一種富硒葉面肥及其制備方法與應用與流程
1.本發明涉及一種葉面肥，特別是涉及一種富硒葉面肥及其制備方法與應用。
背景技術：
2.硒是人體必需的微量元素，人體缺硒會導致癌癥、肝功能衰竭、心腦血管疾病、生育力降低、智力缺陷等四十多種疾病的發生。由于人體自身不能自制硒，所以世界衛生組織建議每天補充200μg硒，可有效預防多種疾病的高發。全世界有40多個國家和地區存在缺硒現象，大約有10億人口受到硒缺乏的影響；中國大約有2/3的人口硒攝入量不足，全國各地出現不同程度缺硒現象占72％左右。世界營養學家、生物化學會主席巴博亞羅拉博士稱：硒是延長壽命最重要的礦物質營養素，體現在它對人體的全面保護，我們不應該在生病時才想到它。
3.硒是迄今為止發現的最重要的抗衰老元素之一，廣西巴馬縣是世界著名四大長壽地區之一。中國科學院專家對巴馬的研究表明：巴馬土壤、谷物中的硒含量高于全國平均水平10倍以上，百歲老人血液中的硒含量高出正常人的3-6倍。后來在安徽省石臺縣又發現一個長壽村，80歲以上老人占全村人口的12％，更為奇特的是50年來未發現一例癌癥患者、心腦血管、糖尿病患者和肥胖患者。經對該村土壤中硒含量分析測定表明：硒含量高出一般地方10倍。原來，硒元素是抗氧化劑谷胱甘肽過氧化物酶的活性成分，人體補充了充足的硒元素能有效清除自由基，抗氧化，延緩衰老。
4.中國專利申請cn201510434750.4公開了一種含海藻酸等多種植物提取物的液態葉面肥、制備方法和應用方法，該液態葉面肥的各主要組份的重量配比為:海藻酸5％-8％、油茶皂苷提取物9％-12％、橘皮黃酮提取物6％-9％、蕓苔素內酯0.02％-0.05％、無機元素1％-2％、甘油12％-15％、乙醇15％-18％、乙酸3％-5％和水48.98％-30.95％；其中：海藻酸的含量70％以上，油茶皂苷提取物的含量70％以上，橘皮黃酮提取物的含量30％以上，蕓苔素內酯的含量50％以上，無機元素為n,p,k,ca,mg,na,zn,cu,fe,mn,s,cl,se,b，甘油為藥品級，乙醇為90％-95％、乙酸為98％的冰醋酸，水為純化水。該發明雖然包含多種植物提取物，但存在硒含量偏低的問題。
技術實現要素：
5.本發明要解決的技術問題是提供一種富硒葉面肥的制備方法，采用微生物高密度發酵技術制得富硒葉面肥，是一種安全、穩定和高效富硒的技術手段，所述富硒葉面肥不但對植物有抗逆防病、增產提質和高效富硒的效果，而且能夠提升人體硒含量，增強人體身心健康。
6.為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：
7.一種富硒葉面肥的制備方法，包括以下步驟：
8.s1.發酵階段一：發酵階段一使用的原料為：按重量百分比計，糖蜜1-3％，尿素0.1-0.3％，氯化鈉0.1-0.3％，磷酸氫二鉀0.05-0.2％，余量為水，各原料的重量百分比之
和為100％；
9.s1.1在發酵罐1中投入糖蜜、尿素、氯化鈉、磷酸氫二鉀，加入水至原料總重量的80％，攪拌均勻后加熱滅菌，121℃下滅菌20-30分鐘，冷卻至室溫；
10.s1.2將接種菌在發酵培養基中培養至od
600
達到1得到種子液，將種子液按1％接種量添加至發酵罐1中，同時補充水至原料總重量的100％進行發酵；
11.s2.發酵階段二：發酵階段二使用的原料為：按重量百分比計，糖蜜1-3％，亞硒酸鈉2-5％，鉬酸銨0.5-2％，硼酸0.1-0.3％，海魚酶解濃縮液7-10％，硒代氨基酸0.2-0.3％，植物生長促進因子0.1-0.2％，余量為水，各原料的重量百分比之和為100％；
12.在發酵罐2中投入糖蜜、亞硒酸鈉、鉬酸銨、硼酸、海魚酶解濃縮液、硒代氨基酸、植物生長促進因子，加入水至原料總重量的100％，攪拌均勻后121℃下滅菌20-30分鐘，冷卻至室溫得到發酵補料；
