藥物殘留檢測

今H畜牧曹醫

高效液相色譜法檢測羊奶中阿維菌素類藥物殘留

李曼，李宏娟，馬珊珊，楊趙偉*

（秦皇島市農產品質量安全監督檢驗中心066000）

摘要：為了建立高效液相色譜法測定羊奶中阿維菌素類藥

物的殘留，

試驗采用乙腈和去離子水提取樣品中目標化合物，

C18固相萃取小柱凈化，通過高效液相熒光檢測器測定，外標法

定量。

結果表明：該方法2耀200滋g/L線性良好，羊奶中阿維菌素

類藥物的方法檢出限為1.2滋g/kg~2.5滋g/kg,回收率范圍為

66.7%~104%，

相對標準偏差為1.8%~5.4%,

該方法簡單、快速，可

用于羊奶中阿維菌素類藥物殘留的檢測遙

關鍵詞：高效液相色譜法；羊奶；

阿維菌素；殘留

阿維菌素類藥物（Avermectins,AVMs）是由鏈霉菌的發酵產

物中分離的大環內酯類抗生素，是目前獸醫臨床上用量最大的

抗寄生蟲藥，被廣泛應用于牛、羊等動物，在動物體內殘留時間長

11-21遙其作用機理是干擾害蟲神經生理活動

,致使害蟲岀現麻痹而

中毒死亡叫阿維菌素類藥物對哺乳動物的毒性很低，但是長期

食用含有此類藥物的奶產品會對人類健康產生潛在威脅，應對奶

產品中阿維菌素類藥物含量進行監測叫

GB/T29696-2013《牛奶中阿維菌素類藥物多殘留的測定

高效液相色譜法》適用于牛奶中阿維菌素類藥物殘留檢測的制

樣和高效液相色譜測定方法，該方法檢測靈敏度高且不需要昂

貴的儀器，普及性強|5-61遙本文通過對該方法中的前處理方法和儀

器檢測條件進行改進

,使該方法適用于羊奶中阿維菌素類藥物

的檢測，對有效監控該藥在羊的養殖中的應用、評價羊奶食用的

安全性具有重要意義。

1材料與儀器

1.1儀器

高效液相色譜儀

（型號為U3000）,購自賽默飛世爾科技（中

國）有限公司；熒光檢測器（型號為FLD-3100）,購自賽默飛世爾

科技（中國）有限公司

；

漩渦振蕩器（型號為MS3）,購自IKA公

司；

智能高速冷凍離心機

（型號為

3H20RI）,購自湖南赫西儀器

裝備有限公司；固相萃取濃縮裝置（型號為USE-24S）,購自北

京優晟聯合科技有限公司；氮吹儀（型號為TTL-域）

,購自北京

斯珀特科技有限公司

；

電子天平（型號為XA205）,購自梅特勒-

托利多國際貿易（上海）

有限公司；電子天平

（型號為HZF-

A200），購自福州華志科學儀器有限公司遙

基金項目：河北省重點研發計劃項目（19225502D）

作者簡介：李曼（1980-）,

女，漢族，農藝師，本科，從事農畜產品

檢測

通訊作者:楊趙偉（1984-），漢族，高級畜牧師，從事農畜產品檢

測

1.2試劑

阿維菌素、多拉菌素

、伊維菌素標準品

（純度均逸94%

）,購

自德國torferGmbH公司，埃瑪菌素標準品（100滋g/mL）

購自天津阿爾塔科技有限公司；

甲醇（色譜純）購自德國CNW

公

司；乙腈

（色譜純）

購自德國CNW公司；冰乙酸（色譜純）購自沈

陽市試劑五廠；三氟乙酸酐（化學純）購自南京化學試劑股份有

限公司；三乙胺（分析純）購自電腦基礎 天津市科密歐化學試劑有限公司；

異辛烷（色譜純）

購自德國CNW公司；

N-甲基咪唑（色譜純）購自

西亞試劑；C18固相萃取柱（500mg/6mL）,購自沃特世科技（上

海）有限公司。

洗滌液：取乙月青

30mL、去離子水70mL和三乙胺

20滋L,

混

勻；

衍生化試劑A液:取N-甲基咪唑1mL、乙腈

1mL,混勻，現

用現配

；

衍生化試劑B液:

取三氟乙酸酐1mL、乙腈2mL,混勻，現用

現配。

2方法

2.1標準溶液的配制

阿維菌素類標準儲備液：分別精密稱取阿維菌素、多拉菌

素、伊維菌素標準品25mg,用乙腈溶解并定容至25mL,配制成

濃度為1mg/mL的阿維菌素類標準儲備液，于2益耀8益保存。

埃瑪菌素標準儲備液:

