間接抗人球蛋白試驗(IAT)操作規程

2024年3月27日發(作者：學習名人名言)

間接抗人球蛋白試驗（IAT）操作規程 SXYJ-GZ-0211

1 目的 檢出和鑒定不完全抗體；紅細胞血型抗原鑒定。

2 適用范圍 血型鑒定、抗體的檢出和鑒定、輸血前交叉配血試驗及其他特殊研究。

3 職責 檢測者負責按此程序進行間接抗人球蛋白試驗操作。

4 材料與設備 抗人球蛋白試劑（-IgG/-C

3

d、-IgG、-C

3

d）、 IgG抗D血清、AB型血清、3%D

陽性紅細胞懸液、0.9%無菌生理鹽水；一次性使用滴管、試管、玻片；KUBOTA KA-2200

型離心機；CH20BIMF200型電子顯微鏡；S648型電熱恒溫水溫箱（37℃）等。

5 操作方法

5.1 待檢標本的準備及要求

5.1.1 待檢標本準備兩管血，一管用EDTA抗凝，另一管不抗凝；

5.1.2 血清：待檢的不抗凝標本應退縮充分，用離心機離心并分離出血清；

5.1.3 細胞：從待檢的抗凝標本中吸出部分紅細胞，用0.9%生理鹽水充分洗滌四遍，配制

成3%紅細胞鹽水懸液；

5.1.4 根據試驗目的準備相應的抗血清（待檢血清或已知抗體的血清）

、

3%已知抗原的紅細

胞或受檢紅細胞懸液

。

5.2 鹽水懸浮法

5.2.1 取試管3支，標明受檢管、陽性對照及陰性對照/自身對照；

5.2.2 按下表將各反應物加入相應試管內，混勻，37℃孵育45～60min；

5.2.3 用生理鹽水洗滌3次（KA-2200型離心機Ⅲ檔）。末次洗滌后，將上清液除盡，并用

濾紙將附著于管口的鹽水吸去 ；

5.2.4 每管加抗人球蛋白血清2滴混勻， 3400轉離心15秒（KA-2200型離心機Ⅱ檔），觀

察反應結果。

5.3 Liss懸浮法

5.3.1 將被檢者紅細胞用生理鹽水洗滌3次，用Liss配制3%紅細胞懸液；

5.3.2 按下表在試管中加入各反應物后，37℃孵育15min；

5.3.3 以下同步驟5.2.3和5.2.4。

5.4 PEG法

5.4.1 按下表在試管中加入各反應物后，每管中加入PEG4滴，37℃孵育15min；

5.4.2 以下同步驟5.2.3和5.2.4。

5.5 Liss添加法

5.5.1 按下表在試管中加入各反應物后，每管中加入Liss液2滴，37℃孵育15min；

5.5.2 以下同步驟5.2.3和5.2.4。

表 間接抗球蛋白試驗操作步驟

反應物

血清（已知或受檢）

受檢管

2滴

陽性對照 陰性對照/自身對照

－

－

2滴

－

1滴

2滴（自身對照）

1滴（自身對照）

－

2滴（陰性對照）

1滴（陰性對照）

3％紅細胞懸液（受檢或已知） 1滴

IgG抗D血清

AB型血清

3％陽性紅細胞懸液

－

－

－

6 結果判定 陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，受檢管出現凝集者為陽性，受檢管不出

現凝集為陰性。凝集強度可參見SXYJ-GZ-0202: 5.2.1.6對結果進行判讀。

7 注意事項

7.1 紅細胞洗滌應迅速，一開始洗滌就不應中途停止。洗滌用鹽水要足量并用力沖入管底，

使壓積于管底的紅細胞松離。切勿用手指堵住管口，顛倒混勻，以防污染來自皮膚的蛋

白。

7.2 離心速度和時間十分重要，應按規定進行，防止細胞丟失。

7.3 如果檢查的抗體為補體依賴抗體，則必需加入新鮮AB型血清，抗球蛋白血清中也應含

有抗C

3d

。

8 依據《全國臨床檢驗操作規程》（第3版）中華人民共和國衛生部醫政司