13.s3.發酵階段三：將步驟s2得到的發酵補料加入發酵階段一的發酵罐1中混合發酵得到富硒葉面肥。
14.其中，亞硒酸鈉屬于分析純級別，純度≥99.9％；海魚酶解濃縮液富含18種l-氨基酸，包括賴氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、谷氨酸等；枯草芽孢桿菌具備分泌蛋白抗菌肽，拮抗常見病原菌的功能，常見病原菌包括桿菌、立枯絲核菌、尖孢鐮刀菌、禾谷鐮孢菌等，酵母菌可加速發酵進程；制備出的富硒葉面肥能夠有效預防青枯病、枯萎病、根腐病、軟腐病、病等病害的發生；枯草芽孢桿菌和酵母菌在富硒葉面肥中的菌體數量≥10億cfu/ml。
15.進一步地，本發明所述發酵階段一使用的原料與發酵階段二使用的原料的重量比為1:1。
16.進一步地，本發明所述步驟s1.2中，接種菌由重量比為1:1的枯草芽孢桿菌和酵母菌組成，枯草芽孢桿菌的發酵培養基為nb培養基，其組成為蛋白胨10g，牛肉粉3g，氯化鈉5g，水1000ml；酵母菌的發酵培養基為ypd培養基，其組成為葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母膏5g，水1000ml。
17.進一步地，本發明所述步驟s1.2中，發酵時發酵罐1的溫度為28-34℃，攪拌速度為180-200rpm，壓強為0.1-0.15mpa，發酵時間為60-72小時，ph值為6.5-7.2。
18.進一步地，本發明所述步驟s2中，海魚酶解濃縮液的制備步驟為：
19.(1)收集海洋低值魚，并將其裝入發酵罐中；
20.(2)向發酵罐中添加有機質降解菌株、復合蛋白酶、水，有機質降解菌株為枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、暹羅芽孢桿菌、貝萊斯芽孢桿菌或酵母菌中的其中一種或兩種，復合蛋白酶為中性蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶中的其中一種或幾種，海洋低值魚、有機質降解菌株、復合蛋白酶、水的重量比為1:0.01:0.02:6；
21.(3)在48-60℃、180-200rpm轉速、0.1-0.15mpa壓強發酵條件下發酵酶解12-15小時得到酶解液，將酶解液50℃下濃縮至原體積的1/4，得到海魚酶解濃縮液。
22.進一步地，本發明所述步驟s2中，硒代氨基酸為硒代半胱氨酸或硒代蛋氨酸，植物生長促進因子為鈷氨素、糖醇鈣、葉酸或泛酸中的其中一種或兩種
23.進一步地，本發明所述步驟s3中，發酵時發酵罐1的溫度為28-34℃，攪拌速度為180-200rpm，壓強為0.1-0.15mpa，發酵時間為42-60小時，ph值為7.5-8.0。
24.本發明還提供了上述制備方法得到的富硒葉面肥以及該富硒葉面肥的在農作物生長方面的應用。
25.進一步地，本發明所述農作物為禾谷類、瓜果蔬菜類、果樹類或茶樹類，所述富硒葉面肥在農作物的施用方式為稀釋20-500倍后葉面噴施。
26.實際應用中，本發明制得的富硒葉面肥按稀釋濃度20-500倍液定量噴施于溫室大棚盆栽小白菜葉面上，硒含量為2.08-11.57mg/kg，硒吸收轉化率為1.64-9.13％；在水稻灌漿初期(揚花結束)稀釋200倍噴施1次，硒含量達0.291mg/kg，達到國家富硒標準《gb/t 22499-2008富硒稻谷》規定含量，稻谷增產11.72％；在小白菜(上海青)生育期稀釋200倍液壓噴霧器葉面噴施1次，硒含量達0.248mg/kg。
27.與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：