取1mL

埃瑪菌素標準品，用乙腈稀

釋定容至10mL，配制成濃度為

10滋g/mL的標準儲備液，于2

益-

8益保存。

混合標準工作液:分別精密吸取阿維菌素、多拉菌素、伊維

菌素標準儲備液100^L（儲備液由乙腈稀釋至濃度為100滋g/mL）,

埃瑪菌素標準儲備液1mL,置于10mL容量瓶中，用乙腈稀釋至

刻度

，搖勻，即得混合標準中間溶液，阿維菌素、商朝 多拉菌素、伊維

菌素、埃瑪菌素濃度均為1滋

g/mL。

2.2樣品的制備及處理

2.2.1樣品的提取

稱取羊奶試樣2.00g0.05g

（

精確到0.01g）于50mL具塞離

心管中，

加乙月青

4mL,渦動1min,5000r/min離心10min,取上清

液；殘渣中加乙腈4mL,重復提取一次，合并兩次上清液,加去離

子水10mL,、三乙胺25滋L,混勻,備用。

2.2.2樣品的凈化

C18柱依次用乙腈5mL

和洗滌液5mL活化，取備用液過

柱，自然流干，

抽干5min,加異辛烷3mL洗滌，抽干

5min,乙腈

5mL洗脫,收集洗脫液于10mL試管中，于55益水浴吹干，備用遙

17

E實嫁砰憶I

xpenmentaTstudyononiine

2.2.3樣品的衍生化

于備用試管中依次加入衍生化試劑A液100

滋L、衍生化試

劑B

液150滋L,

密閉

，

渦動

10s，依次加入冰乙酸50滋L和三乙胺

50

滋L,

渦動

10s，于豬柳 室溫下密閉反應

30min，加甲醇650滋L混勻，過

0.22滋m濾膜，供高效液相色譜法測定。

2.3色譜條件確定

使用液相色畫太陽 譜柱（型號為AccucoreC18,150x4.6mm；

2.6滋m）,進樣量20滋L,

激發波長365nm，發射波長475nm，確定

最佳的流動相

（甲醇和去離子水）組成,流速和柱溫。

2.4標準曲線的繪制

精密量取

1

滋g/mL阿維菌素類混合標準工作液適量，用乙

腈稀釋，配制成濃度為5、10、20、50、100、200zg/L的系列標準溶

液

，各取1.0mL于

10mL試管中，于55益水浴吹干，依次加入衍

生化試劑A液100

滋L、衍生化試劑B液150滋L，密閉，渦動10s,

依次加入冰乙酸50滋L和三乙胺50滋L,

渦動10s，

于室溫下密閉

反應30min，加甲醇650滋L混勻,供高效液相色譜測定，以測得峰

面積為縱坐標,對應的標準溶液濃度為橫坐標,繪制標準曲線。

2.5方法檢升旗簡筆畫 出限

按照上述2.2方法進行樣品處理，根據樣品進行標準物質

添加回收率實驗，以3倍信噪比可測得的最低質量濃度確定方

法的檢岀限叫

2.6準確度和精確度

采用標準添加法，在空白組織中添加3個不同濃度（25滋g/

kg

、50

滋g/kg和100滋g

/kg

）的阿維菌素類標準溶液進行回收率測

定,每個濃度設定6個平行樣品，同時進行空白試驗，重復3次，

計算該方法的準確度和精確度。

3結果與討論

3.1確定色譜條件

在選定液相色譜和色譜柱的條件下，阿維菌素、多拉菌素、

伊維菌素

、

埃瑪菌素均得到很好的分離，標準品依次在&321min

（阿維菌素）、11.113min（多拉菌素）、14.011min（

伊維菌素）、

16.164min（埃瑪菌素）岀峰時

,此時流動相組成為甲醇+

去離子

水

=92+8，流速1.0mL/min，柱溫25益遙準確吸取50滋g/L標準品溶

液20滋L,重復進樣10次，

在相同色譜條件下對峰面積進行分

析，結果表明，

峰面積的相對標準偏差淵

RSD）為0.33%,表明該色

譜條件性能穩定。

3.2標準曲線及線性范圍

將系列標準工作溶液，依次從低濃度到高濃度進行分析。

按

峰面積與對應的對照溶液的濃度做標準曲線。其濃度在2耀

200滋g/L范圍內呈良好的線性關系，線性回歸方程及相關系數見

表1,100滋g/L阿維菌素類藥物標準溶液色譜圖見圖1。

3.3方法檢出限

羊奶空白樣品的色譜圖及羊奶空白樣品中添加50滋g/kg

表1阿維菌素類藥物線性方程及相關系數

阿唯侗粕箜藥物■Hl強束戡

問維閑索Y-!4.77X+282.09

0.9997

Y-mS^X+255.18

Y=833J8X-2O0-28

埃瑪繭緊Y=5S*l；05X+l74.68

0刑旳

圖

1阿維菌素類藥物標準溶液色譜圖（100ng/L）

