一種用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑的制作方法
1.本發明涉及生物化學技術領域，尤其涉及一種用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑。
背景技術：
2.新型冠狀病毒大流行對檢測提出了巨大需求。目前，最流行的新型冠狀病毒檢測方法是通過逆轉錄結合聚合酶鏈反應檢測其rna基因組。
3.基本原理是從組織、細胞、體液等多種類型樣本中分離病毒rna，通過逆轉錄結合聚合酶鏈反應，將樣本中微量的病毒信息成倍放大，最后以熒光信號的強弱對rna進行相對定量。具有高靈敏度、高特異性、適用樣本類型廣泛等優點。
4.病毒檢測從采集樣本開始。目前推薦的新型冠狀病毒檢測使用拭子從上呼吸道采集樣本，或從下呼吸道采集痰或唾液。從鼻咽或口咽收集的拭子樣本浸入病毒轉移培養基中中以形成病毒懸浮液。病毒懸浮液立即用于檢測或在4℃下儲存72小時，或在-20℃下儲存更長時間。病毒轉移培養基中由生理鹽水溶液或細胞培養基加上抗生素組成。
5.最常用的病毒核酸檢測包括兩個步驟:病毒核酸純化步驟，然后是采用rt-pcr試劑和新型冠狀病毒特異性探針進行檢測。
6.采用上述方式，病毒核酸純化過程會導致病毒檢測時間延長，降低了對病毒的檢測效率。
技術實現要素：
7.本發明的目的在于提供一種用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑，旨在解決現有的病毒核酸檢測方法的檢測效率較低的問題。
8.為實現上述目的，第一方面，本發明提供了一種用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑的檢測方法，包括以下步驟：
9.將二醇與堿性化合物按照預設比例組合，得到堿性乙二醇組合物；
10.將百里酚、2-苯基苯酚和吐溫20溶解在乙二醇中，得到病毒保存組合物；
11.采集生物樣本；
12.將所述生物樣本與所述堿性乙二醇組合物組合后置于所述病毒保存組合物中進行保存，得到第一反應混合物；
13.將所述反應混合物中的病毒核酸從病毒包膜中釋放出來進行逆轉錄結合聚合酶鏈反應，同時通過核衣殼基因探針進行檢測，得到第一病毒檢測結果。
14.其中，在步驟將所述反應混合物中的病毒核酸從病毒包膜中釋放出來進行逆轉錄結合聚合酶鏈反應，得到病毒檢測結果之后，所述方法還包括：
15.將滅活病毒與所述堿性乙二醇組合物組合后置于所述病毒保存組合物中進行保存，得到第二反應混合物；
16.在室溫下孵育所述第二反應混合物5-30min，得到孵育組合物；
17.將所述孵育組合物與熒光反應混合物進行混合，得到第二反應混合物；
18.使用非離子去污劑對所述第二反應混合物進行處理后進行實時熒光定量分析，得到第二病毒檢測結果；
19.使用所述第二病毒檢測結果對所述第一病毒檢測結果進行評估。
20.其中，所述堿性乙二醇組合物中的所述二醇的濃度范圍為10％-25％。
21.其中，所述生物樣本包括下呼吸道樣本和上呼吸道采集拭子中的任意一種；
22.所述下呼吸道樣本包括唾液樣本和痰樣本。
23.其中，所述非離子去污劑包括tween 20、triton x-100、np 40和brij 35。
24.其中，所述采集唾液樣本，包括：
25.通過唾液采集儲存裝置抽取目標口腔內的唾液；
26.將所述唾液浸入病毒轉移培養基中，得到唾液樣本。
27.其中，所述唾液采集儲存裝置包括儲存管、活塞和吸入機構，所述活塞設置于所述儲存管內側壁，所述吸入機構設置于所述儲存管底部。
28.第二方面，本發明提供了一種用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑，包括堿性乙二醇組合物和病毒保存組合物；
29.所述堿性乙二醇組合物包括二醇和堿性化合物；
30.所述堿性化合物包括堿性乙二醇溶液和聚亞烷基二醇中的任意一種；
31.所述堿性乙二醇溶液包括65g peg 200、0.252g koh和34.75g ml水；
32.所述聚亞烷基二醇包括聚乙二醇、丙二醇和聚丙二醇；