28.(1)本發明采用微生物高密度發酵雙向螯合技術，安全性較高，能有效提高植物有機硒轉換率，而且能夠有效抑制植物常見病蟲害。
29.(2)本發明制得的富硒葉面肥中硒的濃度≥1.5％，還添加了富含18種l-氨基酸的海魚酶解濃縮液，功能微生物數量≥10億cfu/ml，營養物質含量高于其他同類產品。
30.(3)本發明制得的富硒葉面肥施用于各類農作物上能有效提高農作物產品硒含量，能達到國家相關富硒標準的規定數值。參考富硒標準包括：《gb/t 22499-2008富硒稻谷》、《ny/t600-2002富硒茶》、《gh/t 1135-2017富硒農產品》、《db36/t 566-2017富硒食品硒含量分類標準》、《dbs64/007-2021富硒食品硒含量要求》、《db61/t 556-2018富硒含硒食品與相關產品硒含量標準》。
具體實施方式
31.下面將結合具體實施例來詳細說明本發明，在此本發明的示意性實施例及其說明用來解釋本發明，但并不作為對本發明的限定。
32.實施例1
33.按照以下步驟制備富硒葉面肥：
34.s1.發酵階段一：發酵階段一使用的原料為：按重量百分比計，糖蜜2％，尿素0.25％，氯化鈉0.25％，磷酸氫二鉀0.06％，余量為水，各原料的重量百分比之和為100％；
35.s1.1在發酵罐1中投入糖蜜、尿素、氯化鈉、磷酸氫二鉀，加入水至原料總重量的80％，攪拌均勻后加熱滅菌，121℃滅菌30分鐘，冷卻至室溫；
36.s1.2將接種菌在發酵培養基中培養至od
600
達到1得到種子液，將種子液按1％接種量添加至發酵罐1中，同時補充水至原料總重量的100％進行發酵，接種菌由重量比為1:1的枯草芽孢桿菌和酵母菌組成，枯草芽孢桿菌的發酵培養基為nb培養基，其組成為蛋白胨10g，牛肉粉3g，氯化鈉5g，水1000ml；酵母菌的發酵培養基為ypd培養基，其組成為葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母膏5g，水1000ml；發酵時發酵罐1的溫度為28℃，攪拌速度為200rpm，壓強為0.1mpa，發酵時間為72小時，ph值為6.75；
37.s2.發酵階段二：發酵階段二使用的原料為：按重量百分比計，糖蜜2％，亞硒酸鈉3％，鉬酸銨1％，硼酸0.2％，海魚酶解濃縮液10％，硒代半胱氨酸0.25％，鈷氨素0.1％，余量為水，各原料的重量百分比之和為100％；發酵階段一使用的原料與發酵階段二使用的原料的重量比為1:1；
38.在發酵罐2中投入糖蜜、亞硒酸鈉、鉬酸銨、硼酸、海魚酶解濃縮液、硒代半胱氨酸、鈷氨素，加入水至原料總重量的100％，攪拌均勻后121℃滅菌30分鐘，冷卻至室溫得到發酵補料；
39.s3.發酵階段三：將步驟s2得到的發酵補料加入發酵階段一的發酵罐1中混合發酵得到富硒葉面肥，發酵時發酵罐1的溫度為28℃，攪拌速度為200rpm，壓強為0.1mpa，發酵時間為48小時，ph值為7.52。
40.步驟s2中，海魚酶解濃縮液的制備步驟為：
41.(1)收集海洋低值魚，并將其裝入發酵罐中；
42.(2)向發酵罐中添加有機質降解菌株、復合蛋白酶、水，有機質降解菌株為枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌，復合蛋白酶為中性蛋白酶、酸性蛋白酶，海洋低值魚、有機質降解菌株、復合蛋白酶、水的重量比為1:0.01:0.02:6；
43.(3)在50℃、190rpm轉速、0.12mpa壓強發酵條件下發酵酶解13小時得到酶解液，將酶解液50℃下濃縮至原體積的1/4，得到海魚酶解濃縮液。
44.對比例
45.按照以下步驟制備富硒葉面肥：