圖2羊奶空白樣品色譜圖

3Iten.^I-'.-AH!4|Hl

I-ek

SMWO

warn

UhaSAMillitslifeirj

圖3羊奶加標樣品色譜圖（50滋g/kg）

阿維菌素類藥物的色譜圖，見圖2?3

,

結果顯示空白試料對所測

分析物無干擾，各待測物的檢岀限分別為阿維菌素1.2滋g/kg、多

拉菌素2.0滋

g/kg、伊維菌素2.3

滋g/kg、埃瑪菌素2.5滋g/kg。

3.4準確度和精密度

羊奶中添加不同水平阿維菌素類藥物回收率見表2遙如表

所示

，四種藥物回收率達到66.7%~104%，相對標準偏差（RSD）

18

今H畜牧曹醫

表2羊奶中阿維菌素類藥物添加回收率試驗結果

闖淮1■汶整托費

序冋舉岬倉F的倒戟審

[%?

1冷誓列

■J11-昕點I

SJ.5-95.595.6-103

如一5上

W7-7J.S曲-77.4

71.7-713

J

為1.8%~5.4%。

4結論

羊奶中的阿維菌素、多拉菌素、伊維菌素、埃瑪菌素等藥物,

用乙腈和去離子水提取,C18固相萃取小柱凈化,三丁香花 氟乙酸酐和

N-甲基咪唑衍生化，高效液相色譜-熒光法測定

，回收率范圍為

66.7%~104%,相對標準偏差為1.8%~5.4%，該方法的檢岀限為

1.2滋g/kg~2.5滋g/kg。該方法穩定性好，回收率咼，檢測限低，具有

良好的可操作性和重現性,方法準確度和精密度均能滿足獸藥

殘留分析方面的要求，適用于羊奶中阿維菌素類藥物殘留分析。

參考文獻

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(

后接第28頁)

夏季應該盡量降低豬群飼養密度，這樣可以有效緩解熱應激給

豬群帶來的危害。現代規模化的養豬場，主要根據豬群品種、季

節、

生長發育速度

、體重、設施條件、技術水平等來科學設計豬群

飼養密度,針對飼養管理過程中的具體情況，及時分群或轉舍,

幫助豬群順利度過夏季，以預防熱應激的發生。

一般夏季豬只采食量減少,為了滿足豬群正常生長發育對

各種營養物質的需要，應適當調整飼料配方，盡量提高飼料營養

水平，建議減少纖維原料的使用，并在飼料中添加2%~5%的植

物油，可以有效提高飼料能量水平。為了緩解熱應激可以適當降

低飼料中粗蛋白的含量，因為機體消化粗蛋白時會產生更多的

熱量，但是應保證必需氨基酸含量充足,以滿足機體生長發育的

需求叫

夏季應調整喂料時間，避開中午前后高溫時段飼喂豬群，以

免降低采食量和產生更多的食后體增熱

。建議在清晨或傍晚氣

溫涼爽的時候飼喂豬群，白天只供給麩皮或豆渣類食物,這樣食

物能量含量低、

適口性好

,能夠有效緩解熱應激。如果白天采食

量太少，可以在晚上在補充飼喂一次,確保豬群增重達標。

4.4使用抗熱應激藥物

常見的抗熱應激的藥物有維生素、小蘇打、

電解質和部分中

草藥等。在豬舍溫度超過35益時必須采取預防熱應激的措施，生

產中常用藥物方案如下:在飼料或飲水中添加維生素C、

維生素

E、可溶性氨基多維、小蘇打等，常用的抗應激中草藥有柴胡口服

液、魚腥草散

、穿心蓮散等，還可以在飼料中添加山楂、甘草、陳

皮、蒼術等健脾開胃和清熱消暑的中藥,有利于提高豬群采食量

和抗熱應激能力。

4.5熱應激的治療方法

加強飼養管理,每天認真觀察豬群精神狀況，一旦發現豬群

有熱應激反應，應立即將病豬轉移到通風良好的陰涼處，先讓豬

口中含上冰塊并用冷水澆頭,進行物理降溫,然后肌注5mL、10%

的樟腦磺酸鈉注射液，每天注射2次，同時對耳靜脈放血

200mL，再靜脈注射250mL、

5%葡萄糖鹽水，間隔6h后再注射一

次,有利于及時補充體內流失的水分,幫助豬盡快恢復健康131遙

5小結

總之,我們在了解豬群發生熱應激的原因

、機理和堅持的議論文 臨床表現

后，清楚了熱應激給豬群帶來的嚴重影響,所以在生產實踐中必

須采取綜合防控措施來緩解熱應激,建議在建設豬舍時增加降

溫設施

，夏季供給充足新鮮的飲水，

并加強飼養管理、

提高飼養

水平,在飼料或飲水中添加抗應激藥物,認真觀察豬群，一旦發

現有熱應激反應時，立即采取相應的治療措施，避免熱應激給豬

群造成損傷。

參考文獻

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