一種肺癌的聯(lián)合用藥的制作方法
1.本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，具體涉及一種肺癌的聯(lián)合用藥物，即芳香烴受體抑制劑sr1和阿法替尼聯(lián)合使用肺癌。
技術(shù)背景
2.肺癌是全球常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率均高居惡性腫瘤榜首，嚴(yán)重危害人類的生命健康。在我國(guó)，肺癌的發(fā)病人數(shù)也在逐年增加。根據(jù)病理類型，肺癌可分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌。非小細(xì)胞肺癌約占肺癌總數(shù)的85%以上，是最常見的肺癌類型。化療是此類肺癌的常用手段，以表皮生長(zhǎng)因子受體（egfr）、間變性淋巴瘤激酶（alk）和ros1激酶為代表的靶向已用于臨床。阿法替尼是egfr突變陽性晚期非小細(xì)胞肺癌的一線藥物。然而，腫瘤耐藥的存在，導(dǎo)致許多患者化療后很快復(fù)發(fā)或者進(jìn)展，限制了效果，成為肺癌臨床的瓶頸，需要盡快突破。
3.芳香烴受體(ahr)是一種配體依賴性的轉(zhuǎn)錄因子，當(dāng)受到內(nèi)源性和外源性化合物的激活后，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的芳香烴受體產(chǎn)生變構(gòu)進(jìn)入細(xì)胞核，最終結(jié)合到dna的特定序列上，激活或抑制一系列基因的表達(dá)，進(jìn)而產(chǎn)生多種生物學(xué)和毒理學(xué)效應(yīng)。芳香烴受體的配體廣泛，包括花生四烯酸，犬尿氨酸等內(nèi)源性配體。芳香烴受體與配體結(jié)合并被其激活后，與芳香烴受體核轉(zhuǎn)位因子形成二聚體，進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮作用，在調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡方面起著重要作用。芳香烴受體在多種腫瘤里高表達(dá)，被認(rèn)為是腫瘤的潛在靶點(diǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
4.本發(fā)明目的在于提供一種合用芳香烴受體抑制劑與阿法替尼，以克服對(duì)阿法替尼耐藥問題。
5.本發(fā)明的再一目的在于：提供上述本發(fā)明目的通過以下方案實(shí)現(xiàn)：一種合用芳香烴受體抑制劑和阿法替尼，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。
6.申請(qǐng)人科研中發(fā)現(xiàn)：芳香烴受體抑制劑sr1（stem regenin 1）與阿法替尼聯(lián)用可增強(qiáng)藥物敏感性，提高臨床療效。尤其是sr1與阿法替尼聯(lián)合使用對(duì)人原發(fā)性肺癌細(xì)胞系a549發(fā)揮了協(xié)同抑制作用。
7.阿法替尼是表皮生長(zhǎng)因子受體突變陽性晚期非小細(xì)胞肺癌的一線藥物。
8.所述芳香烴受體抑制劑為stem regenin 1（sr1）。
9.所述腫瘤細(xì)胞為肺癌細(xì)胞。
10.所述sr1與阿法替尼的質(zhì)量比為1：2。
11.本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明還提供了一種合用芳香烴受體抑制劑sr1和阿法替尼在肺癌藥物中的應(yīng)用。
12.本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)，sr1與阿法替尼聯(lián)合使用對(duì)人原發(fā)性肺癌細(xì)胞系a549發(fā)揮了協(xié)
同抑制作用。因此，阿法替尼和芳香烴受體抑制劑sr1聯(lián)合使用在肺癌的藥物中具有廣闊的應(yīng)用前景。
附圖說明
13.附圖1 給藥7天后各組對(duì)a549細(xì)胞的增殖抑制率；附圖2 給藥7天后各組對(duì)a549細(xì)胞的克隆形成能力影響。
具體實(shí)施方式
14.本發(fā)明通過下面的實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)解釋，但不僅限于此。
