一種提高黃酮類化合物提取收率的方法與流程
1.本發明屬于植物提取技術領域，更具體的說是涉及一種提高黃酮類化合物提取收率的方法。
背景技術：
2.黃酮類化合物是一類低分子量的天然物質，是植物體內的次級代謝產物，廣泛分布于蕓香科、唇形科、豆科、傘形科、銀杏科與菊科等植物體內。黃酮類化合物具有c6-c3-c6基本構型，主要分為黃酮及黃酮醇類、二氫黃酮及二氫黃酮醇類、黃烷醇類、異黃酮及二氫異黃酮類、雙黃酮類，以及查爾酮、花苷等。研究表明，黃酮類化合物具有清除生物體內的自由基、抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗炎癥、抗過敏、抗衰老等作用，且無毒無害，因此在食品、藥品、保健品等方面得到廣泛應用。
3.一些含活潑的酚羥基的黃酮類化合物，結構穩定性較差，易出現分子重排和降解，所以在食品加工過程中易損失，如在熱處理、ph變化、氧化劑、金屬離子、酶等作用下降解，從而失去活性。
4.因此，如何提供一種提高黃酮類化合物提取收率的方法是本領域技術人員亟需解決的問題。
技術實現要素：
5.有鑒于此，本發明提供了一種提高黃酮類化合物提取收率的方法。
6.為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：
7.一種提高黃酮類化合物提取收率的方法，包括以下步驟：
8.(1)將糊精水溶液調節ph并加熱，加入普魯蘭酶、麥芽寡糖基海藻糖合成酶、麥芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后的植物原料組織，攪拌反應得料液a；
9.(2)將料液a加熱，進行微波提取，得料液b；
10.(3)將料液b經過濾、濃縮、干燥即得黃酮類提取物。
11.本發明的有益效果：與現有技術相比，本發明公開提供了一種減少黃酮類提取物含量損失的方法，取得的技術優勢在于以天然植物組織作為主要原料，原料天然，且利用水提法進行提取減少了有機溶劑殘留的危害；通過微波輔助萃取，可以增加黃酮類活性物質的提取率；利用糊精與酶反應生成海藻糖可以減少黃酮類物質的損失；本發明的制備方法反應條件溫和，生產過程易于控制，產品質量穩定，可以廣泛用于食品、醫藥、日用化工等領域。
12.進一步，步驟(1)上述糊精水溶液的濃度為30～35wt％，糊精水溶液de值為7～9，調節ph為6.0～7.0，加熱溫度為37～40℃，攪拌轉速為100～300r/min，攪拌時間為2～4h。
13.進一步，步驟(1)上述普魯蘭酶用量為糊精質量的1.6～2
‰
，麥芽寡糖基海藻糖合成酶用量為糊精質量的2～4％，麥芽寡糖基海藻糖水解酶用量為糊精質量的3～6％，糖化酶用量為糊精質量的0.4～1
‰
。
14.進一步，步驟(1)上述植物原料組織為蔓越莓、枸杞、沙棘、酸棗、藍莓、桑葚中的一種或幾種，植物原料組織和糊精水溶液的質量比為1:8～10。
15.植物原料組織為果實。
16.進一步，步驟(1)上述粉碎至粒徑小于20-40目。
17.進一步，步驟(2)上述加熱溫度為58～60℃，微波功率為800w，提取時間為3～6min。
18.進一步，步驟(3)上述過濾使用濾膜微孔大小為0.45μm，濃縮至相對密度為1.05～1.2，干燥方法為噴霧冷凍干燥，預凍終溫-40℃，干燥溫度為-60℃～-40℃，壓力為1000pa，干燥至含水量為0.1％～0.2％。
19.進一步，步驟(3)上述黃酮類提取物中黃酮類化合物為原花青素、花青素、花糖苷、花苷酸、蘆丁、酸棗仁黃酮、楊梅素、二氫楊梅素、酚和木犀草素。
具體實施方式
20.下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。
21.本發明酶制劑均為市售取得，其中普魯蘭酶酶活為2000u/ml，麥芽寡糖基海藻糖合成酶酶活為150u/ml，麥芽寡糖基海藻糖水解酶酶活為350u/ml，糖化酶酶活為50000u/ml，對其來源、品牌無要求。
22.實施例1
23.提高黃酮類化合物提取收率的方法，包括以下步驟：
24.(1)將濃度為30wt％，de值為7的糊精水溶液調節ph為6.0，37℃加熱，加入普魯蘭酶、麥芽寡糖基海藻糖合成酶、麥芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后過20目篩的植物原料組織蔓越莓，植物原料組織和糊精水溶液的質量比為1:8，普魯蘭酶用量為糊精質量的1.6
‰
，麥芽寡糖基海藻糖合成酶用量為糊精質量的2％，麥芽寡糖基海藻糖水解酶用量為糊精質量的3％，糖化酶用量為糊精質量的0.4
