一種抗衰組合物及其制備方法和用途與流程
1.本發明涉及醫藥和化妝品技術領域，特別是一種抗衰組合物及其制備方法和用途。
背景技術：
2.現代生活中人們長期經歷著高強度工作，暴露于電腦手機等高輻射以及紫外線照射環境，使得原本隨年齡增長日漸暗淡的皮膚衰老得更加快速。皮膚衰老明顯的特征是皮膚松弛和出現皺紋、素沉著、皮膚粗糙、皮膚變薄、角質屏障功能減弱。在細胞水平表現為表皮細胞更新減慢，角質形成細胞活性下降，真皮層中成纖維細胞數量減少，合成膠原蛋白和彈性蛋白的能力下降。這導致各種支撐皮膚的膠原肽鍵出現硬化、斷裂，導致皮膚真皮層網狀結構疏松，隨即被破壞，出現塌陷，皮膚組織的保濕度和強韌性降低，皮膚隨即出現干燥、皺紋、松弛等問題。此外，體內活性氧自由基大量產生，過量的活性氧自由基會修飾和干涉細胞蛋白質、脂質和dna，從而引起細胞大分子的氧化損傷、細胞的氧化與抗氧化功能失衡，發生氧化應激，進而引起肌膚表皮功能與活性下降，加速衰老。
3.β-煙酰胺單核苷酸，簡稱nmn，是一種自然存在的生物活性核苷酸，廣泛應用于保健類產品中。nmn是nad+的前體，其功能也主要通過nad+體現。nad+全稱煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，又名輔酶i，它廣泛分布于人體細胞，參與上千種生物催化反應，是人體內必不可少的輔酶。研究表明，隨著年齡增長，nad+水平降低，會導致dna修復能力下降，細胞功能衰退，從而導致新陳代謝失調、人體衰老等。β-煙酰胺單核苷酸能夠在細胞中轉化為nad+，因此補充β-煙酰胺單核苷酸能夠提高體內nad+含量，恢復線粒體能量，激活機體能量代謝，刺激各衰老組織的新陳代謝和修復，延長細胞壽命，提高atp生成量，進而提高機體代謝能力，從而延緩、改善、防止衰老等，或改善年齡誘導的代謝紊亂、老年疾病等，被認為是預防衰老和恢復年輕的補充劑。因此，β-煙酰胺單核苷酸在抗衰老領域受到了廣泛關注，開發以β-煙酰胺單核苷酸為活性成分的藥物、化妝品、食品、保健品成為研究熱點。然而，β-煙酰胺單核苷酸本身具有高度敏感和不穩定的分子特征，其化學性質不穩定，對溫度、濕度、光和氧等因素較敏感，通過研究發現，β-煙酰胺單核苷酸在液體中穩定性差，在傳統的護膚品膏霜乳液劑型中降解快，短時間內其含量即出現大幅度下降，將其直接應用于化妝品等液體組合物中無法有效發揮其抗衰作用，這限制了β-煙酰胺單核苷酸的應用。
4.隨著經濟的發展、生活水平的提高以及保養護理意識的增強，人們越來越注重皮膚護理和保養，抗衰護理產品日益成為廣大消費者不可或缺的產品。目前，市面上改善皮膚衰老多采用內服抗衰老保健品或者外用抗衰老護膚品的方式，內服的固體制劑通常用在食品、保健品、藥品領域，外用的膏霜乳液等護膚品通常用在化妝品領域，兩者分屬不同范疇，各司其職，沒有聯系。此外，受人類思維的局限性影響，認為可以內服的抗衰老固體制劑只能內服，沒有考慮過將可以內服的抗衰老固體制劑加入到外用的護膚品等液體組合物中聯合使用，協同抗衰，這大大限制了護膚品的應用方式，阻礙了抗衰效果的提高。
5.并且，現有技術中沒有將可以內服的β-煙酰胺單核苷酸固體組合物直接與化妝品
等傳統的液體組合物聯合使用的公開或教導，因此，研發一種新型的抗衰組合物，使β-煙酰胺單核苷酸在液體組合物中存在時仍能穩定高效發揮作用，提供一種β-煙酰胺單核苷酸固體組合物與化妝品等傳統的液體組合物聯合使用的抗衰方案顯得尤為必要，同時采用多種方式靈活使用，發揮協同增效作用，進行有針對性的個性化抗衰護理。
技術實現要素：
6.針對現有技術的缺陷，本發明提供一種抗衰組合物，包括液體組合物和β-煙酰胺單核苷酸固體組合物，其中的β-煙酰胺單核苷酸固體組合物既能口服，亦能舌下含服，還可以加入液體組合物中混合均勻后外用，通過將β-煙酰胺單核苷酸固體組合物與液體組合物合理搭配使用，獲得了組合護膚、協同抗衰的優異的技術效果。
7.鑒于此，本發明提供一種抗衰組合物，所述組合物包括液體組合物和β-煙酰胺單核苷酸固體組合物；
8.可選地，所述β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入所述液體組合物中，混合均勻后外用；
9.可選地，所述β-煙酰胺單核苷酸固體組合物內服，所述液體組合物外用；
10.可選地，所述β-煙酰胺單核苷酸固體組合物內服，另取β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入所述液體組合物中，混合均勻后外用；
11.可選地，所述內服包括口服或舌下含服。
12.可選地，本發明所述固體組合物還包括至少一種藥學上可接受的輔料。
13.可選地，所述輔料包括乳糖、蔗糖、三氯蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、聚維酮、羥丙基纖維素、海藻酸鈉、吐溫80、十二烷基硫酸鈉、聚乙二醇和月桂硫酸鎂中的一種或多種。
14.可選地，聚乙二醇選自聚乙二醇4000(peg4000)或聚乙二醇6000(peg6000)。
15.在本發明中，所述輔料優選水溶性輔料，通過使用水溶性輔料，解決現有技術中固體制劑在液體中不能完全溶解的問題。本發明的β-煙酰胺單核苷酸固體組合物既可內服，也可與液體組合物混合均勻后外用。因β-煙酰胺單核苷酸易溶于水，且固體組合物所用輔料為水溶性輔料，從而可以確保β-煙酰胺單核苷酸固體組合物能夠在液體組合物中完全溶解，保證在外用β-煙酰胺單核苷酸時不會殘留不溶物，以免影響使用的膚感。
16.可選地，本發明所述固體組合物的劑型包括膠囊劑、片劑、顆粒劑或粉劑；
17.可選地，所述膠囊劑包括軟膠囊劑、硬膠囊劑或腸溶膠囊劑；
18.可選地，所述片劑包括壓制片劑、凍干片劑或舌下含片。
19.本發明所述固體組合物的劑型中，每一單位制劑含有10mg～500mg的β-煙酰胺單核苷酸。
20.所述膠囊劑的內容物包括β-煙酰胺單核苷酸；
21.或者，所述膠囊劑的內容物包括以下組分(w/w)：
22.β-煙酰胺單核苷酸
??????
10％-90％
23.稀釋劑
????????????????
10％-90％
24.或者，所述膠囊劑的內容物包括以下組分(w/w)：
25.β-煙酰胺單核苷酸
??????
20％-90％
26.稀釋劑
????????????????
5％-79％
27.助流劑和/或潤滑劑
?????
1％-5％
28.其中，所述膠囊劑中，所述稀釋劑選自乳糖、蔗糖、三氯蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇和木糖醇中的一種或幾種；
29.所述助流劑和/或潤滑劑選自十二烷基硫酸鈉、聚乙二醇和月桂硫酸鎂中的一種或幾種。
30.可選地，所述壓制片劑包括以下組分(w/w)：
31.β-煙酰胺單核苷酸
??????
10％-90％
32.稀釋劑
????????????????