33.所述病毒保存組合物包括25mg/ml的百里酚、20pg/ml的2-苯基苯酚和50mg/ml的吐溫20。
34.本發明的一種用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑，通過將二醇與堿性化合物按照預設比例組合，得到堿性乙二醇組合物；將百里酚、2-苯基苯酚和吐溫20溶解在乙二醇中，得到病毒保存組合物；采集生物樣本；將所述生物樣本與所述堿性乙二醇組合物組合后置于所述病毒保存組合物中進行保存，得到第一反應混合物；將所述反應混合物中的病毒核酸從病毒包膜中釋放出來進行逆轉錄結合聚合酶鏈反應，同時通過核衣殼基因探針進行檢測，得到第一病毒檢測結果，本法發明無需對病毒核酸純化，基于堿性乙二醇組合物可以快速、可靠和靈敏地檢測病毒核酸，在不到1小時的時間內通過逆轉錄結合聚合酶鏈反應檢測病毒核酸，解決了現有的病毒核酸檢測方法的檢測效率較低的問題。
附圖說明
35.為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。
36.圖1是本發明提供的一種用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑的流程圖。
37.圖2是唾液采集儲存裝置的結構示意圖。
38.圖3是唾液采集儲存裝置剖視圖。
39.圖4是圖3細節a處的放大圖。
40.圖5是核酸提取后樣本及hank’s液直擴存在大量抑制無法擴增的rt-qpcr擴增曲線圖。
41.圖6是核酸提取后樣本及hank’s液加入不同濃度不同種類的表面活性劑后的rt-qpcr擴增曲線圖。
42.圖7是核酸提取樣本及hank’s液加入不同濃度堿性聚乙二醇后樣本的rt-qpcr擴增曲線圖。
43.圖8是核酸提取樣本及hank’s液加入不同濃度堿性聚乙二醇和表面活性劑的rt-qpcr擴增曲線圖。
44.1-儲存管、2-活塞、3-吸入機構、4-橡膠圈、5-連接板、6-拉桿、7-手柄、8-彈性桿、9-密封板、10-密封墊、11-復位彈簧、12-滑桿、13-限位塊、14-底板。
具體實施方式
45.下面詳細描述本發明的實施例，所述實施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標號表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附圖描述的實施例是示例性的，旨在用于解釋本發明，而不能理解為對本發明的限制。
46.請參閱圖1至圖8，第一方面，本發明提供一種用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑的檢測方法，包括以下步驟：
47.s1將二醇與堿性化合物按照預設比例組合，得到堿性乙二醇組合物；
48.具體的，所述堿性乙二醇組合物中的所述二醇的濃度范圍為10％-25％。
49.s2將百里酚、2-苯基苯酚和吐溫20溶解在乙二醇中，得到病毒保存組合物；
50.具體的，所述病毒保存組合物，其包含在溶液中或作為干燥化合物混合物的本發明化合物，用于保存生物樣本中的rna，包括病毒rna，用于rna檢測測試，包括直接rt-qpcr。
51.所述病毒保存組合物包含唾液和vtm，輔以百里酚(cas89-83-8)、2-苯基苯酚(cas9043-7)和吐溫20(cas9005-64-5)。所得溶液病毒保存組合物包含25mg/ml的百里酚、20pg/ml的2-苯基苯酚和50mg/ml的吐溫20。補充唾液或vtm后，最終濃度范圍為:百里酚為50pg/ml至1mg/ml，2-苯基苯酚為0.2pg/ml至30mg/ml，吐溫20為0.2mg/毫升至50毫克/毫升。
52.在這些濃度下，組合物是50x儲備溶液，即每ml唾液或vtm添加20ulvpc，以獲得0.5mg/ml百里酚、0.4pg/ml2苯基苯酚、10mg/mltween20的最終組合物濃度。具有其他最終濃度的溶液，在本發明中對這三種化合物指定的范圍內，以及僅含有百里酚和2-苯基苯酚的組合物也可以制備和用于本發明。對于本發明的rt-qpcr使用，與tween20結合使用，2苯基苯酚的最大非抑制濃度為0.5pg/ml唾液。
