牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方

2024年3月6日發(fā)(作者：印刷知識)

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方：

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細菌根底培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源和能源，磷酸鹽、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供無機鹽。在配制固體培養(yǎng)基時還要參加一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下96℃時溶化，一般實際應(yīng)用時在沸水浴中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在40℃時凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同。

由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細菌〔葷食〕，因此，要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁殖。

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方如下：

牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、NaCl 5g、瓊脂 15—20g、水 1000ml、pH 7．4—7．6〔7.0—8.0〕

三、器材

牛肉膏，蛋白胨， NaCl，瓊脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；

試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，培養(yǎng)基分裝器，扭力天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌鍋，pH試紙〔 pH 5．5—9．0〕，棉花，牛皮紙，記號筆，麻繩，紗布等。

四、操作步驟

1．稱量

按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或外表皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯。也可放在稱量紙上，稱量后直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙別離，然后立即取出紙片。蛋白胨很易吸潮，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈、擦干，再稱取另一藥品，瓶蓋也不要蓋錯。

2．溶化

在上述燒杯中可先參加少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。待藥品完全溶解后，補充水分到所需的總體積。如果配制固體培養(yǎng)基，將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最后補足所失的水分。

3．調(diào)pH

在未調(diào)pH前，先用精細pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴參加1mol/L NaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH值，直至pH達7．6。反之，那么用1mol/L HCl進展調(diào)節(jié)。注意pH值不要調(diào)過頭，以防止回調(diào)，否那么，將會影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。

對于有些要求pH值較準(zhǔn)確的微生物，其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計進展〔使用方法，可參考有關(guān)說明書〕。

4．過濾

趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利結(jié)果的觀察。一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去〔本實驗無需過濾〕。

5．分裝

按實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角燒瓶內(nèi)。分裝裝置見圖Ⅴ-1。

分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。

(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。

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(2)固體分裝分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌后制成斜面，如圖Ⅴ-2。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。

(3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。

6．加塞

培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能〔棉塞制作方法附本實驗后面〕。

7．包扎

加塞后，將全部試管用麻繩捆扎好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結(jié)形式扎好，使用時容易解開，同樣用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。

8．滅菌

將上述培養(yǎng)基以1．05kg/cm2〔15磅/英寸2〕，121．3℃， 20分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌，那么應(yīng)放入冰箱內(nèi)暫存。

9．?dāng)R置斜面

將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右，將試管棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。

10．無菌檢查

將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。

PDA培養(yǎng)基配方：

特點及用途

PDA培養(yǎng)基是人們對馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的簡稱，即Potato Dextro Agar

〔Medium〕，依次對應(yīng)馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂的英文。

一種常用的培養(yǎng)基，宜培養(yǎng)酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌〔素食〕。酵母菌PH〔3.8~6.0〕，霉菌〔4.0~5.8〕等。

按物理性狀劃分：固體培養(yǎng)基 ，按培養(yǎng)基成分劃分：半合成培養(yǎng)基

配方

馬鈴薯 200克 葡萄糖 20克 瓊脂 15~20克 自來水 1000毫升 自然PH

配制步驟

其做法是稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切成小塊，加水煮爛〔煮沸20~30分鐘，能被玻璃棒戳破即 可〕，用四層紗布過濾，再據(jù)實際實驗需要加葡萄糖和瓊脂，繼續(xù)加熱攪拌混勻，稍冷卻后再補足水分至1000毫升，分裝試管，加塞、包扎，〔121℃〕滅菌20分鐘左右后取出試管擺斜面，冷卻后貯存?zhèn)溆谩?

其他事項

1.培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，必須放在37C溫箱培養(yǎng)24h，無菌生長者方可使用。

培養(yǎng)基一般不需要調(diào)pH。對于要調(diào)節(jié)pH的培養(yǎng)基，一般用pH試紙測定其pH。如果培養(yǎng)基偏酸或偏堿時，可用lmol／LNaOH或lmol／LHCL溶液進展調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)2 / 3

時應(yīng)逐滴參加NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過堿破壞培養(yǎng)基成分。

3.培養(yǎng)基在使用時也可以做成不含瓊脂的液體培養(yǎng)基，用于菌類的震蕩培養(yǎng)。

4.培養(yǎng)基也可以參加氯霉素或土霉素，參加量為0.1g/L培養(yǎng)基，主要是為了抑制細菌的生長，減少干擾性

高氏1號培養(yǎng)及配方：

培養(yǎng)放線菌用 ，改進的高氏

可溶性淀粉 2g ，KNO3 0.1g ，K2HPO4 0.05g ，MgSO4? 7H2O 0.05g ，NaCl 0.05g ，F(xiàn)eSO4? 7H2O 0.001g 〔母液〕，瓊脂 2g ，自來水 100mL ，pH 7.2～7.4 ，滅菌

1.05kg/cm2，20min

配制時，先用少量冷水，將淀粉調(diào)成糊狀，倒入少于所需水量的沸水中，在火上加熱，邊攪拌邊依次逐一溶化其他成分，溶化后，補足水分到100ml，調(diào)pH，121℃滅菌20min。

高溫滅菌后，倒平皿前參加10%酚2滴至100ml培養(yǎng)基中混勻，將培養(yǎng)基倒入平皿內(nèi)約15ml/皿。

高氏1號：

可溶性淀粉〔20g〕，KNO3〔1g〕，K2HPO4〔0.5g〕，MgSO4? 7H2O〔0.5g〕，NaCl〔0.05g〕，F(xiàn)eSO4? 7H2O〔0.01g〕，瓊脂 20g，pH=7.4-7.6

和改進的差異就在于有沒有FeSO4? 7H2O 高氏常常配完后變成褐色也是由于Fe2+氧化為Fe3+的關(guān)系，所以常常有人用螯合的FeSO4，防止氧化。

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