓｉｓ［Ｊ］Ｃｈｉｎａ　Ｏｉｌｓ　ａｎｄ　Ｆａｔｓ，２００９，３４（６）：４８．５３．　Ｌｉｐａｓｅ—Ｃａｔａｌｙｚｅｄ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｆｒｏｍ　Ｊａｔｒｏｐｈａ　Ｏｉｌ　ｉｎ　Ｓｏｌｖｅｎｔ—ｆｒｅｅ　Ｓｙｓｔｅｍ　Ｗｕ　Ｓｈｉｘｉａ’Ｌｉｕ　Ｙｏｕｙａｎ’　，，Ｌｉ　Ｑｉｎｇｙｕｎ’，Ｓｈｉ　Ｍａｎ　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００４，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｂｉｏｒｅｆｉｎｅｒｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００３，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｆｒｏｍ　Ｊａｔｒｏｐｈａ　ｏｉｌ　ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｌｉｐａｓｅ（Ｎｏｖｏｚｙｍ　４３５）ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｉｎ　ａ　ｓｏｌｖｅｎｔ－ｆｒｅｅ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｃｏｕｌｄ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｊａｔｒｏｐｈａ　ｏｉｌａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　，ａｄｄｅｄ　ｉｎ　ｏｎｅ　ｓｔｅｐ，ｗｈｉｃｈ　ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｔｈｅ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｍｏｌａｒ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍｅｔｈａｎｏｌ　ｔｏ　ｏｉｌ　３，ｅｎｚｙｍｅ　ｍａｓｓ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　７％ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｏｉｌ　ｍａｓｓｍａｓｓ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｔｏ　ｏｉｌ　０．４，４０℃　，ａｎｄ　ｌ５０　ｒ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ｏｆ　ｏｉｌ　ｗｉｔｈ　０．１　８％ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｒｅａｃｈｅｄ　８９％ａｆｔｅｒ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　２４　ｈ．Ｔｈｅ　ｃａｔａｌｙｔｉｃ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｅｎｚｙｍｅ　ｗａｓ　ｓｔａｂｌｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｌｉｔｔｌｅ　ａｆｔｅｒ　ｂｅｉｎｇ　ｒｅｕｓｅｄ　１０　ｔｉｍｅｓ　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ；Ｊａｔｒｏｐｈａ　ｏｉｌ；ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｌｉｐａｓｅ；ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