46.s1.使用的原料為：按重量百分比計，糖蜜4％，尿素0.25％，氯化鈉0.25％，磷酸氫二鉀0.06％，亞硒酸鈉3％，鉬酸銨1％，硼酸0.2％，海魚酶解濃縮液10％，硒代半胱氨酸0.25％，鈷氨素0.1％，余量為水，各原料的重量百分比之和為100％；在發酵罐1中投入糖蜜、尿素、氯化鈉、磷酸氫二鉀，加入水至原料總重量的80％，攪拌均勻后加熱滅菌，121℃滅菌30分鐘，冷卻至室溫；
47.s2.將接種菌在發酵培養基中培養至od
600
達到1得到種子液，將種子液按1％接種量添加至發酵罐1中，同時補充水至原料總重量的100％進行發酵得到葉面肥，接種菌由重量比為1:1的枯草芽孢桿菌和酵母菌組成，枯草芽孢桿菌的發酵培養基為nb培養基，其組成為蛋白胨10g，牛肉粉3g，氯化鈉5g，水1000ml；酵母菌的發酵培養基為ypd培養基，其組成為葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母膏5g，水1000ml；發酵時發酵罐1的溫度為28℃，攪拌速度為200rpm，壓強為0.1mpa，發酵時間為72小時，ph值為6.75。
48.步驟s2中，海魚酶解濃縮液的制備步驟為：
49.(1)收集海洋低值魚，并將其裝入發酵罐中；
50.(2)向發酵罐中添加有機質降解菌株、復合蛋白酶、水，有機質降解菌株為枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌，復合蛋白酶為中性蛋白酶、酸性蛋白酶，海洋低值魚、有機質降解菌株、復合蛋白酶、水的重量比為1:0.01:0.02:6；
51.(3)在50℃、190rpm轉速、0.12mpa壓強發酵條件下發酵酶解13小時得到酶解液，將酶解液50℃下濃縮至原體積的1/4，得到海魚酶解濃縮液。
52.對比例與實施例1使用的原料一樣，區別僅在于發酵時采用的是一次發酵方式，而實施例1是分批發酵方式，其余制備步驟基本與實施例1一樣。
53.試驗例1
54.在實驗大棚進行小白菜(上海青)噴施實施例1制得的富硒葉面肥的盆栽試驗，定量至0.25ml/棵/盆/次，濃度稀釋20倍液，在小白菜生育期噴施2次，間隔7天噴施1次，最終測得小白菜硒含量為11.57mg/kg，硒吸收轉化率為9.13％(如表1所示)。
55.對比試驗例
56.在實驗大棚進行小白菜(上海青)噴施對比例制得的葉面肥的盆栽試驗，定量至0.25ml/棵/盆/次，濃度稀釋20倍液，在小白菜生育期噴施2次，間隔7天噴施1次，最終測得小白菜硒含量為8.64mg/kg，硒吸收轉化率為6.82％(如表1所示)。
57.試驗例2
58.在實驗大棚進行小白菜(上海青)噴施實施例1制得的富硒葉面肥的盆栽試驗，定量至0.25ml/棵/盆/次，濃度稀釋50倍液，在小白菜生育期噴施2次，間隔7天噴施1次，最終測得小白菜硒含量為8.19mg/kg，硒吸收轉化率為6.46％(如表1所示)。
59.試驗例3
60.在實驗大棚進行小白菜(上海青)噴施實施例1制得的富硒葉面肥的盆栽試驗，定量至0.25ml/棵/盆/次，濃度稀釋100倍液，在小白菜生育期噴施2次，間隔7天噴施1次，最終測得小白菜硒含量為4.70mg/kg，硒吸收轉化率為3.71％(如表1所示)。
61.試驗例4
62.在實驗大棚進行小白菜(上海青)噴施實施例1制得的富硒葉面肥的盆栽試驗，定量至0.25ml/棵/盆/次，濃度稀釋200倍液，在小白菜生育期噴施2次，間隔7天噴施1次，最終測得小白菜硒含量為4.05mg/kg，硒吸收轉化率為3.20％(如表1所示)。
63.試驗例5
64.在實驗大棚進行小白菜(上海青)噴施實施例1制得的富硒葉面肥的盆栽試驗，定量至0.25ml/棵/盆/次，濃度稀釋300倍液，在小白菜生育期噴施2次，間隔7天噴施1次，最終測得小白菜硒含量為2.60mg/kg，硒吸收轉化率為2.06％(如表1所示)。