10％-90％
33.或者，所述壓制片劑包括以下組分(w/w)：
34.β-煙酰胺單核苷酸
??????
10％-80％
35.稀釋劑
????????????????
17％-89％
36.黏合劑
????????????????
1％-3％
37.或者，所述壓制片劑包括以下組分(w/w)：
[0038][0039]
或者，所述壓制片劑包括以下組分(w/w)：
[0040][0041]
其中，所述壓制片劑中，所述稀釋劑選自乳糖、蔗糖、三氯蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇和木糖醇中的一種或幾種；
[0042]
所述黏合劑選自聚維酮和羥丙基纖維素中的一種或幾種；
[0043]
所述崩解劑選自聚維酮、海藻酸鈉和吐溫80中的一種或幾種；
[0044]
所述助流劑和/或潤滑劑選自十二烷基硫酸鈉、聚乙二醇和月桂硫酸鎂中的一種或幾種。
[0045]
可選地，所述凍干片劑包括以下組分(w/w)：
[0046]
β-煙酰胺單核苷酸
???
10％-60％
[0047]
輔料
???????????????
40％-90％
[0048]
其中，所述凍干片劑中，所述輔料選自乳糖、蔗糖、三氯蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇和海藻酸鈉中的一種或幾種。
[0049]
可選地，本發明所述液體組合物包括水。
[0050]
可選地，所述液體組合物還包括保濕劑和/或增稠劑。
[0051]
可選地，所述液體組合物還包括美容上或藥學上有效量的活性成分。
[0052]
可選地，所述活性成分是抗衰活性成分。
[0053]
可選地，所述活性成分包括多肽、天然植物成分、維生素c及其衍生物和類視黃醇中的一種或幾種。
[0054]
待施用的美容上或藥學上有效量的活性成分以及它們的劑量將依賴于許多因素，包括年齡、患者的狀態、病癥或疾病的嚴重性、施用的途徑和頻率以及待使用的活性成分的具體性質。
[0055]“美容上或藥學上有效量”意指無毒性的但足以提供希望的效果的一種或多種活性成分的量。在本發明的液體組合物中以獲得希望的效果的美容上或藥學上有效的濃度使用活性成分；在一個優選形式中，相對于液體組合物的總重量，在0.00000001％(按重量計)和20％(按重量計)之間，優選在0.000001％(按重量計)和15％(按重量計)之間、更優選在0.0001％(按重量計)和10％(按重量計)之間，并且甚至更優選在0.0001％(按重量計)和5％(按重量計)之間。
[0056]
可選地，所述多肽包括肌肽、脫羧肌肽、九肽-1、六肽-2、四肽-30、乙酰基六肽-8、五肽-18、乙酰谷氨酸酰七肽-1、二肽二氨基丁酰芐基酰胺二乙酸鹽、五肽-3、β-丙氨酰羥脯氨酰二氨基丁酰芐基酰胺、棕櫚酰五肽-4、棕櫚酰三肽-1、棕櫚酰四肽-7、三肽-1、四肽-21、棕櫚酰六肽-6、棕櫚酰三肽-5、乙酰基四肽-9、乙酰基四肽-11、豆蔻酰五肽-11、豆蔻酰六肽-4、豆蔻酰八肽-1、六肽-3、五肽-31、銅肽、六肽-8、六肽-9、六肽-10、己酰四肽-3、棕櫚酰二肽-5-二氨基丁酰羥基蘇氨酸、棕櫚酰二肽-6-二氨基、棕櫚酰六肽-12和三肽-10瓜氨酸中的一種或幾種。
[0057]
可選地，所述多肽選自肌肽和/或脫羧肌肽。
[0058]
可選地，所述液體組合物中，所述多肽的質量百分濃度為0.0001％-5％，優選為0.0005％-1％、0.001％-0.1％或0.005％-0.01％。
[0059]
可選地，所述液體組合物中，所述保濕劑的質量百分濃度為0.001％-20％；所述增稠劑的質量百分濃度為0.001％-1％。
[0060]
可選地，所述液體組合物中，所述保濕劑包括丁二醇(可選為1％-10％，w/w)、透明質酸(可選為0.005％-1％，w/w)、泛醇(可選為0.01％-5％，w/w)、糖分異構體(可選為0.01％-10％，w/w)、葡聚糖(可選為0.1％-10％，w/w)、戊二醇(可選為0.1％-10％，w/w)和己二醇(可選為0.01％-5％，w/w)中的一種或幾種。
[0061]
本發明的實施例中，丁二醇(可選為1％-10％，w/w)，優選為2％-9％、3％-8％或4％-6％；
[0062]
透明質酸(可選為0.005％-1％，w/w)，優選為0.008％-0.5％、0.01％-0.2％或0.05％-0.1％；
[0063]
泛醇(可選為0.01％-5％，w/w)，優選為0.05％-3％、0.1％-1％或0.2％-0.5％；
[0064]
糖分異構體(可選為0.01％-10％，w/w)，優選為0.05％-8％、0.1％-5％或0.5％-2％；
[0065]
葡聚糖(可選為0.1％-10％，w/w)，優選為0.5％-8％、1％-5％或2％-4％；
[0066]
戊二醇(可選為0.1％-10％，w/w)，優選為0.5％-5％、1％-3％或1.5％-2％；
[0067]
己二醇(可選為0.01％-5％，w/w)，優選為0.05％-2％、0.1％-1％或0.2％-0.5％。
[0068]
可選地，所述增稠劑包括水解小核菌膠(可選為0.005％-1％，w/w)或胞外多糖(可選為0.005％-1％，w/w)中的一種或幾種。
[0069]
本發明的實施例中，水解小核菌膠(可選為0.005％-1％，w/w)，優選為0.008％-0.8％、0.01％-0.5％或0.05％-0.2％；
[0070]
胞外多糖(可選為0.005％-1％，w/w)，優選為0.008％-0.8％、0.01％-0.5％或0.05％-0.2％。
[0071]
本發明的另一方面，提供一種上述的抗衰組合物的制備方法，所述制備方法包括β-煙酰胺單核苷酸固體組合物的制備方法和液體組合物的制備方法。
[0072]
所述β-煙酰胺單核苷酸固體組合物的制備方法包括：按照質量百分比稱取β-煙酰胺單核苷酸，不加或加入至少一種藥學上可接受的輔料，混合均勻；填充膠囊、壓制片劑或溶解凍干。
[0073]
可選地，所述填充膠囊的方法，包括以下步驟：
[0074]
(1)按照上述膠囊劑的內容物的組分及用量，稱取β-煙酰胺單核苷酸、稀釋劑、助流劑和/或潤滑劑，分別過篩；
[0075]
任選的步驟(2)在稀釋劑中，加入β-煙酰胺單核苷酸，混合均勻；
[0076]
任選的步驟(3)加入助流劑和/或潤滑劑混合均勻，制得膠囊填充粉末；
[0077]
(4)將定量的膠囊填充粉末填入空膠囊內，制得β-煙酰胺單核苷酸膠囊。
[0078]
可選地，所述空膠囊為腸溶膠囊。
[0079]
可選地，所述壓制片劑的方法，包括以下步驟：
[0080]
(1)按照上述壓制片劑的組分及用量，將β-煙酰胺單核苷酸、稀釋劑、任選的黏合劑、任選的部分用量的崩解劑，混合均勻；或將β-煙酰胺單核苷酸、稀釋劑、任選的黏合劑、任選的全部用量的崩解劑，混合均勻；或將β-煙酰胺單核苷酸、稀釋劑、任選的黏合劑混合均勻；
[0081]
任選的步驟(2)繼續加入余量的崩解劑，混合均勻；或不再加崩解劑，直接執行步驟(3)；或繼續加入全部用量的崩解劑，混合均勻；
[0082]
任選的步驟(3)繼續加入助流劑和/或潤滑劑，混合均勻后壓片；
[0083]
可選地，將β-煙酰胺單核苷酸、稀釋劑、黏合劑、全部用量的崩解劑混合均勻，繼續加入助流劑和/或潤滑劑混合均勻后，采用粉末直壓工藝對混合物進行直接壓片；
[0084]
可選地，將β-煙酰胺單核苷酸、稀釋劑、黏合劑混合均勻，濕法制粒，干燥，整粒，得到內顆粒；往內顆粒中加入全部用量的崩解劑混合均勻，再加入助流劑和/或潤滑劑，混合均勻后壓片；