53.百里酚和2-苯基苯酚是已知的抗微生物化合物。兩者都具有廣泛的抗菌作用。百里酚可以與蛋白質結合并抑制多種酶促反應。
54.2-苯基苯酚及其鈉鹽和鉀鹽被用作廣譜殺菌劑和表面殺菌劑的活性成分。
55.吐溫20作為一種表面活性劑，可以通過破壞衣殼的脂質雙層。tween20和tritonx100被發現可有效支持使用去污劑滅活的唾液樣本對病毒核酸進行直接rt-qpcr測試。
56.s3采集生物樣本；
57.具體的，所述生物樣本包括下呼吸道樣本和上呼吸道采集拭子中的任意一種；
58.所述下呼吸道樣本包括唾液樣本和痰樣本。
59.所述采集唾液樣本，包括：
60.s31通過唾液采集儲存裝置抽取目標口腔內的唾液；
61.具體的，所述唾液采集儲存裝置包括儲存管1、活塞2和吸入機構3，所述活塞2設置于所述儲存管1內側壁，所述吸入機構3設置于所述儲存管1底部。
62.在抽取唾液樣本時，首先向靠近所述吸入機構3的一側推動所述活塞2，使得所述活塞2桿移動至所述儲存管1的最底部，然后將所述吸入機構3對準目標口腔的唾液處，并向遠離所述吸入機構3的一側拉動所述活塞2，并將唾液抽到所述儲存管1內進行儲存，減少唾液與空氣的接觸，避免空氣中的雜質對唾液造成污染，影響后續檢測的精確度。
63.具體的，所述活塞2包括橡膠圈4、連接板5、拉桿6和手柄7，所述橡膠圈4設置于所述儲存管1內側壁，所述連接板5與所述橡膠圈4固定連接，并位于遠離所述儲存管1的一側，所述拉桿6與所述連接板5固定連接，并位于遠離所述吸入機構3的一側，所述手柄7與所述拉桿6固定連接，并位于遠離所述連接板5的一側。
64.所述橡膠圈4用于增加所述連接板5與所述儲存管1之間的密封性，所述拉桿6用于增加所述手柄7與所述連接板5之間的間距，便于所述連接板5滑動到所述儲存管1最底部時，所述手柄7仍處于所述儲存管1外，便于拉動所述連接板5。
65.具體的，所述吸入機構3包括底板14、彈性桿8、密封板9和密封墊10，所述底板14與所述儲存管1固定連接，并位于所述儲存管1底部，所述彈性桿8設置于所述底板14內側壁，所述密封板9與所述彈性桿8固定連接，并位于所述儲存管1內，所述密封墊10與所述密封板9固定連接，并位于靠近所述底板14的一側。
66.所述底板14為所述彈性桿8提供安裝條件，所述底板14具有進液口，在所述連接板5帶動所述橡膠圈4向遠離所述底板14的一側滑動時，唾液經進液口推動所述密封板9，使得所述密封板9拉動所述彈性桿8從所述底板14內側壁滑出，此時，所述密封板9與所述底板14之間產生間隙，唾液從間隙處進入所述儲存管1內，唾液抽取完成后，向靠近所述底板14的一側推動所述連接板5，所述連接板5通過所述儲存管1內的唾液推動所述密封板9，使得所述密封板9推動所述彈性桿8進入所述底板14內，并將所述底板14上的進液口封閉，所述密封板9上的所述密封墊10可提高對進液口的密封效果。此時可避免在運輸環境下，所述儲存管1內的唾液造成污染。在對唾液進行核酸檢測時，在干凈的環境下，通過所述手柄7將所述連接板5完全從所述儲存管1內抽出，此時，最后將所述儲存管1內的唾液倒出即可。
67.具體的，所述彈性桿8包括復位彈簧11、限位塊13和滑桿12，所述復位彈簧11與所述底板14固定連接，并位于所述底板14內側壁，所述限位塊13與所述復位彈簧11固定連接，并與所述底板14滑動連接，并位于所述底板14內側壁，所述滑桿12與所述限位塊13固定連接，并與所述密封板9固定連接，并位于所述限位塊13與所述密封板9之間。
68.所述限位塊13將所述滑桿12連接在所述復位彈簧11上，所述復位彈簧11在所述儲存管1運輸過程中通過所述滑桿12拉動所述密封板9與所述底板14緊密接觸，對所述進液口進行密封。
69.s32將所述唾液浸入病毒轉移培養基中，得到唾液樣本。
70.具體的，vtm，病毒轉移培養基，一種用于儲存和轉移含有病毒的生物樣本的液體，
有時被指定為通用轉移培養基(utm)。通常與含有上呼吸道標本的拭子或口腔拭子一起使用。
71.s4將所述生物樣本與所述堿性乙二醇組合物組合后置于所述病毒保存組合物中進行保存，得到第一反應混合物；
72.s5將所述反應混合物中的病毒核酸從病毒包膜中釋放出來進行逆轉錄結合聚合酶鏈反應，同時通過核衣殼基因探針進行檢測，得到第一病毒檢測結果。