65.試驗例6
66.在實驗大棚進行小白菜(上海青)噴施實施例1制得的富硒葉面肥的盆栽試驗，定量至0.25ml/棵/盆/次，濃度稀釋500倍液，在小白菜生育期噴施2次，間隔7天噴施1次，最終測得小白菜硒含量為2.08mg/kg，硒吸收轉化率為1.64％(如表1所示)。
67.試驗例7
68.在實驗大棚進行小白菜(上海青)噴施實施例1制得的富硒葉面肥的盆栽試驗，定量至0.25ml/棵/盆/次，濃度稀釋200倍液，在小白菜生育期噴施3次，間隔7天噴施1次，最終測得小白菜硒含量為6.59mg/kg，硒吸收轉化率為3.47％(如表1所示)。
69.試驗例8
70.在實驗大棚進行小白菜(上海青)噴施實施例1制得的富硒葉面肥的盆栽試驗，定量至0.25ml/棵/盆/次，濃度稀釋200倍液，在小白菜生育期噴施1次，最終測得小白菜硒含量為2.75mg/kg，硒吸收轉化率為4.34％(如表1所示)。
71.試驗例9
72.在實驗大棚進行小白菜(上海青)噴施實施例1制得的富硒葉面肥的盆栽試驗，定量至0.25ml/棵/盆/次，濃度稀釋300倍液，在小白菜生育期噴施2次，最終測得小白菜硒含量為2.44mg/kg，硒吸收轉化率為3.85％(如表1所示)。
[0073][0074][0075]
表1
[0076]
由表1可以看出，本發明制得的富硒葉面肥施用于小白菜上能有效提高小白菜的硒含量。此外，對比試驗例使用的葉面肥的制備步驟與試驗例1不同，其硒含量和硒吸收轉化率明顯低于試驗例1，說明本發明采用的發酵方式能進一步提高富硒葉面肥的硒含量。
[0077]
試驗例10
[0078]
經過2年田間試驗，將本發明實施例1制備的富硒葉面肥施用于各種類農作物(包括禾谷類、瓜果蔬菜類、果樹類、茶樹等經濟作物)，農作物的硒含量均可達到國家相關富硒標準，試驗結果如表2所示：
[0079][0080]
表2
[0081]
由表2可以看出，本發明制得的富硒葉面肥施用于各類農作物上能有效提高農作
物產品硒含量。
[0082]
實施例2
[0083]
按照以下步驟制備富硒葉面肥：
[0084]
s1.發酵階段一：發酵階段一使用的原料為：按重量百分比計，糖蜜1％，尿素0.3％，氯化鈉0.3％，磷酸氫二鉀0.2％，余量為水，各原料的重量百分比之和為100％；
[0085]
s1.1在發酵罐1中投入糖蜜、尿素、氯化鈉、磷酸氫二鉀，加入水至原料總重量的80％，攪拌均勻后加熱滅菌，121℃滅菌20分鐘，冷卻至室溫；
[0086]
s1.2將接種菌在發酵培養基中培養至od
600
達到1得到種子液，將種子液按1％接種量添加至發酵罐1中，同時補充水至原料總重量的100％進行發酵，接種菌由重量比為1:1的枯草芽孢桿菌和酵母菌組成，枯草芽孢桿菌的發酵培養基為nb培養基，其組成為蛋白胨10g，牛肉粉3g，氯化鈉5g，水1000ml；酵母菌的發酵培養基為ypd培養基，其組成為葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母膏5g，水1000ml；發酵時發酵罐1的溫度為30℃，攪拌速度為180rpm，壓強為0.15mpa，發酵時間為65小時，ph值為7.2；
[0087]
s2.發酵階段二：發酵階段二使用的原料為：按重量百分比計，糖蜜1％，亞硒酸鈉4％，鉬酸銨0.5％，硼酸0.3％，海魚酶解濃縮液8％，硒代蛋氨酸0.2％，糖醇鈣0.2％，余量為水，各原料的重量百分比之和為100％；發酵階段一使用的原料與發酵階段二使用的原料的重量比為1:1；
[0088]
在發酵罐2中投入糖蜜、亞硒酸鈉、鉬酸銨、硼酸、海魚酶解濃縮液、硒代蛋氨酸、糖醇鈣，加入水至原料總重量的100％，攪拌均勻后121℃滅菌20分鐘，冷卻至室溫得到發酵補料；
[0089]