[0085]
可選地，將β-煙酰胺單核苷酸、稀釋劑、黏合劑、部分用量的崩解劑混合均勻，加入部分用量的助流劑和/或潤滑劑，混合均勻后進行干法制粒，整粒，得到內顆粒；往內顆粒中加入余量的崩解劑混合均勻，再加入余量的助流劑和/或潤滑劑，混合均勻后壓片；
[0086]
可選地，壓片后還包括包衣的步驟，所述包衣包括包薄膜衣或腸溶衣。
[0087]
可選地，所述溶解凍干的方法，包括以下步驟：
[0088]
(1)按照上述凍干片劑的組分及用量，將β-煙酰胺單核苷酸、輔料置于混合容器中，加水攪拌，混合溶解，灌裝至合適體積的模具中；
[0089]
(2)將灌裝好的模具放入真空冷凍干燥機，抽真空，并升華至物料完全干燥，壓封、包裝，得到β-煙酰胺單核苷酸凍干片劑。
[0090]
可選地，所述液體組合物的制備方法包括：按照質量百分比稱取保濕劑和/或增稠劑，所述保濕劑和/或增稠劑混合均勻溶解后，加入任選的美容上或藥學上有效量的活性成分，攪拌溶解即得；
[0091]
其中，所述活性成分是抗衰活性成分；
[0092]
可選地，所述活性成分選自多肽、天然植物成分、維生素c及其衍生物和類視黃醇中的一種或幾種。
[0093]
本發明的另一方面，提供一種上述的抗衰組合物在制備抗衰老的藥物、營養品、保健品或護膚品中的用途。
[0094]
本發明的另一方面，提供一種上述的抗衰組合物在制備用于、預防和/或修復皮膚老化的產品中的用途。
[0095]
本發明的另一方面，提供一種上述的抗衰組合物在制備用于減少、預防或皺紋的產品中的用途。
[0096]
本發明的另一方面，提供一種上述的抗衰組合物在制備用于抗氧化產品中的用途。
[0097]
本發明的另一方面，提供一種抗衰方法，所述方法包括給予上述的抗衰組合物，所述方法包括將所述β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入所述液體組合物中，混合均勻后外用。
[0098]
本發明的另一方面，提供一種抗衰方法，所述方法包括給予上述的抗衰組合物，所述方法包括內服所述β-煙酰胺單核苷酸固體組合物，外用所述液體組合物。
[0099]
本發明的另一方面，提供一種抗衰方法，所述方法包括給予上述的抗衰組合物，所述方法包括內服所述β-煙酰胺單核苷酸固體組合物，另取所述β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入所述液體組合物中，混合均勻后外用。
[0100]
本發明所述的抗衰組合物，其施用或給藥頻率可以變化很大，這取決于每個受試者的需要，其中建議的施用或給藥范圍從每月1次至每天10次，優選從每周1次至每天4次，更優選從每周3次至每天3次，甚至更優選每天1次或2次。
[0101]
為了便于理解本發明，對在本發明中所使用的一些術語和表述的含義說明如下：
[0102]
在本發明中，術語“皮膚”應理解為是構成它的多個層，從最上層或角質層至最下層或皮下組織，兩個端點都包括在內。這些層由不同類型的細胞組成，如角質形成細胞、成纖維細胞、黑素細胞、和/或脂肪細胞等。在本發明中，術語“皮膚”包括頭皮。
[0103]
術語“”，指的是給予本發明的抗衰組合物以減輕或消除一種疾病或病癥、或減少或消除與這種疾病或病癥相關的一種或多種癥狀。術語“”還涵蓋了減輕或消除該疾病或病癥的生理后果的能力。
[0104]
術語“護理”包括疾病和/或病癥的預防。
[0105]
術語“修復”，指的是本發明的抗衰組合物在一種疾病或病癥出現后改善、緩解或恢復其原狀的能力。
[0106]
術語“預防”，指的是本發明的抗衰組合物在一種疾病或病癥出現前防止、延遲、或阻礙其出現或發展的能力。
[0107]
術語“老化”指的是皮膚隨著年齡的增長經歷的變化(自然老化)，或通過暴露于陽光(光老化)或暴露于環境污染物，如化學污垢或污染物、煙草煙霧等而經歷的變化，并且包括所有外在可見的和/或通過觸摸可感知的變化，例如并且不局限于：皮膚上的不連續性的發展(如皺紋、細紋、表情紋、拉伸紋、條紋、溝紋、不平整或粗糙、毛孔尺寸增大、水分損失、彈性損失、緊致性損失、平滑性損失、變形恢復能力損失、回彈性損失)、皮膚下垂(如臉頰下垂、眼睛下方出現眼袋、或出現雙下巴等)、皮膚顏的變化(如瘢痕、變紅、眼袋、或出現素過度沉著區域如老年斑或雀斑等)、異常分化、過度角質化、彈性組織變性、角化癥、脫發、橘皮樣皮膚、膠原結構損失，以及角質層、真皮、表皮、血管系統(例如出現蜘蛛靜脈或毛細血管擴張癥)或靠近皮膚的那些組織的其他組織學變化。
[0108]
術語“光老化”指的是由于皮膚長期暴露于紫外線輻射而導致的皮膚過早老化，它呈現出與自然老化相同的生理特征，例如并且不局限于：松弛、下垂、顏改變或素沉著不規則、異常和/或過度角質化。
[0109]
本發明相對于現有技術所取得的有益效果包括：
[0110]
1、本發明提供一種抗衰組合物，所述組合物包括液體組合物和β-煙酰胺單核苷酸固體組合物。β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入液體組合物中，混合均勻后外用；或者β-煙酰胺單核苷酸固體組合物內服，液體組合物外用；或者β-煙酰胺單核苷酸固體組合物內服，另取β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入液體組合物中，混合均勻后外用。通過將β-煙酰胺單核苷酸固體組合物與液體組合物合理搭配，協同抗衰，本發明的組合物具有比現有技術更優的皮膚護理功效。
[0111]
2、本發明所述的抗衰組合物，克服了本領域普通技術人員的技術偏見。本領域普通技術人員認為，固體組合物通常用在食品、保健品、藥品領域，用于口服發揮作用，而護膚是通過外用膏霜乳液等護膚品涂抹來實現，涉及化妝品領域，由此可知固體組合物和外用的護膚品分屬不同范疇，各司其職，兩者沒有聯系。本發明突破了本領域普通技術人員的思維局限，提供一種抗衰組合物，其中的β-煙酰胺單核苷酸固體組合物既能口服，亦能舌下含服，還可以加入液體組合物中混合均勻后外用，通過將β-煙酰胺單核苷酸固體組合物與液體組合物合理搭配，協同抗衰，組合護膚，取得了優異的技術效果。
[0112]
3、本發明的抗衰組合物中，β-煙酰胺單核苷酸以固體形式存在，在使用時再將β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入液體組合物中，混合均勻，現配現用，可以提高β-煙酰胺單核苷酸的穩定性和安全性，在相同投料量的情況下取得了更優異的抗衰效果；克服了β-煙酰胺單核苷酸在液體中穩定性差，直接應用于化妝品等液體組合物中無法有效發揮作用的缺陷。
[0113]
4、本發明的抗衰組合物，在提高了β-煙酰胺單核苷酸的穩定性，實現了高效抗衰的同時，產品的使用方便性不會受到影響，也利于儲存及運輸，而且新穎的使用方式，可以給消費者帶來良好的使用體驗。此外，通過使用水溶性輔料，β-煙酰胺單核苷酸固體組合物能夠在液體組合物中完全溶解，保證在外用β-煙酰胺單核苷酸時不會殘留不溶物，以免影響使用的膚感。
[0114]
5、本發明的抗衰組合物，可以采用多種方式靈活使用，如采用β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入不含活性成分的液體組合物中，混合均勻后外用的方式；采用β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入含活性成分的液體組合物中，混合均勻后外用的方式；采用β-煙酰