‰
，攪拌反應得料液a，攪拌轉速為100r/min，攪拌時間為2h；
25.(2)將料液a 58℃加熱，進行微波提取，微波功率為800w，提取時間為3min，得料液b；
26.(3)將料液b使用微孔大小為0.45μm濾膜過濾、濃縮至相對密度為1.05，預凍至-40℃，-60℃，1000pa噴霧冷凍干燥至水分含量為0.1％，即得黃酮類提取物，黃酮類化合物收率為3.62％，測得黃酮類提取物中黃酮類化合物含量為43.62％。
27.本發明實施例中黃酮類化合物收率指黃酮類化合物總量占植物原料組織質量的百分比，黃酮類化合物為黃酮類提取物中黃酮類化合物為原花青素、花青素、花糖苷、花苷酸、蘆丁、酸棗仁黃酮、楊梅素、二氫楊梅素、酚和木犀草素。
28.實施例2
29.提高黃酮類化合物提取收率的方法，包括以下步驟：
30.(1)將濃度為32wt％，de值為8的糊精水溶液調節ph為6.5，38℃加熱，加入普魯蘭
酶、麥芽寡糖基海藻糖合成酶、麥芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后過30目篩的植物原料組織桑葚，植物原料組織和糊精水溶液的質量比為1:9，普魯蘭酶用量為糊精質量的1.7
‰
，麥芽寡糖基海藻糖合成酶用量為糊精質量的3％，麥芽寡糖基海藻糖水解酶用量為糊精質量的4％，糖化酶用量為糊精質量的0.6
‰
，攪拌反應得料液a，攪拌轉速為200r/min，攪拌時間為3h；
31.(2)將料液a 59℃加熱，進行微波提取，微波功率為800w，提取時間為4min，得料液b；
32.(3)將料液b使用微孔大小為0.45μm濾膜過濾、濃縮至相對密度為1.1，預凍至-40℃，-40℃，1000pa噴霧冷凍干燥至水分含量為0.2％，即得黃酮類提取物，黃酮類化合物收率為3.86％，測得黃酮類提取物中黃酮類化合物含量為44.32％。
33.實施例3
34.提高黃酮類化合物提取收率的方法，包括以下步驟：
35.(1)將濃度為35wt％，de值為9的糊精水溶液調節ph為7.0，39℃加熱，加入普魯蘭酶、麥芽寡糖基海藻糖合成酶、麥芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后過40目篩的植物原料組織酸棗和藍莓(質量比為1:1)，植物原料組織和糊精水溶液的質量比為1:10，普魯蘭酶用量為糊精質量的2
‰
，麥芽寡糖基海藻糖合成酶用量為糊精質量的4％，麥芽寡糖基海藻糖水解酶用量為糊精質量的6％，糖化酶用量為糊精質量的1
‰
，攪拌反應得料液a，攪拌轉速為300r/min，攪拌時間為4h；
36.(2)將料液a 60℃加熱，進行微波提取，微波功率為800w，提取時間為6min，得料液b；
37.(3)將料液b使用微孔大小為0.45μm濾膜過濾、濃縮至相對密度為1.2，預凍至-40℃，-50℃，1000pa噴霧冷凍干燥至含水量為0.12％，即得黃酮類提取物，黃酮類化合物收率為3.54％，測得黃酮類提取物中黃酮類化合物含量為43.24％。
38.實施例4
39.提高黃酮類化合物提取收率的方法，包括以下步驟：
40.(1)將濃度為30wt％，de值為7的糊精水溶液調節ph為6.5，40℃加熱，加入普魯蘭酶、麥芽寡糖基海藻糖合成酶、麥芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后過30目篩的植物原料組織枸杞，植物原料組織和糊精水溶液的質量比為1:8，普魯蘭酶用量為糊精質量的1.6
‰
，麥芽寡糖基海藻糖合成酶用量為糊精質量的2％，麥芽寡糖基海藻糖水解酶用量為糊精質量的3％，糖化酶用量為糊精質量的0.5
‰
，攪拌反應得料液a，攪拌轉速為150r/min，攪拌時間為2.5h；
41.(2)將料液a 60℃加熱，進行微波提取，微波功率為800w，提取時間為4min，得料液b；
42.(3)將料液b使用微孔大小為0.45μm濾膜過濾、濃縮至相對密度為1.05，預凍至-40℃，-50℃，1000pa噴霧冷凍干燥至含水量為0.15％，即得黃酮類提取物，黃酮類化合物收率為3.71％，測得黃酮類提取物中黃酮類化合物含量為42.94％。
43.實施例5
44.提高黃酮類化合物提取收率的方法，包括以下步驟：
45.(1)將濃度為32wt％，de值為8的糊精水溶液調節ph為6.0，40℃加熱，加入普魯蘭
