一種核酸等溫擴增定量檢測板的制作方法
1.本發明屬于快速檢測技術領域，具體涉及一種核酸等溫擴增定量檢測板。
2.發明背景
3.目前，血制品的應用一直是臨床不可替代的方法之一，如人血白蛋白、人免疫球蛋白、靜注人免疫球蛋白(ph4)等。而血制品易受到細菌、病毒等病原體污染，這會帶來血源性疾病傳播的問題，進而造成失敗，甚至更嚴重的后果。因此血制品的病原體污染情況越來越受到人們的重視。然而，血制品中病原微生物的檢測一直依賴于傳統的培養方法，主要是免疫檢測法和分子檢測法。免疫學檢測還是以人工操作為主，因此易發生污染現象，這樣就不可避免的會對檢測結果產生影響。聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction，pcr)檢測技術是分子檢測領域常用的手段，但是依賴于pcr儀，且擴增時間長，耗時耗力。而核酸等溫擴增技術，例如，環介導等溫擴增技術(loop-mediated isothermal amplification，lamp)在擴增時需要4～6條引物，引物間容易發生交互作用產生假陽性結果，這些都不利于lamp的進一步推廣。上述方法操作繁瑣、費時費力，受制于實驗室的環境限制，難以滿足當下快速檢測需求。
技術實現要素：
4.為了克服現有技術的不足，本發明的目的是提供一種快速便捷的核酸等溫擴增定量檢測板，不用借助大型的儀器設備，成本低，靈敏度高，易于操作，以提高檢測的效率。
5.為解決上述問題，本發明采用如下技術方案：一種核酸等溫擴增定量檢測板，其特征在于，包括光電傳感器、接收光電傳感器信號的控制面板、與控制面板連接的電子加熱板、用于設置參數的人機交互系統、腔體、以及為整個檢測板供電的電源；所述腔體包括對照腔、檢測腔、對照組熒光液儲存腔和實驗組熒光液儲存腔，所述對照腔與對照組熒光液儲存腔之間、檢測腔與實驗組熒光液儲存腔之間分別通過管路連接，所述管路上設有控制其打開和中斷的開關，所述開關處于關閉狀態、對照組熒光液儲存腔和實驗組熒光液儲存腔為密封真空狀態；所述電子加熱板通過滑軌活動設在對照組熒光液儲存腔和實驗組熒光液儲存腔的上方，所述人機交互系統與控制面板連接。
6.優選的，還包括進樣滴管。
7.優選的，所述光電傳感器包括激光發射裝置和激光接收裝置。
8.優選的，所述激光發射裝置為光電二極管。
9.優選的，所述對照腔和檢測腔預埋有凍干擴增混合試劑。
10.優選的，所述對照組熒光液儲存腔和實驗組熒光液儲存腔底部設置有熒光染料sybr green i。
11.優選的，樣品所述檢測腔中的反應時間為30min，反應溫度為63℃，反應完成后打開開關檢測腔中的液體進入實驗組熒光液儲存腔，反應時間為1min。
12.優選的，所述對照腔和檢測腔上方的腔口處設有用于密封的密封膜。
13.本發明的有益效果在于：
14.本發明通過電子加熱板提供恒溫環境以支撐樣品通過分子等溫擴增技術在30min內實現指數擴增來達到檢測目的，并通過與熒光指示劑結合可以達到實時定量檢測，大大提高了檢測效率。
附圖說明
15.圖1為核酸等溫擴增定量檢測板的結構示意圖；
16.圖2為進樣滴管的外部結構示意圖；
17.其中：1、電子加熱板；2、控制面板；3、光電傳感器；4、人機交互系統；5、對照腔；6、檢測腔；7、對照組熒光液儲存腔；8、實驗組熒光液儲存腔；9、密封膜；10、進樣滴管；11、管路；12、激光發射裝置；13、激光接收裝置；14、電源；15、滑軌；16、開關。
具體實施方式
18.下面結合實施例對本技術作進一步的詳細說明。可以理解的是，此處所描述的具體實施例僅僅用于解釋相關發明，而非對該發明的限定。
19.實施例：
20.請一并參閱圖1和圖2，一種核酸等溫擴增檢測板，包括：電子加熱板1、控制面板2、光電傳感器3、人機交互系統4、對照腔5、檢測腔6、對照組熒光液儲存腔7、實驗組熒光液儲存腔8、密封膜9、進樣滴管10、管路11、激光發射裝置12、激光接收裝置13、電源14、滑軌15、開關16。