胺單核苷酸固體組合物僅內服，不含活性成分的液體組合物外用的內服外用方式；采用β-煙酰胺單核苷酸固體組合物僅內服，含活性成分的液體組合物外用的內服外用方式；采用β-煙酰胺單核苷酸固體組合物內服，另取β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入不含活性成分的液體組合物中，混合均勻后外用的內服外用方式；采用β-煙酰胺單核苷酸固體組合物內服，另取β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入含活性成分的液體組合物中，混合均勻后外用的內服外用方式等。此外，在外用時，外用液體組合物中可以包括至少一種活性成分。通過不同的使用方式，本發明的抗衰組合物可以發揮協同增效、雙重協同增效甚至多重協同增效作用，從而取得不同的抗衰效果，有利于消費者根據各自的需求，采用適合自身情況的使用方式，進行有針對性的個性化抗衰護理，以達到最優的狀態。
附圖說明
[0115]
為了更清楚地說明本發明的技術方案，下面將對本發明的描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。
[0116]
圖1是測試例3中測試樣品對角質形成細胞ros的影響結果圖(n＝3)。
[0117]
圖2是測試例4中測試樣品的dpph清除率結果圖。**表示nmn+肌肽(2:1)組與nmn組相比差異顯著，p《0.01(n＝4)；##表示nmn+肌肽(2:1)組與肌肽組相比差異顯著，p《0.01(n＝4)。
具體實施方式
[0118]
為了更好地理解本發明，下面結合實施例、對比例、測試例及附圖對發明作詳細的說明，然而，應當理解的是，這些實施例、對比例、測試例及附圖僅用作說明目的，并且不旨在限制本發明的范圍。
[0119]
實施例1制備β-煙酰胺單核苷酸膠囊
[0120]
處方1：
[0121][0122][0123]
制備方法：
[0124]
稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸過40目篩，將定量的β-煙酰胺單核苷酸粉末填入空膠囊內，制得β-煙酰胺單核苷酸膠囊。
[0125]
實施例2制備β-煙酰胺單核苷酸膠囊
[0126]
處方2：
[0127][0128]
制備方法：
[0129]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸過40目篩，乳糖過20目篩；
[0130]
(2)在乳糖中，加入β-煙酰胺單核苷酸，混合均勻，制得膠囊填充粉末；
[0131]
(3)將定量的膠囊填充粉末填入空膠囊內，制得β-煙酰胺單核苷酸膠囊。
[0132]
實施例3制備β-煙酰胺單核苷酸膠囊
[0133]
處方3：
[0134][0135]
制備方法：
[0136]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、甘露醇分別過40目篩；
[0137]
(2)在乳糖、甘露醇中，加入β-煙酰胺單核苷酸，混合均勻，制得膠囊填充粉末；
[0138]
(3)將定量的膠囊填充粉末填入空膠囊內，制得β-煙酰胺單核苷酸膠囊。
[0139]
實施例4制備β-煙酰胺單核苷酸膠囊
[0140]
處方4：
[0141][0142]
制備方法：
[0143]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸過40目篩，乳糖過24目篩；
[0144]
(2)在乳糖中，加入β-煙酰胺單核苷酸，混合均勻，制得膠囊填充粉末；
[0145]
(3)將定量的膠囊填充粉末填入空膠囊內，制得β-煙酰胺單核苷酸膠囊。
[0146]
實施例5制備β-煙酰胺單核苷酸膠囊
[0147]
處方5：
[0148][0149]
制備方法：
[0150]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、甘露醇、peg4000分別過40目篩；
[0151]
(2)在乳糖、甘露醇中，加入β-煙酰胺單核苷酸，混合均勻；
[0152]
(3)加入peg4000混合均勻，制得膠囊填充粉末；
[0153]
(4)將定量的膠囊填充粉末填入空膠囊內，制得β-煙酰胺單核苷酸膠囊。
[0154]
實施例6制備β-煙酰胺單核苷酸膠囊
[0155]
處方6：
[0156][0157]
制備方法：
[0158]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、甘露醇、peg6000分別過40目篩；
[0159]
(2)在乳糖、甘露醇中，加入β-煙酰胺單核苷酸，混合均勻；
[0160]
(3)加入peg6000混合均勻，制得膠囊填充粉末；
[0161]
(4)將定量的膠囊填充粉末填入空膠囊內，制得β-煙酰胺單核苷酸膠囊。
[0162]
實施例7制備β-煙酰胺單核苷酸膠囊
[0163]
處方7：
[0164][0165]
制備方法：
[0166]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、山梨醇、peg6000分別過40目篩；
[0167]
(2)在山梨醇中，加入β-煙酰胺單核苷酸，混合均勻；
[0168]
(3)加入peg6000混合均勻，制得膠囊填充粉末；
[0169]
(4)將定量的膠囊填充粉末填入空膠囊內，制得β-煙酰胺單核苷酸膠囊。
[0170]
實施例8制備β-煙酰胺單核苷酸膠囊
[0171]
處方8：
[0172][0173][0174]
制備方法：
[0175]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、山梨醇、peg6000分別過40目篩；
[0176]
(2)在乳糖、山梨醇中，加入β-煙酰胺單核苷酸，混合均勻；
[0177]
(3)加入peg6000混合均勻，制得膠囊填充粉末；
[0178]
(4)將定量的膠囊填充粉末填入空膠囊內，制得β-煙酰胺單核苷酸膠囊。
[0179]
實施例9制備β-煙酰胺單核苷酸片劑
[0180]
處方9：
[0181][0182]
制備方法：
[0183]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、甘露醇分別過40目篩；
[0184]
(2)將β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、甘露醇混合均勻；
[0185]
(3)采用粉末直壓工藝對混合物進行直接壓片。
[0186]
實施例10制備β-煙酰胺單核苷酸片劑
[0187]
處方10：
[0188][0189]
制備方法：
[0190]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸過40目篩，乳糖過24目篩；
[0191]
(2)將β-煙酰胺單核苷酸、乳糖混合均勻；
[0192]
(3)采用粉末直壓工藝對混合物進行直接壓片。
[0193]
實施例11制備β-煙酰胺單核苷酸片劑
[0194]
處方11：
[0195][0196]
制備方法：
[0197]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、甘露醇分別過40目篩；
[0198]
(2)將β-煙酰胺單核苷酸、甘露醇混合均勻；
[0199]
(3)采用粉末直壓工藝對混合物進行直接壓片。
[0200]
實施例12制備β-煙酰胺單核苷酸片劑
[0201]
處方12：