73.具體的，所述核衣殼基因探針包括檢測sars-cov-2基因組核衣殼基因o和n區的探針。
74.本發明優選的樣本是唾液(痰)。通常，收集1ml至3ml，優選1ml唾液，但也可以收集其他體積更小或更大的唾液。收集的唾液可立即使用，室溫保存5小時，或在4℃保存2天，或在-20保存更長時間。
75.唾液是一種在體內支持活病毒的生物液體，也能夠在體外條件下維持病毒。與新型冠狀病毒的情況一樣，單鏈rna基因組受到衣殼的保護，免受降解，衣殼由結合核蛋白、膜蛋白和刺突糖蛋白的蛋白質基質組成。
76.具體的，最優選的組合物被制成包含兩體積的唾液或vtm和一種堿性peg200溶液。堿性peg200溶液是包含65％peg200和45mmkoh的水溶液。
77.因此，最優選的堿性乙二醇加工組合物包含按體積計:67％(v/v)的唾液和21.7％(v/v)的peg200，以及按重量計:65％的唾液和22.8％的peg200。
78.由于組合物中二醇的量為約10％至低于25％，堿的體積約為0.3％，因此生物樣本的體積可高達組合物體積的約90％。組合物中生物樣本的最低體積可以是少量動物細胞的體積。在小體積樣品的情況下組合物包含堿性乙二醇溶液和額外量的水，以達到本發明指定范圍內的最終乙二醇濃度和ph值。
79.在組合物加工過程中，病毒核酸從病毒包膜中釋放出來，可用于包括逆轉錄和rt-pcr在內的酶促反應。唾液等生物樣本含有抑制rt-pcr的碳水化合物和蛋白質，包括核糖核酸酶。含有乙二醇和高堿性ph值的加工組合物可降低這些抑制劑的作用，并允許通過直接rt-pcr有效檢測病毒rna，無需rna純化。組合物的堿性ph范圍為ph11.5至ph14.0，優選的ph范圍為ph11.8至ph13.0，最優選的范圍為ph12.2至ph12.8。組合物的堿性ph值由強礦物堿(如koh和/或naoh)和二醇維持。
80.s6將滅活病毒與所述堿性乙二醇組合物組合后置于所述病毒保存組合物中進行保存，得到第二反應混合物；
81.s7在室溫下孵育所述第二反應混合物5-30min，得到孵育組合物；
82.具體的，在室溫下孵育組合物5分鐘至30分鐘。如有必要，組合物中的孵育時間可延長至1小時。
83.s8將所述孵育組合物與熒光反應混合物進行混合，得到第二反應混合物；
84.具體的，孵育后，組合物添加到專為rt-qpcr反應混合物中。組合物與rt-qpcr反應混合物混合后，所得組合物的ph值顯著降低，并在8.0至8.5的范圍內，這是最佳rt-qpcr性能所需的。因此，無需對rt-qpcr進行ph調節步驟來降低ag加工組合物的高堿度
85.s9使用非離子去污劑對所述第二反應混合物進行處理后進行實時熒光定量分析，得到第二病毒檢測結果；
86.具體的，在本發明中，用于rt-qpcr反應混合物的試劑盒的推薦組合物包含濃度為約0.1％至約5％的非離子去污劑，包括tween20、tritonx-100、np40和brij35。
87.s10使用所述第二病毒檢測結果對所述第一病毒檢測結果進行評估。
88.具體的，在組合物和rt-qpcr中使用非抑制性化合物對于sars-cov-2檢測的有效性至關重要。
89.術語定義：
90.道爾頓，符號da，摩爾質量單位，1da＝1g/mol。
91.rt，逆轉錄酶催化的反應，從rna模板生成互補dna。
92.rt-lamp，環介導等溫擴增，rt-lamp用于從rna序列合成(cdna)。該cdna的擴增通過使用dna聚合酶和識別目標dna序列內互補區域的四個引物進行鏈置換而發生。
93.rt-pcr，逆轉錄聚合酶鏈式反應，結合rna模板的逆轉錄以產生互補dna，并使用與目標dna區域互補的序列特異性引物通過聚合酶鏈式反應(pcr)擴增dna。
94.rt-qpcr，定量rt-pcr，rt-pcr的一個子組，用于定量(量化)rna分子的數量，包括病毒rna和信使rna。
95.直接rt-qpcr，用于檢測rna的rt-qpcr，其中生物樣品直接進行rt-qpcr以對樣品的rna進行定量，無需rna純化步驟。直接rt-qpcr可能涉及樣品的簡單處理，例如加熱和/或與化合物一起孵育以改善rna檢測。