s3.發酵階段三：將步驟s2得到的發酵補料加入發酵階段一的發酵罐1中混合發酵得到富硒葉面肥，發酵時發酵罐1的溫度為30℃，攪拌速度為180rpm，壓強為0.15mpa，發酵時間為60小時，ph值為7.5。
[0090]
步驟s2中，海魚酶解濃縮液的制備步驟為：
[0091]
(1)收集海洋低值魚，并將其裝入發酵罐中；
[0092]
(2)向發酵罐中添加有機質降解菌株、復合蛋白酶、水，有機質降解菌株為暹羅芽孢桿菌、貝萊斯芽孢桿菌，復合蛋白酶為堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶，海洋低值魚、有機質降解菌株、復合蛋白酶、水的重量比為1:0.01:0.02:6；
[0093]
(3)在48℃、180rpm轉速、0.1mpa壓強發酵條件下發酵酶解12小時得到酶解液，將酶解液50℃下濃縮至原體積的1/4，得到海魚酶解濃縮液。
[0094]
實施例3
[0095]
按照以下步驟制備富硒葉面肥：
[0096]
s1.發酵階段一：發酵階段一使用的原料為：按重量百分比計，糖蜜3％，尿素0.1％，氯化鈉0.1％，磷酸氫二鉀0.1％，余量為水，各原料的重量百分比之和為100％；
[0097]
s1.1在發酵罐1中投入糖蜜、尿素、氯化鈉、磷酸氫二鉀，加入水至原料總重量的80％，攪拌均勻后加熱滅菌，121℃滅菌25分鐘，冷卻至室溫；
[0098]
s1.2將接種菌在發酵培養基中培養至od
600
達到1得到種子液，將種子液按1％接種量添加至發酵罐1中，同時補充水至原料總重量的100％進行發酵，接種菌由重量比為1:1的枯草芽孢桿菌和酵母菌組成，枯草芽孢桿菌的發酵培養基為nb培養基，其組成為蛋白胨
10g，牛肉粉3g，氯化鈉5g，水1000ml；酵母菌的發酵培養基為ypd培養基，其組成為葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母膏5g，水1000ml；發酵時發酵罐1的溫度為32℃，攪拌速度為190rpm，壓強為0.12mpa，發酵時間為70小時，ph值為6.5；
[0099]
s2.發酵階段二：發酵階段二使用的原料為：按重量百分比計，糖蜜3％，亞硒酸鈉5％，鉬酸銨1.5％，硼酸0.1％，海魚酶解濃縮液9％，硒代蛋氨酸0.25％，葉酸0.15％，余量為水，各原料的重量百分比之和為100％；發酵階段一使用的原料與發酵階段二使用的原料的重量比為1:1；
[0100]
在發酵罐2中投入糖蜜、亞硒酸鈉、鉬酸銨、硼酸、海魚酶解濃縮液、硒代蛋氨酸、葉酸，加入水至原料總重量的100％，攪拌均勻后121℃滅菌25分鐘，冷卻至室溫得到發酵補料；
[0101]
s3.發酵階段三：將步驟s2得到的發酵補料加入發酵階段一的發酵罐1中混合發酵得到富硒葉面肥，發酵時發酵罐1的溫度為32℃，攪拌速度為190rpm，壓強為0.12mpa，發酵時間為42小時，ph值為8。
[0102]
步驟s2中，海魚酶解濃縮液的制備步驟為：
[0103]
(1)收集海洋低值魚，并將其裝入發酵罐中；
[0104]
(2)向發酵罐中添加有機質降解菌株、復合蛋白酶、水，有機質降解菌株為酵母菌，復合蛋白酶為胰蛋白酶、胃蛋白酶，海洋低值魚、有機質降解菌株、復合蛋白酶、水的重量比為1:0.01:0.02:6；
[0105]
(3)在60℃、200rpm轉速、0.11mpa壓強發酵條件下發酵酶解14小時得到酶解液，將酶解液50℃下濃縮至原體積的1/4，得到海魚酶解濃縮液。
[0106]
實施例4
[0107]
按照以下步驟制備富硒葉面肥：
[0108]
s1.發酵階段一：發酵階段一使用的原料為：按重量百分比計，糖蜜1.5％，尿素0.2％，氯化鈉0.2％，磷酸氫二鉀0.05％，余量為水，各原料的重量百分比之和為100％；
