常用蛋白酶切割位點

2023年12月12日發(作者：團支委)

常用融合蛋白切割位點

PROTEASE

Thrombin （凝血酶）

COMPANY Protea Capture

Amersham-Biosciences, Novagen,

Leu-Val-Pro-Arg▼Gly-Ser

SIGMA, Roche

L-V-P-R▼G-S

Factor Xa （Xa因子）

Ile-Glu/Asp-Gly-Arg▼

I-E/D-G-R▼

Enterokina （腸激酶）

New England Biolabs,

Asp-Asp-Asp-Asp-Lys▼

Novagen, Roche

D-D-D-D-K▼

TEV protea （煙草蝕紋病毒蛋白酶）

Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln▼Gly

E-N-L-Y–F-Q▼G

PreScission （PreScission 蛋白酶）

Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln▼Gly-Pro

L-E-V-L-F-Q▼G-P

TAGZyme （標記酶）

Qiagen

His-tag removal by Exoproteolytic Digestion

Intein Site （內含肽）

New England Biolabs

dithiothreitol cleavage（二硫蘇糖醇清除）

HRV 3C Protea（3c蛋白酶）

Novagen

Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln▼Gly-Pro

Ni-NTA (6His recomb. enzyme)

DTT elimination by dialysis （透析）

Ni-NTA (6His recomb. enzyme)

Amersham-Biosciences GSTrap for GST fusion enzyme

Invitrogen – Life Technologies Ni-NTA (6His recomb. TEV)

Trypsin Inhibitor-Agaro

Amersham-Biosciences,

New England Biolabs,

Roche

Benzamidine-Agaro

Benzamidine-Agaro L-E-V-L-F-Q▼G-P

SUMO Protea

Invitrogen – Life Technologies,

recognize the tertiary structure of the ubiquiLifeSensors

tin-like (UBL) protein, SUMO

Ni-NTA (6His recomb. enzyme)

Kex-2

Invitrogen – Life Technologies,

-Arg-X-Lys/Arg-Arg▼

Arg前為lys效率最高，不切-Arg-lys，Pro影響KEX2切割

羧肽酶B可以切割C端的Lys或Arg；羧肽酶

羧肽酶A可以切割C端除了Lys、Arg、Pro的氨基酸，但如果倒數第二個氨基酸為Pro兩種羧肽酶均不能作用

KEX2對arg的專一性高，要求最重要。

Ni-NTA (6His recomb. enzyme)

1.胰蛋白酶屬肽鏈內切酶，能把多肽鏈中Lys和Arg殘基中的羧基側切斷。

2.胰凝乳蛋白酶（亦稱糜蛋白酶）屬肽鏈內切酶，主要切斷多肽鏈中的芳香族氨基酸（Phe、Trp、Tyr）殘基的羧基一側。

3.羧肽酶（分A和B型），一般的題目中沒有特別指明的話就是兩種類型的功能都具備，可以從羧基端切除氨基酸（若羧基端的第1個或第2個氨基酸為Pro的則不能切除）。

4.溴化氰處理，專一性的切割甲硫氨酸羧基端的肽鍵。