[0202][0203]
制備方法：
[0204]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、聚維酮分別過40目篩，乳糖過24目篩；
[0205]
(2)將β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、聚維酮混合均勻；
[0206]
(3)采用粉末直壓工藝對混合物進行直接壓片。
[0207]
實施例13制備β-煙酰胺單核苷酸片劑
[0208]
處方13：
[0209][0210]
制備方法：
[0211]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、羥丙基纖維素、聚維酮分別過40目篩，乳糖過24目篩；
[0212]
(2)將β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、羥丙基纖維素、聚維酮混合均勻；
[0213]
(3)采用粉末直壓工藝對混合物進行直接壓片。
[0214]
實施例14制備β-煙酰胺單核苷酸片劑
[0215]
處方14：
[0216][0217]
制備方法：
[0218]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、甘露醇、聚維酮、海藻酸鈉、吐溫80 分別過40目篩；
[0219]
(2)將β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、甘露醇、聚維酮、海藻酸鈉、吐溫80混合均勻；
[0220]
(3)采用粉末直壓工藝對混合物進行直接壓片。
[0221]
實施例15制備β-煙酰胺單核苷酸片劑
[0222]
處方15：
[0223][0224]
制備方法：
[0225]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、羥丙基纖維素、海藻酸鈉、peg6000分別過40目篩，乳糖過24目篩；
[0226]
(2)將β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、羥丙基纖維素、海藻酸鈉混合均勻，再加入peg6000混合均勻；
[0227]
(3)采用粉末直壓工藝對混合物進行直接壓片。
[0228]
實施例16制備β-煙酰胺單核苷酸片劑
[0229]
處方16：
[0230][0231]
制備方法：
[0232]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、甘露醇、聚維酮、海藻酸鈉、peg6000分別過40目篩；
[0233]
(2)將β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、甘露醇、聚維酮混合均勻，加入純化水進行濕法制粒，干燥；
[0234]
(3)干燥后用24目篩整粒，得到內顆粒；
[0235]
(4)往內顆粒中加入海藻酸鈉混合均勻，再加入peg6000混合均勻，壓片即得。
[0236]
實施例17制備β-煙酰胺單核苷酸片劑
[0237]
處方17：
[0238][0239]
制備方法：
[0240]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、甘露醇、聚維酮、海藻酸鈉、peg6000分別過40目篩；
[0241]
(2)將β-煙酰胺單核苷酸、甘露醇、聚維酮、部分用量的海藻酸鈉(占海藻酸鈉總量的80％，即60mg/片)混合均勻；
[0242]
(3)再加入部分用量的peg6000(占peg6000總量的50％，即12.5mg/片)，混合均勻；
[0243]
(4)進行干法制粒，用24目篩整粒，得到內顆粒；
[0244]
(5)往內顆粒中加入余量的海藻酸鈉(占海藻酸鈉總量的20％，即15mg/片)混合均勻，再加入余量的peg6000(占peg6000總量的50％，即12.5mg/片)，混合均勻后壓片。
[0245]
實施例18制備β-煙酰胺單核苷酸舌下片
[0246]
處方18：
[0247][0248]
制備方法：
[0249]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、甘露醇、蔗糖、羥丙基纖維素、海藻酸鈉、peg6000分別過40目篩；
[0250]
(2)將β-煙酰胺單核苷酸、乳糖、甘露醇、蔗糖、羥丙基纖維素、海藻酸鈉混合均勻，再加入peg6000混合均勻；
[0251]
(3)采用粉末直壓工藝對混合物進行直接壓片。
[0252]
實施例19制備β-煙酰胺單核苷酸舌下片
[0253]
處方19：
[0254][0255]
制備方法：
[0256]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、山梨醇、蔗糖、聚維酮、海藻酸鈉、peg6000分別過40目篩；
[0257]
(2)將β-煙酰胺單核苷酸、山梨醇、蔗糖、聚維酮、海藻酸鈉混合均勻，再加入peg6000混合均勻；
[0258]
(3)采用粉末直壓工藝對混合物進行直接壓片。
[0259]
實施例20制備β-煙酰胺單核苷酸舌下片
[0260]
處方20：
[0261][0262]
制備方法：
[0263]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、山梨醇、甘露醇、蔗糖、聚維酮分別過40目篩；
[0264]
(2)將β-煙酰胺單核苷酸、山梨醇、甘露醇、蔗糖、聚維酮混合均勻；
[0265]
(3)采用粉末直壓工藝對混合物進行直接壓片。
[0266]
實施例21制備β-煙酰胺單核苷酸凍干片劑
[0267]
處方21：
[0268][0269]
制備方法：
[0270]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、甘露醇，置于混合容器中，加水攪拌，混合溶解，灌裝至合適體積的模具中；
[0271]
(2)將灌裝好的模具放入真空冷凍干燥機，抽真空，并升華至物料完全干燥，壓封、包裝，得到β-煙酰胺單核苷酸凍干片劑。
[0272]
實施例22制備β-煙酰胺單核苷酸凍干片劑
[0273]
處方22：
[0274][0275]
制備方法：
[0276]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、甘露醇、海藻糖，置于混合容器中，加水攪拌，混合溶解，灌裝至合適體積的模具中；
[0277]
(2)將灌裝好的模具放入真空冷凍干燥機，抽真空，并升華至物料完全干燥，壓封、包裝，得到β-煙酰胺單核苷酸凍干片劑。
[0278]
實施例23制備β-煙酰胺單核苷酸凍干片劑
[0279]
處方23：
[0280][0281]
制備方法：
[0282]
(1)稱取處方量的β-煙酰胺單核苷酸、甘露醇、聚維酮、蔗糖，置于混合容器中，加
水攪拌，混合溶解，灌裝至合適體積的模具中；
[0283]
(2)將灌裝好的模具放入真空冷凍干燥機，抽真空，并升華至物料完全干燥，壓封、包裝，得到β-煙酰胺單核苷酸凍干片劑。
[0284]
實施例24制備液體組合物
[0285]
配方：
[0286][0287]
制備方法：將注射用水灌裝至合適體積的容器中即得。
[0288]
實施例25制備液體組合物
[0289]
配方：
[0290][0291]
制備方法：
[0292]
(1)按照配方用量，預先將b相中原料在合適的移動容器中分散至無顆粒狀，備用；