[0109]
s1.1在發酵罐1中投入糖蜜、尿素、氯化鈉、磷酸氫二鉀，加入水至原料總重量的80％，攪拌均勻后加熱滅菌，121℃滅菌24分鐘，冷卻至室溫；
[0110]
s1.2將接種菌在發酵培養基中培養至od
600
達到1得到種子液，將種子液按1％接種量添加至發酵罐1中，同時補充水至原料總重量的100％進行發酵，接種菌由重量比為1:1的枯草芽孢桿菌和酵母菌組成，枯草芽孢桿菌的發酵培養基為nb培養基，其組成為蛋白胨10g，牛肉粉3g，氯化鈉5g，水1000ml；酵母菌的發酵培養基為ypd培養基，其組成為葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母膏5g，水1000ml；發酵時發酵罐1的溫度為34℃，攪拌速度為195rpm，壓強為0.14mpa，發酵時間為60小時，ph值為7.0；
[0111]
s2.發酵階段二：發酵階段二使用的原料為：按重量百分比計，糖蜜2.5％，亞硒酸鈉2％，鉬酸銨2％，硼酸0.15％，海魚酶解濃縮液7％，硒代半胱氨酸0.3％，泛酸0.1％，余量為水，各原料的重量百分比之和為100％；發酵階段一使用的原料與發酵階段二使用的原料的重量比為1:1；
[0112]
在發酵罐2中投入糖蜜、亞硒酸鈉、鉬酸銨、硼酸、海魚酶解濃縮液、硒代半胱氨酸、泛酸，加入水至原料總重量的100％，攪拌均勻后121℃滅菌24分鐘，冷卻至室溫得到發酵補料；
[0113]
s3.發酵階段三：將步驟s2得到的發酵補料加入發酵階段一的發酵罐1中混合發酵得到富硒葉面肥，發酵時發酵罐1的溫度為34℃，攪拌速度為195rpm，壓強為0.14mpa，發酵時間為50小時，ph值為7.8。
[0114]
步驟s2中，海魚酶解濃縮液的制備步驟為：
[0115]
(1)收集海洋低值魚，并將其裝入發酵罐中；
[0116]
(2)向發酵罐中添加有機質降解菌株、復合蛋白酶、水，有機質降解菌株為枯草芽孢桿菌、酵母菌，復合蛋白酶為中性蛋白酶、胃蛋白酶，海洋低值魚、有機質降解菌株、復合蛋白酶、水的重量比為1:0.01:0.02:6；
[0117]
(3)在55℃、195rpm轉速、0.15mpa壓強發酵條件下發酵酶解15小時得到酶解液，將酶解液50℃下濃縮至原體積的1/4，得到海魚酶解濃縮液。
[0118]
上述實施例僅例示性說明本發明的原理及其功效，而非用于限制本發明。任何熟悉此技術的人士皆可在不違背本發明的精神及范疇下，對上述實施例進行修飾或改變。因此，舉凡所屬技術領域中具有通常知識者在未脫離本發明所揭示的精神與技術思想下所完成的一切等效修飾或改變，仍應由本發明的權利要求所涵蓋。
技術特征：
1.一種富硒葉面肥的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：s1.發酵階段一：發酵階段一使用的原料為：按重量百分比計，糖蜜1-3％，尿素0.1-0.3％，氯化鈉0.1-0.3％，磷酸氫二鉀0.05-0.2％，余量為水，各原料的重量百分比之和為100％；s1.1在發酵罐1中投入糖蜜、尿素、氯化鈉、磷酸氫二鉀，加入水至原料總重量的80％，攪拌均勻后加熱滅菌，121℃下滅菌20-30分鐘，冷卻至室溫；s1.2將接種菌在發酵培養基中培養至od
600