96.ct，定量pcr和rt-qpcr中的臨界閾值(ct)，熒光曲線表現出最大曲率并超過背景熒光閾值的擴增循環。ct用作pcr中產物積累的定量測量。
97.本發明的新型冠狀病毒檢測測試基于堿性乙二醇(ag)組合物處理，可以快速、可靠和靈敏地檢測病毒核酸，可以自動化或手動設置?？梢蕴幚硗僖夯蚴米訕颖?，在不到1小時的時間內通過逆轉錄結合聚合酶鏈反應(rt-pcr)檢測病毒核酸。使用ag處理消除了對rna純化步驟的需要，并且不需要加熱樣本。含有新型冠狀病毒(sars-cov-2)的樣本通過在室溫下在ag處理組合物中孵育進行處理。該處理基于生物樣本的乙二醇-堿性處理，優選在ph12.2至ph12.8在此過程中，病毒rna可用于rt反應，并且rt-pcr的抑制劑被充分滅活，從而檢測到目標rna與使用純化rna的測試相當。直接處理組合物中的簡單孵育無需進行核酸提取來檢測病毒核酸。
98.本發明公開了用于檢測病毒rna的組合物和方法，包括收集、處理和檢測生物樣本中的病毒核酸。
99.本發明使用堿性乙二醇處理含有病毒的生物樣本，用于病毒核酸檢測測試，包括rt-pcr。
100.本發明的堿性乙二醇處理導致病毒充分裂解和生物樣本中存在的rt-pcr抑制劑失活，從而允許通過直接rt-qpcr有效檢測病毒rna，無需病毒rna提取純化步驟。
101.本發明的組合物和方法簡化了檢測病毒核酸的檢測。同時，本發明的病毒rna檢測的靈敏度與包括提取純化病毒核酸檢測方法相當。
102.第二方面，本發明提供了一種用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑，包括堿性乙二醇組合物和病毒保存組合物；
103.所述堿性乙二醇組合物包括二醇和堿性化合物；
104.所述堿性化合物包括堿性乙二醇溶液(peg200，平均分子量為200的聚乙二醇)和
聚亞烷基二醇中的任意一種；
105.所述堿性乙二醇溶液包括65gpeg200、0.252gkoh和34.75gml水；
106.所述聚亞烷基二醇包括聚乙二醇、丙二醇和聚丙二醇；
107.所述病毒保存組合物包括25mg/ml的百里酚、20pg/ml的2-苯基苯酚和50mg/ml的吐溫20。
108.具體的，peg200為65％，指化合物的重量百分比相對于含有所述化合物的溶液的總重量。例如，20％乙二醇水溶液中含有20g乙二醇和80g水。koh為45mm。％(v/v)是指化合物或化合物混合物在含有所述化合物的溶液中的體積百分比。
109.所述堿性乙二醇組合物包含二醇和聚亞烷基二醇，例如:聚乙二醇、丙二醇、聚丙二醇。優選的二醇是聚乙二醇。本發明中使用的聚乙二醇或peg可商購獲得，其分子量范圍為200至100，000da。優選的分子量范圍是200da到10，000da，最優選的分子量是200da。用于堿性乙二醇加工的組合物中二醇的濃度范圍為約10％至低于25％，優選濃度為20％至23％。
110.圖5至圖8中，δrn＝r+n-r-n,計算δrn,其中,r+n是表示每點測量的熒光強度,r-n表示熒光基線強度。實時熒光定量pcr是利用熒光信號的變化，實時檢測pcr擴增反應中每次循環擴增產物量的變化，通過循環閾值和標準曲線的分析對標本中起始模板拷貝數進行定量分析。
111.cycle：是擴增循環數，在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個pcr進程，使每一個循環變得“可見”，最后通過循環閾值(cycle threshold，ct)和標準曲線的關系對起始模板進行定量分析。
112.以上所揭露的僅為本發明一種用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑較佳實施例而已，當然不能以此來限定本發明之權利范圍，本領域普通技術人員可以理解實現上述實施例的全部或部分流程，并依本發明權利要求所作的等同變化，仍屬于發明所涵蓋的范圍。
技術特征：