[0293]
(2)將a相中的原料加入鍋中；
[0294]
(3)將b相加入a相中，攪拌20min至混合均勻；
[0295]
(4)依次加入c相中原料，攪拌均勻，即得。
[0296]
實施例26制備液體組合物
[0297]
精華配方：
[0298]
[0299][0300]
制備方法：
[0301]
(1)按照配方用量，預先將b相中原料在合適的移動容器中分散至無顆粒狀，備用；
[0302]
(2)將a相中的原料加入鍋中，加熱至80℃-85℃，保溫至25-30min；
[0303]
(3)將b相加入a相中，攪拌20min至混合均勻，然后開始降溫；
[0304]
(4)降溫至60℃，加入c相，攪拌均勻；
[0305]
(5)降溫至40℃-45℃，依次加入d相中原料，攪拌均勻，即得。
[0306]
實施例27制備多肽液體組合物
[0307]
多肽精華液配方：
[0308]
[0309][0310]
制備方法：
[0311]
(1)按照配方用量，預先將b相中原料在合適的移動容器中分散至無顆粒狀，備用；
[0312]
(2)將a相中的原料加入鍋中，加熱至80℃-85℃，保溫至25-30min；
[0313]
(3)將b相加入a相中，攪拌20min至混合均勻，然后開始降溫；
[0314]
(4)降溫至60℃，加入c相，攪拌均勻；
[0315]
(5)降溫至40℃-45℃，依次加入d相中原料，攪拌均勻，即得。
[0316]
根據上述制備方法，將肌肽替換為脫羧肌肽、九肽-1、六肽-2、四肽-30、乙酰基六肽-8、五肽-18、乙酰谷氨酸酰七肽-1、二肽二氨基丁酰芐基酰胺二乙酸鹽、五肽-3、β-丙氨酰羥脯氨酰二氨基丁酰芐基酰胺、棕櫚酰五肽-4、棕櫚酰三肽-1、棕櫚酰四肽-7、三肽-1、四肽-21、棕櫚酰六肽-6、棕櫚酰三肽-5、乙酰基四肽-9、乙酰基四肽-11、豆蔻酰五肽-11、豆蔻酰六肽-4、豆蔻酰八肽-1、六肽-3、五肽-31、銅肽、六肽-8、六肽-9、六肽-10、己酰四肽-3、棕櫚酰二肽-5-二氨基丁酰羥基蘇氨酸、棕櫚酰二肽-6-二氨基、棕櫚酰六肽-12和三肽-10瓜氨酸中的一種或幾種，各多肽的質量百分濃度為0.0001％-5％，可制備得到其他的多肽液體組合物。
[0317]
對比例1制備β-煙酰胺單核苷酸抗衰水
[0318]
配方：
[0319]
編號原料名稱以重量計％a注射用水適量至100.00bβ-煙酰胺單核苷酸0.50
[0320]
制備方法：將注射用水灌裝至合適體積的容器中，加入b相中原料，攪拌均勻，即得。對比例2制備β-煙酰胺單核苷酸抗衰精華液
[0321]
配方：
[0322][0323]
制備方法：
[0324]
(1)按照配方用量，預先將b相中原料在合適的移動容器中分散至無顆粒狀，備用；
[0325]
(2)將a相中的原料加入鍋中，加熱至80℃-85℃，保溫至25-30min；
[0326]
(3)將b相加入a相中，攪拌20min至混合均勻，然后開始降溫；
[0327]
(4)降溫至60℃，加入c相，攪拌均勻；
[0328]
(5)降溫至40℃-45℃，依次加入d相中原料，攪拌均勻，即得。
[0329]
對比例3制備β-煙酰胺單核苷酸抗衰乳液
[0330]
配方：
[0331]
[0332][0333]
制備方法：
[0334]
(1)按照配方用量，預先將d相中原料加熱至60℃-65℃溶解，備用；
[0335]
(2)將a相中的原料加入鍋中，攪拌均勻至無顆粒為止，加熱至70℃-75℃，保溫至25-30min；
[0336]
(3)將b相中原料放入鍋中，加熱至70℃-75℃溶解，攪拌均勻；
[0337]
(4)將b相加入a相中，并加入c相中原料，攪拌5-10min至混合均勻，然后開始降溫；
[0338]
(5)降溫至60℃-65℃，加入d相中原料，攪拌均勻；
[0339]
(6)降溫至40℃-45℃，加入e相中原料，攪拌均勻；
[0340]
(7)少量多次的加入f相中原料，攪拌均勻，測試溶液ph值，直至ph值為5.5-7.0，即得。
[0341]
對比例4制備β-煙酰胺單核苷酸抗衰霜
[0342]
配方：
[0343]
[0344][0345]
制備方法：
[0346]
(1)按照配方用量，預先將d相中原料加熱至60℃-65℃溶解，備用；
[0347]
(2)將a相中的原料加入鍋中，攪拌均勻至無顆粒為止，加熱至70℃-75℃，保溫至25-30min；
[0348]
(3)將b相中原料放入鍋中，加熱至70℃-75℃溶解，攪拌均勻；
[0349]
(4)將b相加入a相中，并加入c相中原料，攪拌5-10min至混合均勻，然后開始降溫；
[0350]
(5)降溫至60℃-65℃，加入d相中原料，攪拌均勻；
[0351]
(6)降溫至40℃-45℃，加入e相中原料，攪拌均勻；
[0352]
(7)少量多次的加入f相中原料，攪拌均勻，測試溶液ph值，直至ph值為5.5-7.0，即得。
[0353]
對比例5制備不含β-煙酰胺單核苷酸的膠囊劑
[0354]
處方：
[0355][0356]
制備方法：
[0357]
(1)稱取處方量的乳糖、甘露醇分別過40目篩；
[0358]
(2)將乳糖和甘露醇混合均勻，制得膠囊填充粉末；
[0359]
(3)將定量的膠囊填充粉末填入空膠囊內，制得不含β-煙酰胺單核苷酸的膠囊。
[0360]
測試例1穩定性試驗
[0361]
1.1儀器
[0362]
恒溫恒濕箱、高效液相譜儀。
[0363]
1.2試驗樣品
[0364]
實施例1-23、對比例1-4。
[0365]
1.3試驗依據
[0366]
《中國藥典》2020年版四部通則9001原料藥物與制劑穩定性試驗指導原則。
[0367]
1.4試驗條件與檢驗項目
[0368]
恒溫恒濕箱40℃
±
2℃，rh75％
±
5％，于第2周通過hplc檢測各樣品中β-煙酰胺單核苷酸的含量，以評價各不同劑型中β-煙酰胺單核苷酸的穩定性。
[0369]
1.5穩定性試驗結果
[0370]
實施例1-23、對比例1-4的樣品在試驗條件下放置2周，檢測各樣品中β-煙酰胺單核苷酸的含量，穩定性數據見下表1：
[0371]
表1放置2周的穩定性試驗數據
[0372]
[0373][0374]
由表1的結果可知，在試驗條件下放置2周，實施例1-23的β-煙酰胺單核苷酸含量沒有出現顯著變化，對應的含量仍然均≥99％，而僅經過短短2周的時間，對比例1-4的β-煙酰胺單核苷酸含量卻出現了大幅下降，最低降至0.68％，說明β-煙酰胺單核苷酸在化妝品傳統的膏霜乳液劑型中降解快，穩定性差，在以固體形式存在的體系中具有更好的穩定性。β-煙酰胺單核苷酸含量的降低必然導致其功效的下降，甚至可能產生有害的降解產物，對人體具有潛在危害。因此，本發明的抗衰組合物，β-煙酰胺單核苷酸以固體形式存在，在使用時再將β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入液體組合物中，混合均勻，現配現用，可以提高β-煙酰胺單核苷酸的穩定性和安全性，在相同投料量的情況下取得了更優異的抗衰效果；克服了β-煙酰胺單核苷酸在液體中穩定性差，直接應用于化妝品等液體組合物中無法有效發揮作用的缺陷。此外，本發明的β-煙酰胺單核苷酸固體組合物還能夠口服或者舌下含服，通過將β-煙酰胺單核苷酸固體組合物與液體組合物合理搭配使用，協同抗衰，可以發揮相對于現有技術更加顯著的抗衰功效。
[0375]
測試例2抗衰效果評價試驗
[0376]
2.1受試者
[0377]
390名40-65歲的健康女性，隨機分為13組，平均每組30人。
[0378]
2.2組別、測試樣品、使用方法及使用量