達到1得到種子液，將種子液按1％接種量添加至發酵罐1中，同時補充水至原料總重量的100％進行發酵；s2.發酵階段二：發酵階段二使用的原料為：按重量百分比計，糖蜜1-3％，亞硒酸鈉2-5％，鉬酸銨0.5-2％，硼酸0.1-0.3％，海魚酶解濃縮液7-10％，硒代氨基酸0.2-0.3％，植物生長促進因子0.1-0.2％，余量為水，各原料的重量百分比之和為100％；在發酵罐2中投入糖蜜、亞硒酸鈉、鉬酸銨、硼酸、海魚酶解濃縮液、硒代氨基酸、植物生長促進因子，加入水至原料總重量的100％，攪拌均勻后121℃下滅菌20-30分鐘，冷卻至室溫得到發酵補料；s3.發酵階段三：將步驟s2得到的發酵補料加入發酵階段一的發酵罐1中混合發酵得到富硒葉面肥。2.根據權利要求1所述的一種富硒葉面肥的制備方法，其特征在于：所述發酵階段一使用的原料與發酵階段二使用的原料的重量比為1:1。3.根據權利要求1所述的一種富硒葉面肥的制備方法，其特征在于：所述步驟s1.2中，接種菌由重量比為1:1的枯草芽孢桿菌和酵母菌組成，枯草芽孢桿菌的發酵培養基為nb培養基，其組成為蛋白胨10g，牛肉粉3g，氯化鈉5g，水1000ml；酵母菌的發酵培養基為ypd培養基，其組成為葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母膏5g，水1000ml。4.根據權利要求3所述的一種富硒葉面肥的制備方法，其特征在于：所述步驟s1.2中，發酵時發酵罐1的溫度為28-34℃，攪拌速度為180-200rpm，壓強為0.1-0.15mpa，發酵時間為60-72小時，ph值為6.5-7.2。5.根據權利要求1所述的一種富硒葉面肥的制備方法，其特征在于：所述步驟s2中，海魚酶解濃縮液的制備步驟為：(1)收集海洋低值魚，并將其裝入發酵罐中；(2)向發酵罐中添加有機質降解菌株、復合蛋白酶、水，有機質降解菌株為枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、暹羅芽孢桿菌、貝萊斯芽孢桿菌或酵母菌中的其中一種或兩種，復合蛋白酶為中性蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶或胃蛋白酶中的其中一種或幾種，海洋低值魚、有機質降解菌株、復合蛋白酶、水的重量比為1:0.01:0.02:6；(3)在48-60℃、180-200rpm轉速、0.1-0.15mpa壓強發酵條件下發酵酶解12-15小時得到酶解液，將酶解液50℃下濃縮至原體積的1/4，得到海魚酶解濃縮液。6.根據權利要求1所述的一種富硒葉面肥的制備方法，其特征在于：所述步驟s2中，硒代氨基酸為硒代半胱氨酸或硒代蛋氨酸，植物生長促進因子為鈷氨素、糖醇鈣、葉酸或泛酸中的其中一種或兩種。7.根據權利要求1所述的一種富硒葉面肥的制備方法，其特征在于：所述步驟s3中，發酵時發酵罐1的溫度為28-34℃，攪拌速度為180-200rpm，壓強為0.1-0.15mpa，發酵時間為
42-60小時，ph值為7.5-8.0。8.根據權利要求1-7任意一項所述的制備方法得到的富硒葉面肥。9.根據權利要求8所述的一種富硒葉面肥在農作物生長方面的應用。10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于：所述農作物為禾谷類、瓜果蔬菜類、果樹類或茶樹類，所述富硒葉面肥在農作物的施用方式為稀釋20-500倍后葉面噴施。
技術總結
本發明提供了一種富硒葉面肥及其制備方法與應用，制備方法包括以下步驟：S1.發酵階段一：S1.1在發酵罐1中投入糖蜜、尿素、氯化鈉、磷酸氫二鉀、水，攪拌均勻后加熱滅菌，冷卻；S1.2將接種菌在發酵培養基中培養得到種子液，按1％接種量添加至發酵罐1中，補充水進行發酵；S2.發酵階段二：在發酵罐2中投入糖蜜、亞硒酸鈉、鉬酸銨、硼酸、海魚酶解濃縮液、硒代氨基酸、植物生長促進因子、水，攪拌均勻后加熱滅菌，冷卻得到發酵補料；S3.發酵階段三：將發酵補料加入發酵階段一的發酵罐1中混合發酵得到富硒葉面肥。本發明采用微生物高密度發酵技術制得富硒葉面肥，對植物有抗逆防病、增產提質和高效富硒的效果，而且能夠提升人體硒含量，增強人體身心健康。體身心健康。