酶、麥芽寡糖基海藻糖合成酶、麥芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后過20目篩的植物原料組織沙棘，植物原料組織和糊精水溶液的質量比為1:10，普魯蘭酶用量為糊精質量的1.9
‰
，麥芽寡糖基海藻糖合成酶用量為糊精質量的3％，麥芽寡糖基海藻糖水解酶用量為糊精質量的5％，糖化酶用量為糊精質量的0.8
‰
，攪拌反應得料液a，攪拌轉速為250r/min，攪拌時間為3h；
46.(2)將料液a 58℃加熱，進行微波提取，微波功率為800w，提取時間為5min，得料液b；
47.(3)將料液b使用微孔大小為0.45μm濾膜過濾、濃縮至相對密度為1.1，預凍至-40℃，-40℃，1000pa噴霧冷凍干燥至含水量為0.16％，即得黃酮類提取物，黃酮類化合物收率為3.59％，測得黃酮類提取物中黃酮類化合物含量為43.78％。
48.對比例1
49.取粉碎后過40目篩的蔓越莓加入到水中，料液比為1:10，80℃，200r/min攪拌提取5h，0.45μm濾膜微孔過濾后，濃縮至相對密度為1.1，-20℃噴霧冷凍干燥至含水量0.10％，得黃酮類提取物。黃酮類化合物收率為2.17％，測得黃酮類提取物中黃酮類化合物含量為18.82％。
50.對比例2
51.取粉碎后過40目篩的蔓越莓加入到水中，料液比為1:10，80℃，200r/min攪拌提取5h，800w微波提取5min，0.45μm濾膜微孔過濾后，濃縮至相對密度為1.1，-30℃噴霧冷凍干燥至含水量為0.15％，制得黃酮類提取物。黃酮類化合物收率為2.58％，測得黃酮類提取物中黃酮類化合物含量為21.56％。
52.對比例3
53.(1)將濃度為32wt％，de值為8的糊精水溶液調節ph為6.0，40℃加熱，加入普魯蘭酶、麥芽寡糖基海藻糖合成酶、麥芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后過40目篩的植物原料組織沙棘，植物原料組織和糊精水溶液的質量比為1:10，普魯蘭酶用量為糊精質量的1.9
‰
，麥芽寡糖基海藻糖合成酶用量為糊精質量的3％，麥芽寡糖基海藻糖水解酶用量為糊精質量的5％，糖化酶用量為糊精質量的0.8
‰
，攪拌反應得料液a，攪拌轉速為300r/min，攪拌時間為3h；
54.(2)將料液a使用微孔大小為0.45μm濾膜過濾、濃縮至相對密度為1.1、60℃干燥至含水量為0.2％，即得黃酮類提取物，黃酮類化合物收率為2.83％，測得黃酮類提取物中黃酮類化合物含量為29.96％。
55.對比例4
56.(1)將濃度為20wt％，de值為5的糊精水溶液調節ph為7.0，60℃加熱，加入普魯蘭酶、麥芽寡糖基海藻糖合成酶、麥芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后過40目篩的植物原料組織藍莓，植物原料組織和糊精水溶液的質量比為1:20，普魯蘭酶用量為糊精質量的3
‰
，麥芽寡糖基海藻糖合成酶用量為糊精質量的1％，麥芽寡糖基海藻糖水解酶用量為糊精質量的1％，糖化酶用量為糊精質量的0.1
‰
，攪拌反應得料液a，攪拌轉速為100r/min，攪拌時間為5h；
57.(2)將料液a 80℃加熱，進行微波提取，微波功率為800w，提取時間為10min，得料液b；
58.(3)將料液b使用微孔大小為0.45μm濾膜過濾、濃縮至無水分蒸出，60℃干燥至含水量為0.2％，即得黃酮類提取物，黃酮類化合物收率為2.94％，測得黃酮類提取物中黃酮類化合物含量為27.07％。
59.對比例5
60.取粉碎后過40目篩的蔓越莓加入到75％乙醇水溶液中，料液比為1:10，80℃，200r/min攪拌提取4h，0.45μm濾膜微孔過濾后，濃縮至相對密度為1.1，-20℃噴霧冷凍干燥至含水量為0.16％，制得黃酮類提取物。黃酮類化合物收率為2.76％，測得黃酮類提取物中黃酮類化合物含量為25.65％。
61.結論：綜上所述，與傳統的熱水提取及有機溶劑提取法相比，本發明的提取方法可以明顯提高植物組織原料中總黃酮類化合物的提取收率，并且提取物中總黃酮類化合物的含量也較高，可以廣泛用于食品，醫藥，日用化工等領域。
62.對所公開的實施例的說明，使本領域專業技術人員能夠實現或使用本發明。對這些實施例的多種修改對本領域的專業技術人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發明的精神或范圍的情況下，在其它實施例中實現。因此，本發明將不會被限制于本文所示的這些實施例，而是要符合與本文所公開的原理和新穎特點相一致的最寬的范圍。