[0379]
組
①
：實施例3內服，一次兩粒，一天兩次，早晚堅持使用；
[0380]
組
②
：對比例5內服，一次兩粒，一天兩次，早晚堅持使用；
[0381]
組
③
：實施例26外用，一次1.5ml，一天兩次，早晚堅持使用；
[0382]
組
④
：實施例27外用，一次1.5ml，一天兩次，早晚堅持使用；
[0383]
組
⑤
：每次將兩粒實施例3膠囊的內容物加入1.5ml實施例26的液體組合物中，混合均勻，溶解后外用，一天兩次，早晚堅持使用；
[0384]
組
⑥
：每次將兩粒對比例5膠囊的內容物加入1.5ml實施例26的液體組合物中，混合均勻，溶解后外用，一天兩次，早晚堅持使用；
[0385]
組
⑦
：每次將兩粒實施例3膠囊的內容物加入1.5ml實施例27的多肽液體組合物中，混合均勻，溶解后外用，一天兩次，早晚堅持使用；
[0386]
組
⑧
：實施例3內服，一次兩粒，實施例26外用，一次1.5ml；內服外用聯合，一天兩次，早晚堅持使用；
[0387]
組
⑨
：對比例5內服，一次兩粒，實施例26外用，一次1.5ml；內服外用聯合，一天兩次，早晚堅持使用；
[0388]
組
⑩
：實施例3內服，一次兩粒，實施例27外用，一次1.5ml；內服外用聯合，一天兩次，早晚堅持使用；
[0389]
組：每次內服一粒實施例3膠囊，另取一粒實施例3膠囊，將其膠囊內容物加入1.5ml實施例26的液體組合物中，混合均勻，溶解后外用；內服外用聯合，一天兩次，早晚堅持使用；
[0390]
組：每次內服一粒對比例5膠囊，另取一粒對比例5膠囊，將其膠囊內容物加入1.5ml實施例26的液體組合物中，混合均勻，溶解后外用；內服外用聯合，一天兩次，早晚堅持使用；
[0391]
組：每次內服一粒實施例3膠囊，另取一粒實施例3膠囊，將其膠囊內容物加入1.5ml實施例27的多肽液體組合物中，混合均勻，溶解后外用；內服外用聯合，一天兩次，早晚堅持使用。
[0392]
2.3評價方法
[0393]
根據分組，各組分別使用對應的樣品，一天兩次，早晚堅持使用，不得使用其他化妝品，連續使用4周，對受試者使用產品后的抗衰效果進行評價。
[0394]
2.4評價結果
[0395]
對受試者使用產品后的抗衰效果進行評價，結果見下表2。
[0396]
表2抗衰效果評價結果
[0397]
[0398][0399]
注：每組30人，人數占比經四舍五入得到，保留2位小數。
[0400]
結果顯示，組
①
受試者內服β-煙酰胺單核苷酸膠囊，在使用4周后，皮膚緊致度增加的人數占比為50.00％。組
②
受試者內服不含β-煙酰胺單核苷酸的膠囊，在使用4周后，皮膚緊致度增加的人數占比僅為6.67％。通過皮膚彈性、水潤光滑程度等其他評價指標亦可看出，組
①
受試者中相應指標的人數占比均明顯高于組
②
的人數占比。從組
①
與組
②
的對比可知，內服β-煙酰胺單核苷酸具有抗衰的效果，組
①
的受試者在測試結束后，愿意繼續使用產品的人數占比為66.67％，而組
②
的受試者在測試結束后愿意繼續使用產品的人數占比僅為3.33％。組
③
受試者外用不含肽的精華液，組
④
受試者外用含肌肽的精華液，相比之下，在精華液中加入肌肽后，抗衰效果得到提升。
[0401]
組
⑤
受試者將膠囊中含β-煙酰胺單核苷酸的內容物加入不含肽的精華液中，混合均勻，溶解后外用。組
⑥
受試者將膠囊中不含β-煙酰胺單核苷酸的內容物加入不含肽的精華液中，混合均勻，溶解后外用。由于組
⑥
受試者使用的膠囊中不含β-煙酰胺單核苷酸，組
⑥
相對于組
③
單純外用不含肽的精華液，其抗衰效果沒有得到提升。相比之下，組
⑤
具有比組
⑥
更優的抗衰效果，而且也比組
①
、組
③
的效果好，說明使用本發明的抗衰組合物，將β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入不含活性成分的液體組合物中，混合均勻后外用，比單純內服β-煙酰胺單核苷酸固體組合物、單純外用不含活性成分的液體組合物，能夠明顯提升抗衰效果。組
⑦
受試者將膠囊中含β-煙酰胺單核苷酸的內容物加入含肌肽的精華液中，混
合均勻，溶解后外用，相比于組
①
、組
④
、組
⑤
，組
⑦
中通過β-煙酰胺單核苷酸和肌肽發揮協同作用，其抗衰效果進一步提升。
[0402]
組
⑧
受試者內服β-煙酰胺單核苷酸膠囊，外用不含肽的精華液，通過內服外用的方式抗衰，相比于組
①
單純內服β-煙酰胺單核苷酸膠囊、組
③
單純外用不含肽的精華液，組
⑧
的抗衰效果更加明顯，測試結束后愿意繼續使用組
⑧
對應產品的人數占比達73.33％。組
⑨
受試者內服不含β-煙酰胺單核苷酸的膠囊，外用不含肽的精華液，由于內服的膠囊中不含β-煙酰胺單核苷酸，組
⑨
相對于組
③
單純外用不含肽的精華液，其抗衰效果沒有明顯變化。由此可知，使用本發明所述的抗衰組合物，通過內服β-煙酰胺單核苷酸固體組合物，外用液體組合物，內服外用發揮協同作用，可以達到更優的抗衰效果。組
⑩
的受試者內服β-煙酰胺單核苷酸膠囊，外用含肌肽的精華液，采用內服外用的方式，β-煙酰胺單核苷酸和肌肽協同抗衰，具有比組
①
、組
④
、組
⑧
更優的技術效果。
[0403]
組的受試者內服β-煙酰胺單核苷酸膠囊，除此之外，另取β-煙酰胺單核苷酸膠囊，將其內容物加入不含肽的精華液中，混合均勻，溶解后外用。組的受試者內服不含β-煙酰胺單核苷酸的膠囊，除此之外，另取不含β-煙酰胺單核苷酸的膠囊，將其內容物加入不含肽的精華液中，混合均勻，溶解后外用。由于膠囊中不含β-煙酰胺單核苷酸，組對應產品的抗衰效果與組
③
、組
⑨
相比沒有提升。相比之下，組的受試者通過內服β-煙酰胺單核苷酸膠囊，另取β-煙酰胺單核苷酸膠囊，將其內容物加入不含肽的精華液中，混合均勻，溶解后外用，采用這種內服外用，且外用的活性成分中亦含有β-煙酰胺單核苷酸的方式，可以取得顯著的抗衰效果，且其抗衰效果優于組
⑧
，測試結束后愿意繼續使用組對應產品的人數占比高達86.67％。由此可知，使用本發明所述的抗衰組合物，通過內服β-煙酰胺單核苷酸固體組合物，另取β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入液體組合物中，混合均勻后外用，可以取得比采用β-煙酰胺單核苷酸固體組合物僅內服，液體組合物僅外用的內服外用方式更優的抗衰功效。組的受試者通過內服β-煙酰胺單核苷酸膠囊，另取β-煙酰胺單核苷酸膠囊，將其內容物加入含肌肽的精華液中，混合均勻，溶解后外用。采用這種內服外用，且外用的活性成分中同時含有β-煙酰胺單核苷酸和肌肽的方式，通過內服外用協同以及外用中β-煙酰胺單核苷酸和肌肽協同，發揮雙重協同增效作用，組具有所有組別中最優的抗衰效果。
[0404]
通過比較組
⑤
、組
⑦
、組
⑧
、組
⑩
、組組可知，本發明的抗衰組合物，可以采用多種方式靈活使用，如采用β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入不含活性成分的液體組合物中，混合均勻后外用的方式；采用β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入含活性成分的液體組合物中，混合均勻后外用的方式；采用β-煙酰胺單核苷酸固體組合物僅內服，不含活性成分的液體組合物僅外用的內服外用方式；采用β-煙酰胺單核苷酸固體組合物僅內服，含活性成分的液體組合物外用的內服外用方式；采用β-煙酰胺單核苷酸固體組合物內服，另取β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入不含活性成分的液體組合物中，混合均勻后外用的內服外用方式；采用β-煙酰胺單核苷酸固體組合物內服，另取β-煙酰胺單核苷酸固體組合物加入含活性成分的液體組合物中，混合均勻后外用的內服外用方式等。此外，在外用時，外用液體組合物中可以包括至少一種活性成分。通過不同的使用方式，本發明的抗衰組合物可以發揮協同增效、雙重協同增效甚至多重協同增效作用，從而取得不同的抗衰效果，有利于消費者根據各自的需求，采用適合自身情況的使用方式，進行有針對性的個性化抗衰護理，以達到最優的狀態。而且，本發明的抗衰組合物及其使用方法，相對于傳統的單純內服抗衰膠
