天然藥物化學(xué)實(shí)驗講義
一、蘆薈粗多糖的提取及鑒定
二、大黃中蒽醌苷元的提取、分離與鑒別
三、槐米中蘆丁、槲皮素的提取、分離與鑒別
四、八角茴香揮發(fā)油的提取及鑒別
五、黃柏中生物堿的提取、分離和鑒別
六、茶葉中咖啡因的提取
前 言
《天然藥物化學(xué)實(shí)驗》是一門實(shí)踐性很強(qiáng)的課程，理論教學(xué)與實(shí)驗教學(xué)是一個不可分割的完整體系。通過實(shí)驗課的學(xué)習(xí)使學(xué)生能印證并加深理解課堂講授的理論知識，掌握由天然
藥物中提取、分離、精制有效成分，并對其進(jìn)行鑒別的基本方法和技能，提高學(xué)生獨(dú)立動手、觀察分析、解決問題的能力，培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度和良好的科研作風(fēng)。
實(shí)驗一 蘆薈粗多糖的提取及鑒定
一、實(shí)驗?zāi)康?/span>
1、水提醇沉法提取多糖的原理和方法
2、掌握高速冷凍離心機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器等儀器的用法
3、了解蘆薈多糖在醫(yī)藥中的應(yīng)用
二、實(shí)驗原理
蘆薈的多糖類可增強(qiáng)人體對疾病的抵抗力，治愈皮膚炎、慢性腎炎、膀胱炎、支氣管炎等慢性病癥，抑制、破壞異常細(xì)胞的生長的作用，從而達(dá)到抗癌目的。植物體內(nèi)的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的單糖和寡聚糖，所以本實(shí)驗采用水提醇沉法提取蘆薈中的粗多糖。
三、試劑、材料及儀器
1、試劑：鹽酸、無水乙醇、丙酮、乙醚、葡萄糖對照品、苯酚、濃硫酸
2、材料和儀器：蘆薈葉、燒杯、移液管、量筒、容量瓶、玻璃棒、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、電子天平、真空泵、電熱恒溫水浴鍋、紫外-可見分光光度計、高速離心機(jī)、真空冷凍干燥機(jī)。
四、實(shí)驗方法與步驟
1、取蘆薈鮮葉50g，洗凈，去掉葉尖和葉底，在蒸餾水水中浸泡0.5h,已除去由表面滲出的黃色液體。然后切去表皮，將內(nèi)層凝膠（勻漿后）置于燒杯中，加入三倍蒸餾水，置于55℃恒溫水浴鍋中加熱浸提4h。
2、浸提液離心分離（2500r/min，5min）并過濾（直接6層紗布過濾），將所得液汁減壓濃縮（至30ml），用6mol/L的鹽酸調(diào)pH值3.2左右，向經(jīng)過調(diào)酸處理的蘆薈凝膠濃縮汁中緩慢加入6倍量的95％乙醇，邊加邊攪拌大約需要15～30min，室溫下靜置2h，離心分離(2500r/min，7min)得多糖沉淀。依次用乙醇、丙酮和乙醚洗滌，然后真空干燥（通風(fēng)櫥干燥），最終得到的沉淀即為蘆薈多糖粗品。
3、蘆薈多糖的鑒定
對蘆薈多糖的鑒定利用改進(jìn)的苯酚一硫酸法。苯嘞一硫酸試劑能與蘆薈多糖中的己糖起顯色反應(yīng)，在一定波長下其吸光度的變化與多糖含量呈線性關(guān)系。采用苯酚一硫酸顯色法鑒定蘆薈多糖，蘆薈中的多糖在硫酸的作用下，先水解成單糖，并迅速脫水生成糠醛衍生物，然后和苯酚縮合成有色化合物共軛酚在490nm處有最大波長，由此可以鑒定出蘆薈中的多糖(圖1)。
五、注意事項
加入乙醇沉淀多糖時要邊加邊攪拌，時間要長一些；
六、作業(yè)與思考題
1、記錄實(shí)驗條件，過程和實(shí)驗現(xiàn)象。
2、為什么要在醇沉之前調(diào)pH值？
實(shí)驗二 大黃中蒽醌苷元的提取、分離與鑒別
【實(shí)驗?zāi)康?/span>】
1.掌握從大黃中提取和分離游離蒽醌的方法。
2.掌握用pH梯度萃取法分離不同酸性的羥基蒽醌類化合物。
3.掌握蒽醌類化合物的主要檢識方法。
4.熟悉蒽醌類化合物的色譜檢識方法。
5.了解用柱色譜法分離蒽醌類成分。
【實(shí)驗原理】
1.大黃為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L.、唐古特大黃R.tanguticum Maxim. ex Reg.和藥用大黃R. officinale Baill.的干燥根及根莖。大黃中含有大黃蒽醌及其苷。
