分光光度法測金葡濃度11月22日

2024年3月20日發(作者：行遠)

用分光光度法粗測金黃色葡萄球菌菌懸液的濃度

實驗目的：

通過

對同一菌液同時測吸光度值與平板菌落計數，將兩個結果

做標準曲線。標準曲線做出后，通過測吸光度值間接反應菌懸液的濃

度，用于指導菌懸液的制備。

實驗設備： U-2900 型

分光光度計

波長為600nm

比色皿厚度： cm

實驗材料：空白對照液：0.9%無菌氯化鈉溶液

稀釋液：0.9%無菌氯化鈉溶液

營養肉湯培養基

實驗菌種：金黃色葡萄球菌（新鮮培養物）

實驗步驟：

1.將金黃色葡萄球菌的新鮮培養物接種至營養肉湯培養基中，在30～

35℃恒溫培養箱中培養18～24h。

2. 在無菌陽性室按無菌操作將培養后的金黃色葡萄球菌用0.9%無菌

氯化鈉溶液稀釋成不同濃度的菌懸液 。具體為分別吸取營養肉湯培

養液0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml，0.6ml，0.7ml到10ml 0.9%無菌

氯化鈉溶液中，稀釋成7種不同濃度的原始菌懸液。序號分別為1-7

號。

2.1平板菌落計數法測活菌濃度

取14個營養瓊脂培養基平板，分別從每個原始菌液中，取0.2m

l的菌懸液，用平板涂布法，涂于平板中，標明序號，每個稀釋度涂

2塊平板. 37℃培養箱培養72 h后，可見菌落形成，選取菌落數在3

0~300間的平板進行計數，每組稀釋度相同的平板取平均值作為菌落

數. 計算出原菌液細菌濃度，作為細菌菌液的標準濃度。

2.2分光光度法測菌懸液吸收值

同時將以上5種原始菌液在波長為600nm下測定吸光度。用0.9%

無菌氯化鈉溶液作為空白對照，記錄各原始菌液的吸光度值。

表一：平板菌落計數與吸光度值對比記錄

序號

吸取原培養加樣到平稀釋

液的量（ml）板上的量倍數

---原始菌液

1

2

3

4

5

6

7

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

（ml）

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

5倍

5倍

5倍

5倍

5倍

5倍

5倍

平板計數菌落數

（cfu）

0.058

0.067

0.074

0.082

0.088

0.102

0.105

原始菌液的

吸光度值 含菌量（cfu）

3 結果計算

對同一菌液同時測吸光度值與進行平板菌落計數，將平板菌落計數所得菌液

濃度作為細菌標準濃度c. 根據所測出A值以及相對應的標準濃度c值，作出標

準曲線。