21.電子加熱板1，為一個長度3cm，寬度3cm的正方形結構，采用半導體加熱方式，溫控準確性高，確保核酸檢測方法正常運行。由于半導體單價低，簡單易得，因此有利于快速檢測板的推廣與應用。
22.光電傳感器3包括激光發射裝置12和激光接收裝置13，激光發射裝置12發射497nm的光，激光接收裝置13用于接收520nm的光信號。兩個裝置置于實驗組熒光液儲存腔8的上方。光電傳感器3與控制面板2之間由一根導線相接，人機交互系統4用于精密的控制溫度，光電傳感器3將光信號傳輸至控制面板2，控制面板2中被植入熒光曲線與程序算法，通過計算顯示最終的判讀結果。
23.激光發射裝置12：通過光電二極管激發光源來提供光源。
24.電源14為整個檢測板供電，采用紐扣電池提供電量，正負極各自連到控制面板2上。
25.檢測腔6底部中預埋有凍干擴增混合試劑。
26.設置一個對照腔5，作為實驗的陰性對照，相同的，底部預埋有凍干擴增混合試劑。
27.對照組熒光液儲存腔7和實驗組熒光液儲存腔8底部置有熒光染料sybr green i。
28.對照組熒光液儲存腔7和實驗組熒光液儲存腔8為密封真空狀態，通過壓力差，確保檢測腔與對照腔中的液體反應完后順利進入熒光液儲存腔。
29.開關16，設在管路11上，檢測腔6與對照腔5反應完后脫落，打開開關由于壓力差，液體可以從檢測腔6順勢流入熒光腔。
30.密封膜9起到密封試劑的作用，防止在反應過程中造成污染和液體的蒸發。
31.本發明中，電子加熱板1為一個長度3cm，寬度3cm的正方形結構，在電子加熱板的
左側為對照腔5和檢測腔6，底部預埋有凍干擴增混合試劑，右邊為對照組熒光液儲存腔7和實驗組熒光液儲存腔8，放置有熒光染料sybr green i。兩個腔體獨立的，且由一個管路11相連，管路11由開關16控制，當完成上一指令后，管路才可連通進入下一腔體，這些均由控制面板2進行控制，控制面板2可以對每一個腔體進行時間和溫度的精準控制。
32.所述的核酸檢測法采用的是跨越式滾環等溫擴增技術(srca)，是將凍干擴增混合試劑添加到試劑板的凹槽中進行反應。
33.所述的跨越式滾環等溫擴增技術(srca)可以在bst dna聚合酶的催化下，僅需要設計一對引物，就可以完成核酸體外等溫擴增。
34.所述的核酸檢測方法，反應時間為30min，反應溫度為63℃，反應完成后進入熒光液儲存腔，反應時間為1min。
35.所述的sybr熒光染料，是一種非飽和菁類熒光素，會產生微弱的橙熒光。在srca的擴增產物中，加入過量的sybr熒光染料，熒光染料sybr green i可以非特異性地與雙鏈dna的小溝部位結合，并通過激發光源的激發來發射熒光信號，而未與dna鏈結合的sybr染料分子不會發射熒光信號，從而保證熒光信號的增加與pcr產物的增加是成相關性的。
36.所述的定量檢測，是將sybr熒光染料與dna雙鏈結合后釋放的熒光信號強度與dna的濃度做成曲線，將其編為指令植入檢測板中，當反應結束，顯示器中可以同時顯示熒光信號強度和通過植入的熒光曲線計算得出的dna初始濃度，達到定量檢測。
37.所述的檢測板的左側的對照腔5和檢測腔6為樣品加樣口，上方有密封膜9，在進行加樣后，需要將密封膜蓋封住，防止污染。
38.所述的檢測板為防止反應過程中被污染和擴增產生的氣溶膠擴散，只在對照腔5和檢測腔6有加樣口，對照組熒光液儲存腔7和實驗組熒光液儲存腔8與外界無接觸狀態，人機交互系統4上顯示結果后直接將檢測板處理掉，避免因開蓋加樣造成二次污染。
39.所述的滴管10是一個微量定量進樣滴管，上部是一個水滴狀的不規則圓形，下面是一個長約2cm的柱狀空心管，操作時通過捏上部的水滴狀管吸取液體，吸取量為1μl。
40.下面結合具體的實施例對核酸等溫擴增定量檢測板裝置的操作進行說明：
41.本具體的實施例中使用的控制菌為金黃葡萄球菌。
42.具體步驟如下：
43.1、采用fema基因來設計srca特異性引物，引物序列如下：
44.正向引物：5'-agagtttggtgcatttacag-3'
45.反向引物：5'-agtggccaacagtttgcgtg-3'