1.一種用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：將二醇與堿性化合物按照預設比例組合，得到堿性乙二醇組合物；將百里酚、2-苯基苯酚和吐溫20溶解在乙二醇中，得到病毒保存組合物；采集生物樣本；將所述生物樣本與所述堿性乙二醇組合物組合后置于所述病毒保存組合物中進行保存，得到第一反應混合物；將所述反應混合物中的病毒核酸從病毒包膜中釋放出來進行逆轉錄結合聚合酶鏈反應，同時通過核衣殼基因探針進行檢測，得到第一病毒檢測結果。2.如權利要求1所述的用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑的檢測方法，其特征在于，在步驟將所述反應混合物中的病毒核酸從病毒包膜中釋放出來進行逆轉錄結合聚合酶鏈反應，得到病毒檢測結果之后，所述方法還包括：將滅活病毒與所述堿性乙二醇組合物組合后置于所述病毒保存組合物中進行保存，得到第二反應混合物；在室溫下孵育所述第二反應混合物5-30min，得到孵育組合物；將所述孵育組合物與熒光反應混合物進行混合，得到第二反應混合物；使用非離子去污劑對所述第二反應混合物進行處理后進行實時熒光定量分析，得到第二病毒檢測結果；使用所述第二病毒檢測結果對所述第一病毒檢測結果進行評估。3.如權利要求1所述的用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑的檢測方法，其特征在于，所述堿性乙二醇組合物中的所述二醇的濃度范圍為10％-25％。4.如權利要求1所述的用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑的檢測方法，其特征在于，所述生物樣本包括下呼吸道樣本和上呼吸道采集拭子中的任意一種；所述下呼吸道樣本包括唾液樣本和痰樣本。5.如權利要求2所述的用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑的檢測方法，其特征在于，所述非離子去污劑包括tween 20、tritonx-100、np 40和brij 35。6.如權利要求2所述的用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑的檢測方法，其特征在于，所述采集唾液樣本，包括：通過唾液采集儲存裝置抽取目標口腔內的唾液；將所述唾液浸入病毒轉移培養基中，得到唾液樣本。7.如權利要求2所述的用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑的檢測方法，其特征在于，所述唾液采集儲存裝置包括儲存管、活塞和吸入機構，所述活塞設置于所述儲存管內側壁，所述吸入機構設置于所述儲存管底部。
8.一種用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑，應用于權利要求6所述的用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑的檢測方法，其特征在于，包括堿性乙二醇組合物和病毒保存組合物；所述堿性乙二醇組合物包括二醇和堿性化合物；所述堿性化合物包括堿性乙二醇溶液和聚亞烷基二醇中的任意一種；所述堿性乙二醇溶液包括65g peg 200、0.252g koh和34.75g ml水；所述聚亞烷基二醇包括聚乙二醇、丙二醇和聚丙二醇；所述病毒保存組合物包括25mg/ml的百里酚、20pg/ml的2-苯基苯酚和50mg/ml的吐溫20。
技術總結
本發明涉及生物化學技術領域，具體涉及一種用于新型冠狀病毒快速核酸檢測的直擴試劑，包括將二醇與堿性化合物按照預設比例組合，得到堿性乙二醇組合物；將百里酚、2-苯基苯酚和吐溫20溶解在乙二醇中，得到病毒保存組合物；采集生物樣本；將生物樣本與堿性乙二醇組合物組合后置于病毒保存組合物中進行保存，得到第一反應混合物；將反應混合物中的病毒核酸從病毒包膜中釋放出來進行逆轉錄結合聚合酶鏈反應，同時通過核衣殼基因探針進行檢測，得到第一病毒檢測結果，本法發明無需對病毒核酸純化，在不到1小時的時間內通過逆轉錄結合聚合酶鏈反應檢測病毒核酸，解決了現有的病毒核酸檢測方法的檢測效率較低的問題。檢測方法的檢測效率較低的問題。檢測方法的檢測效率較低的問題。