（1）大黃酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。黃色針狀結(jié)晶（升華法），mp.321～322℃，330℃分解。能溶于堿水、吡啶，溶于乙醇、氯仿、乙醚和石油醚，幾不溶于水。
（2）大黃素(emodin) 分子式C15H10O5，分子量270.23。橙色針狀結(jié)晶(乙醇)，mp.256～257℃，能升華。易溶于乙醇、堿水，微溶于乙醚、氯仿，幾不溶于水。
（3）蘆薈大黃素(aloe-emodin) 分子式C16H10O5，分子量270.23。橙色針狀結(jié)晶（甲苯），mp.223～224℃。易溶于熱乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黃色；溶于堿液呈紅色；氨水及硫酸中呈緋紅色。
（4）大黃酚(chrysophanol) 分子式C15H10O4，分子量254.23。橙黃色六方形或單斜結(jié)晶（乙醇或苯），mp.196～197℃，能升華。易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，極微溶于石油醚、冷乙醇，幾不溶于水。
大黃酚 R1=CH3 R2=H
大黃素 R1=CH3 R2=OH
大黃酸 R1=COOH R2=H
大黃素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3
蘆薈大黃素 R1=CH2OH R2=H
（5）大黃素甲醚(physcion) 分子式C16H12O5，分子量284.26。磚紅色單斜針狀結(jié)晶，mp.203～207℃，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。2.本實(shí)驗是根據(jù)大黃中的羥基蒽醌苷經(jīng)酸水解成游離羥基蒽醌，而游離羥基蒽醌不溶于水，可溶于氯仿、乙醚等親脂性有機(jī)溶劑的性質(zhì)，用氯仿從水解液中將游離羥基蒽醌提取出來，再利用各游離羥基蒽醌的酸性不同，采用pH梯度萃取法將其分離。其中大黃酚和大黃素甲醚的酸性十分近似，用pH梯度萃取法難以分離，可利用兩者的極性不同，采用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離。
【實(shí)驗儀器與試劑】
1.索氏提取器，500、100、10ml燒杯，1000、500ml分液漏斗，10ml試管，試管架，托盤天平，量筒，三角漏斗，洗瓶，布氏漏斗，水浴鍋，10×20cm薄層板，10×20cm薄層色譜缸，點(diǎn)樣毛細(xì)管，紫外燈（儀），玻棒，牛骨匙，脫脂棉，顯色劑噴瓶，小型空壓機(jī)，層析柱（Ф1.5cm）
2.大黃粗粉，濾紙，pH試紙，乙酸乙酯，石油醚（60～90℃），氯仿，20％硫酸，pH8緩沖液，pH9.9緩沖液，濃鹽酸，5％碳酸鈉，5％氫氧化鈉，丙酮，0.5%醋酸鎂乙醇試劑，薄層用硅膠H，0.2%CMC-Na，甲醇，大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素對照品，展開劑：石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）上層溶液，濃氨水。
【實(shí)驗步驟】
1. 提取與分離
大黃粗粉100g
加20％硫酸200ml，加熱回流3小時，放冷，
加乙酸乙酯300ml＋石油醚100ml，振搖，濾過
乙酸乙酯、石油醚提取液 藥渣
水洗余酸至中性
乙酸乙酯、石油醚提取液
加pH8緩沖液150ml萃取
堿水液 乙酸乙酯、石油醚提取液
鹽酸調(diào)pH3，靜置，濾過 加pH9.9緩沖液300ml萃取
沉淀
冰醋酸精制 乙酸乙酯、石油醚提取液 堿水層
大黃酸 5％碳酸鈉-5％氫氧 鹽酸調(diào)pH3，濾過
化鈉（9∶1）540ml 沉淀
萃取 丙酮精制
大黃素
乙酸乙酯、石油醚提取液 堿水層
3％氫氧化鈉500ml萃取 鹽酸調(diào)pH3，濾過
沉淀
堿水層 乙酸乙酯、石油醚提取液 醋酸乙酯精制
鹽酸調(diào)pH3，濾過 蘆薈大黃素