46.2、反應所用凍干擴增混合試劑中各成分及使用濃度
[0047][0048]
3、用進樣滴管10吸取提取的dna樣品1μl，加入檢測腔6內，同法操作將對照樣本(無菌水)從對照腔5加入，立即用密封膜9封住檢測腔6和對照腔5；在控制面板2上設置溫度(63℃)和時間(30min)，反應完后打開開關16，使對照腔5和檢測腔6中的樣液分別通過各自的管路流入對照組熒光液儲存腔7和實驗組熒光液儲存腔8，靜待1min后，觀看顯示器上通過計算得出的dna濃度，即為樣品的初始dna量。
[0049]
根據本發明提供的具體實施例，本發明公開了以下技術效果：
[0050]
本發明提供了一種核酸等溫定量擴增檢測板，由上述方案可知，本發明通過提供一個等溫的環境，就可以在短時間內對dna進行定量檢測，無需借助大型儀器，避免分子檢測過程中開蓋跑膠的復雜和氣溶膠的污染，也不用受限于免疫檢測過程中的抗原與抗體的冗長的制備過程，大大提高了檢測效率。
[0051]
以上描述僅為本技術的較佳實施例以及對所運用技術原理的說明。本領域技術人員應當理解，本技術中所涉及的發明范圍，并不限于上述技術特征的特定組合而成的技術方案，同時也應涵蓋在不脫離所述發明構思的情況下，由上述技術特征或其等同特征進行任意組合而形成的其它技術方案。例如上述特征與本技術中公開的(但不限于)具有類似功能的技術特征進行互相替換而形成的技術方案。
技術特征：
1.一種核酸等溫擴增定量檢測板，其特征在于，包括光電傳感器(3)、接收光電傳感器(3)信號的控制面板(2)、與控制面板連接的電子加熱板(1)、用于設置參數的人機交互系統(4)、腔體、以及為整個檢測板供電的電源(14)；所述腔體包括對照腔(5)、檢測腔(6)、對照組熒光液儲存腔(7)和實驗組熒光液儲存腔(8)，所述對照腔(5)與對照組熒光液儲存腔(7)之間、檢測腔(6)與實驗組熒光液儲存腔(8)之間分別通過管路(11)連接，所述管路(11)上設有控制其打開和中斷的開關(16)，所述開關處于關閉狀態、對照組熒光液儲存腔(7)和實驗組熒光液儲存腔(8)為密封真空狀態；所述電子加熱板(1)通過滑軌(15)活動設在對照組熒光液儲存腔(7)和實驗組熒光液儲存腔(8)的上方，所述人機交互系統(4)與控制面板(2)連接。2.根據權利要求1所述的一種核酸等溫擴增定量檢測板，其特征在于：還包括進樣滴管(10)。3.根據權利要求1所述的一種核酸等溫擴增定量檢測板，其特征在于：所述光電傳感器(3)包括激光發射裝置(12)和激光接收裝置(13)。4.根據權利要求3所述的一種核酸等溫擴增定量檢測板，其特征在于：所述激光發射裝置(12)為光電二極管。5.根據權利要求1所述的一種核酸等溫擴增定量檢測板，其特征在于：所述對照腔(5)和檢測腔(6)預埋有凍干擴增混合試劑。6.根據權利要求1所述的一種核酸等溫擴增定量檢測板，其特征在于：所述對照組熒光液儲存腔(7)和實驗組熒光液儲存腔(8)底部設置有熒光染料sybr greeni。7.根據權利要求1所述的一種核酸等溫擴增定量檢測板，其特征在于：樣品所述檢測腔(6)中的反應時間為30min，反應溫度為63℃，反應完成后打開開關檢測腔(6)中的液體進入實驗組熒光液儲存腔(8)，反應時間為1min。8.根據權利要求1所述的一種核酸等溫擴增定量檢測板，其特征在于：所述對照腔(5)和檢測腔(6)上方的腔口處設有用于密封的密封膜(9)。
技術總結
本發明提供了一種核酸等溫擴增定量檢測板，所述腔體包括對照腔、檢測腔、對照組熒光液儲存腔和實驗組熒光液儲存腔，所述對照腔與對照組熒光液儲存腔之間、檢測腔與實驗組熒光液儲存腔之間分別通過管路連接，所述管路上設有控制其打開和中斷的開關，所述開關處于關閉狀態、對照組熒光液儲存腔和實驗組熒光液儲存腔為密封真空狀態；所述電子加熱板通過滑軌活動設在對照組熒光液儲存腔和實驗組熒光液儲存腔的上方。本發明公開的檢測板裝置可以對血制品中的病原微生物進行快速實時的檢測，既滿足了企業大規模樣本快速檢測，同時也確保了結果準確度，方便又快捷。方便又快捷。
