蛋白純化硫酸銨沉淀鹽析法

2024年3月15日發(作者：趣味話題)

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蛋白純化硫酸銨沉淀鹽析

還能想起那些在熒屏中曾經震撼過我們，具有超能力的英雄么？

蜘蛛俠，敏捷，靈活迅速飛流直下，忽閃直沖高樓；

綠巨人浩克，力量，速度，耐力，在我們的想象力中膨脹；

還有，我們隨身攜帶星形盾牌，品格高尚的美國隊長……

幻想里中的人物形象存在我們的記憶力，然而生物背景出身的我們，總歸要鍛煉出屬于

自己的實驗技能，即便是相同的實驗步驟，每個人做出來的結果也不盡相同，差別在哪？反

復練習，用心總結出屬于自己的心得，轉化為自己的實驗“超能力”吧。本文總結了蛋白純化

硫酸銨沉淀詳細的實驗原理、步驟，供大家參考。

-------鍛煉屬于我們自己的實驗“超能力”之一

我是超級蜘蛛精

看我有勁兒不？

沖啊，我是美國隊長

而我是一只冷靜的科研小蝸牛

這次，我們所要分享的便是一種很常見，但是也很重要的蛋白質純化方法：硫酸銨沉淀

蛋白法，一起走進實驗室吧。

硫酸銨沉淀法是粗分離蛋白時常用的純化和濃縮蛋白的技術。蛋白質的溶解

度和鹽濃度密切相關，在低濃度的條件下，隨著鹽濃度的增加，蛋白質的溶解度

增加；但在高濃度的鹽溶液里，鹽離子競爭性的結合蛋白表面的水分子，破壞蛋

白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白質在疏水作用下聚集形成沉淀。每種蛋白質

的溶解度不同，因此可以用不同濃度的鹽溶液來沉淀不同的蛋白質。硫酸銨的溶

解度大，解離形成大量的NH4

+

、SO

4

2-

離子，會結合大量的水分子，使蛋白質的

溶解度下降，另外，其溫度系數小，不易使蛋白質變性，因此，蛋白質粗分離時

硫酸銨沉淀法是很重要的一種技術，后續可采用層析技術進一步純化蛋白，效率

更高。硫酸銨沉淀法是常用的分離免疫球蛋白的方法。

各種不同蛋白質鹽析需要不同濃度的硫酸銨溶液。在實驗中建議配置不同梯

度濃度的硫酸銨溶液來確定蛋白質沉淀所需的最佳濃度。

（1） 參照如下表格配置不同濃度的硫酸銨溶液；

例如，在25 ℃條件下，配置飽和度為100 %的硫酸銨溶液，稱取767 g的硫酸銨

固體，邊攪拌邊加入到1 L的蒸餾水中，完全溶解后，用氨水或者硫酸調節pH

到7.0。

（2） 沉淀蛋白

將樣品離心，去除沉淀，保留上清液并測量體積；一邊攪拌一邊慢慢的加入硫酸

銨。接著，將溶液放在磁力攪拌器上攪拌6 h，或者4 ℃，攪拌過夜，使蛋白質

充分沉淀。

加入硫酸銨有兩種方式，一種是直接加入硫酸銨固體，在操作上速度緩慢，

不易太快，否則會造成蛋白變性；另一種方式是加入飽和的硫酸銨液體，但若需

要較高濃度的硫酸銨溶液，需要加入較大體積的飽和硫酸銨溶液，在后續實驗操

作中，因蛋白質上清液和硫酸銨飽和溶液的體積之和過大，離心機無法離心，因

此根據需要加入的硫酸銨飽和溶液的體積選擇合適的方法。

另外，每種蛋白質沉淀所需要的硫酸銨溶液的濃度也不同，因此在每次實驗

中應該做好觀察記錄，積累經驗值。分享來自網上的一種簡單的方法來估計蛋白

沉淀所需要的硫酸銨溶液的濃度范圍，供大家參考：

將蛋白質溶液分成5份，每份分別加入硫酸銨至濃度分別為20%、30%、40%、

50%、60%，離心，棄蛋白質沉淀，留取上清，再向上清液中加入硫酸銨，使得

濃度從原先的20%升高到30%，30%的濃度升到40%，40%的濃度升為50%.......，

離心保留沉淀，分析沉淀中是否含有目的蛋白，以此確定沉淀目的蛋白所需要的

最佳硫酸銨溶液的濃度。

（3） 透析除去硫酸銨

將蛋白質溶液離心沉淀，棄上清保留沉淀。

加入10-20 ml的PBS-疊氮化鈉溶液溶解蛋白質，疊氮化鈉不于蛋白質反應，但

能防止蛋白質變性。

蛋白沉淀溶解之后，放入透析袋中透析24-48 h，每隔5 h更換透析液除去硫酸銨。

收集透析液，離心，測定上清中蛋白質的含量。

友情提示：

成長中的實驗達人：

從未犯錯的人，從未試圖創新。

--------愛因斯坦

所以做好詳細的實驗步驟，實驗結果的分析，不斷嘗試，不斷總結吧。

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только для людей, которые используются для обучения, исследований и не должны

использоваться в коммерческих целях.

以下無正文

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