蛋白質(zhì)的沉淀的方法

2024年3月15日發(fā)(作者：人力資源崗位職責(zé))

蛋白質(zhì)的沉淀的方法

蛋白質(zhì)的沉淀是蛋白質(zhì)研究和純化中非常常見(jiàn)的步驟。蛋白質(zhì)沉淀的方法有很多

種，下面將介紹其中常見(jiàn)的幾種方法，并詳細(xì)說(shuō)明其原理和操作步驟。

1. 醇類沉淀法：

醇類沉淀法是一種最常見(jiàn)和簡(jiǎn)便的蛋白質(zhì)沉淀方法。根據(jù)醇類溶液與水的相溶性

差異，可以選擇合適的醇類使蛋白質(zhì)沉淀。常用的醇類有乙醇和異丙醇。其原理

是在高濃度的醇類溶液中，蛋白質(zhì)的水合層被破壞，從而使蛋白質(zhì)失去水溶性沉

淀。

操作步驟：

(1) 加入適量的醇類溶液到待沉淀的蛋白質(zhì)溶液中。

(2) 緩慢攪拌溶液，使醇類均勻混合。

(3) 靜置溶液一段時(shí)間，一般為15-30分鐘，使蛋白質(zhì)完全沉淀。

(4) 用高速離心機(jī)將溶液離心，一般為10000-15000 rpm離心5-10分鐘。

(5) 倒掉上清液，并用冷浸提劑洗滌沉淀，去除醇類殘留。

(6) 輕輕吸去沉淀上的上清液，避免損壞沉淀。

2. 硫酸銨沉淀法：

硫酸銨沉淀法是一種常用于大量蛋白質(zhì)純化的方法。硫酸銨具有一定的鹽度效應(yīng)

和溶解度效應(yīng)，可以使蛋白質(zhì)發(fā)生逆相轉(zhuǎn)化，失去溶解性，從而沉淀下來(lái)。

操作步驟：

(1) 按照一定比例向待沉淀的蛋白質(zhì)溶液中加入濃度逐漸增大的硫酸銨溶液，并

持續(xù)攪拌。

(2) 離心沉淀物，一般為15000 rpm離心10-15分鐘。

(3) 去掉上清液，并使用一定量的冷浸提劑洗滌沉淀，去除硫酸銨殘留。

(4) 輕輕吸去沉淀上的上清液，避免損壞沉淀。

3. 酸性沉淀法：

酸性沉淀法常用于酸性蛋白質(zhì)溶液的純化和富集。通過(guò)調(diào)節(jié)溶液的pH值使蛋白

質(zhì)失去溶解性，并沉淀下來(lái)。

操作步驟：

(1) 將待沉淀的蛋白質(zhì)溶液調(diào)節(jié)為適當(dāng)?shù)乃嵝裕话銥閜H值在4-5之間。

(2) 緩慢攪拌溶液，使溶液均勻混合。

(3) 靜置溶液一段時(shí)間，一般為30分鐘以上，使蛋白質(zhì)完全沉淀。

(4) 離心沉淀物，一般為10000-15000 rpm離心5-10分鐘。

(5) 去掉上清液，并用冷浸提劑洗滌沉淀，去除酸性殘留。

(6) 輕輕吸去沉淀上的上清液，避免損壞沉淀。

蛋白質(zhì)沉淀的方法還有很多種，如鹽沉淀法、有機(jī)溶劑沉淀法等，根據(jù)不同的蛋

白質(zhì)性質(zhì)和需求選擇適合的方法。值得注意的是，沉淀方法雖然能夠快速分離和

富集蛋白質(zhì)，但也存在一定程度上蛋白質(zhì)損傷和純度降低的問(wèn)題。因此，在進(jìn)行

蛋白質(zhì)沉淀時(shí)應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求和樣品性質(zhì)選擇合適的方法，并結(jié)合其他分離

和富集技術(shù)進(jìn)行綜合利用，以提高純度和穩(wěn)定性。