囊或者單純外用抗衰精華液涂抹護膚，取得了更優的皮膚護理效果。這種有創意、新穎獨特的產品及其使用方法深受消費者喜愛，給消費者帶來良好的使用體驗；并且產品的使用方便性不會受到影響，日常使用方便，外出攜帶也方便，也利于儲存及運輸，容易被消費者接受。
[0405]
測試例3ros染實驗
[0406]
3.1試劑與材料
[0407]
胎牛血清、dmem培養基、青霉素、鏈霉素、ros活性氧檢測試劑盒。
[0408]
3.2儀器
[0409]
熒光顯微鏡、co2培養箱、超凈工作臺。
[0410]
3.3細胞株
[0411]
人角質形成細胞(hacat)，購買自中國科學院典型培養物保藏委員會昆明細胞庫。
[0412]
3.4待測樣品
[0413]
給藥組：nmn、肌肽、nmn+肌肽(1:1)、nmn+肌肽(2:1)，測試濃度均為100ppm。
[0414]
空白對照組：pbs。
[0415]
uv組：uv輻射，加pbs。
[0416]
3.5實驗目的
[0417]
衰老的指征之一是細胞內氧化應激水平提高，即ros增加，而通過降低氧化應激水平可以減緩衰老。本實驗的目的是采用ros染實驗測試β-煙酰胺單核苷酸和肌肽的組合物對氧化應激水平的影響，以評價其抗氧化作用。以此同時，進一步證明β-煙酰胺單核苷酸和肌肽的協同抗衰作用。
[0418]
3.6實驗方法
[0419]
取凍存的hacat細胞培養，按照1：2傳代至5代左右，選擇長勢較好的細胞作為實驗對象。
[0420]
取細胞懸液接種于6孔板上，加入完全培養基2ml/孔，置于37℃、5％co2培養箱中培養24h(接種濃度10000個/孔)。待細胞長滿至80％，用真空泵將原培養基溶液吸出，建立紫外輻射模型。空白對照組加入200μl pbs、1800μl/孔的培養基，使用兩層封口膜封住孔，不進行uv照射。uv組和給藥組分別加入pbs 600μl/孔，暴露于uv燈下照射15min(輻照劑量：80mj/cm2)。照射15min后，將pbs溶液吸出，uv組加入200μl pbs，補加培養基至2ml/孔；給藥組加入完全培養基1800μl/孔，按照稀釋倍數稀釋好樣品濃度，加入200μl/孔的待測樣品(終濃度為100ppm)。各組放入培養箱內培養24h。
[0421]
按照1:1000用無血清培養液稀釋ros活性氧檢測試劑盒中的dcfh-da，使其終濃度為10μm。去除細胞培養液，加入稀釋好的dcfh-da 600μl/孔，加入的體積以能充分蓋住細胞為宜。37℃細胞培養箱內孵育20min，用pbs洗滌細胞3次，以充分去除未進入細胞內的dcfh-da。置于熒光顯微鏡下觀察。
[0422]
3.7實驗結果
[0423]
細胞內ros是引發細胞氧化損傷的直接原因之一，是細胞凋亡的一個重要標志，ros水平與膠原纖維含量呈負相關，降低細胞內ros的含量是抗衰、抗氧化的有效方式和重要途徑。本實驗在紫外輻射模型的基礎上，使用活性氧熒光探針進行標記，觀察各測試樣品對ros水平的影響，以評價β-煙酰胺單核苷酸與肌肽組合后的抗氧化作用。
[0424]
測試樣品對角質形成細胞ros的影響結果見圖1。結果顯示，與空白對照組相比，經uv輻射后，相同單位內細胞ros含量顯著提高(如圖1中淺部分所示)，表明紫外輻射模型建模成功。與uv組相比，100ppm的nmn、肌肽、nmn+肌肽(1:1)組合物、nmn+肌肽(2:1)組合物均可以在一定程度上降低單位細胞ros水平；而且100ppm的nmn+肌肽(1:1)組合物、100ppm的nmn+肌肽(2:1)組合物降低單位細胞ros的效果明顯好于相同濃度的單一nmn和單一肌肽。其中，100ppm nmn+肌肽(2:1)組合物降低單位細胞ros含量的效果最好，具有優異的抗氧化能力。
[0425]
由此說明，nmn與肌肽按不同比例組合得到的組合物，相較于nmn或肌肽單獨存在時，表現出了預料不到的抗氧化作用。相較于nmn或肌肽單獨存在時，nmn與肌肽的組合物具有更加顯著的抗光老化修復能力及抗氧化作用，取得了預料不到的技術效果，由此進一步證明了β-煙酰胺單核苷酸和肌肽組合具有協同抗衰作用。本發明的抗衰組合物，通過將β-煙酰胺單核苷酸固體組合物與液體組合物合理搭配使用，協同抗衰，可以發揮相對于現有技術更加顯著的抗衰功效。
[0426]
測試例4抗氧化實驗
[0427]
4.1試劑與材料
[0428]
dpph、甲醇。
[0429]
4.2實驗儀器
[0430]
酶標儀。
[0431]
4.3待測樣品
[0432]
nmn、肌肽、nmn+肌肽(2:1)，測試濃度均為100ppm。
[0433]
4.4實驗目的
[0434]
本實驗的目的是通過測定樣品的dpph清除率來評價β-煙酰胺單核苷酸和肌肽的組合物的抗氧化作用。以此同時，進一步證明β-煙酰胺單核苷酸和肌肽的協同抗衰作用。
[0435]
4.5實驗方法
[0436]
稱取12.5mg dpph，用95％甲醇溶解移至50ml棕容量瓶，定容，避光保存。稱取待測樣品，用95％甲醇溶解，配制對應濃度的樣品溶液。
[0437]
取100μl待測樣品甲醇溶解液與100μl 200μg/ml的dpph標準混合液，避光反應45min，于490nm處測定吸光值abs
spl
；以100μl甲醇與100μl 200μg/ml的dpph標準液作為對照品，于490nm處測定吸光值abs
control
；以100μl待測樣品與100μl甲醇作為空白對照，于490nm處測定吸光值abs
blank
。
[0438]
各樣品的dpph清除率按以下公式計算：
[0439]
清除率(％)＝(abs
control
—abs
spl
)/(abs
control
—abs
blank
)
×
100％。
[0440]
4.6實驗結果
[0441]
dpph是一種自由基，溶液為藍，當dpph被還原時，則會變成黃，因此可根據此來定量和定性分析測試樣品的抗氧化性能，各樣品的dpph清除率結果見圖2。
[0442]
結果顯示，相較于nmn或肌肽單獨存在時，在相同測試濃度下，100ppm的nmn+肌肽(2:1)組合物的dpph清除率明顯更高，結果具有顯著的統計學差異，說明nmn與肌肽的組合物具有更強的dpph自由基清除能力，表現出了預料不到的抗氧化作用。由此進一步證明了β-煙酰胺單核苷酸和肌肽組合具有協同抗衰作用。本發明的抗衰組合物，通過將β-煙酰胺
單核苷酸固體組合物與液體組合物合理搭配使用，協同抗衰，可以發揮相對于現有技術更加顯著的抗衰功效，可用于制備抗氧化產品，減少、預防或皺紋，、預防和/或修復皮膚老化，制備抗衰老的藥物、營養品、保健品或護膚品。
[0443]
以上內容是結合具體的優選實施方式對本發明所做的進一步詳細的說明，但是不表示本發明的具體實施是局限于這些說明。對于本發明所屬領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或是替換，都應視為屬于本發明的保護范圍。