15.sr1與阿法替尼聯(lián)合使用對(duì)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：細(xì)胞來源與培養(yǎng)：人原發(fā)性肺癌細(xì)胞系a549購于上海中科院細(xì)胞庫。細(xì)胞采用含10%胎牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的dmem培養(yǎng)基培養(yǎng)于37℃、5%co2培養(yǎng)箱中。實(shí)驗(yàn)方法：1. cck8實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)sr1與阿法替尼聯(lián)合使用對(duì)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
16.具體操作如下：a549細(xì)胞以1000個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種于96孔板中培養(yǎng)，將細(xì)胞分為4組：1）單獨(dú)使用阿法替尼組，阿法替尼的劑量為10μm；2）單獨(dú)使用sr1組，劑量為5μm；3）阿法替尼和sr1聯(lián)合使用組，阿法替尼的劑量為10μm，sr1的劑量為5μm；4）對(duì)照組:不使用阿法替尼和sr1，即為不加藥的dmem培養(yǎng)基組。
17.各組培養(yǎng)基每48小時(shí)更換一次，培養(yǎng)7天后使用酶標(biāo)儀檢測(cè)，結(jié)果如圖1所示，單獨(dú)使用阿法替尼和芳香烴受體抑制劑sr1均能在一定程度上抑制肺癌細(xì)胞的增殖，將10μm阿法替尼和5μm sr1聯(lián)合使用對(duì)a549細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用均顯著增強(qiáng)，取得了協(xié)同增效的效果。
18.將10μm 阿法替尼和5μm sr1聯(lián)合使用對(duì)肺癌細(xì)胞（a549）增殖的抑制作用最顯著，其次依序是單獨(dú)使用阿法替尼、單獨(dú)使用芳香烴受體抑制劑sr1，對(duì)照組無抑制作用。
[0019] 2. 克隆形成實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)sr1與阿法替尼聯(lián)合使用對(duì)肺癌生長(zhǎng)細(xì)胞的影響。
[0020]
具體操作如下：a549細(xì)胞以500個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種于96孔板中培養(yǎng)，將細(xì)胞分為4組：1）單獨(dú)使用阿法替尼組，阿法替尼的劑量為10μm；2）單獨(dú)使用sr1組，sr1的劑量為5μm；3）阿法替尼和sr1聯(lián)合使用組，阿法替尼的劑量為10μm，sr1的劑量為5μm；4）對(duì)照組為不加藥的dmem培養(yǎng)基組。
[0021]
各組培養(yǎng)基每48小時(shí)更換一次，培養(yǎng)14天后固定細(xì)胞并染，拍照并拍攝克隆數(shù)目。
[0022]
結(jié)果如圖2所示，單獨(dú)使用阿法替尼和芳香烴受體抑制劑sr1均能在一定程度上抑制肺癌細(xì)胞的克隆形成能力，將10μm阿法替尼和5μm sr1聯(lián)合使用更加抑制了a549細(xì)胞生長(zhǎng)的克隆形成能力。
[0023]
將10μm 阿法替尼和5μm sr1聯(lián)合使用對(duì)肺癌細(xì)胞（a549）增殖的抑制作用最顯著，其次依序是單獨(dú)使用阿法替尼、單獨(dú)使用芳香烴受體抑制劑sr1，對(duì)照組無抑制作用。與方法1的結(jié)論一致。
[0024]
從方法1和2可以得出：?jiǎn)为?dú)使用阿法替尼和芳香烴受體抑制劑sr1均能在一定程度上抑制肺癌細(xì)胞的增殖，將10μm 阿法替尼和5μm sr1聯(lián)合使用對(duì)肺癌細(xì)胞增殖的抑制作用均顯著增強(qiáng)，取得了協(xié)同增效的效果。
[0025]
綜上，本發(fā)明提供了一種肺癌的聯(lián)合用藥物。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)，芳香烴受體抑制劑sr1與阿法替尼聯(lián)合使用對(duì)人原發(fā)性肺癌細(xì)胞系的增殖發(fā)揮了協(xié)同抑制作用。因此，阿法替尼和芳香烴受體抑制劑sr1聯(lián)合使用在肺癌的藥物中具有廣闊的應(yīng)用前景。
技術(shù)特征：
1.一種合用芳香烴受體抑制劑和阿法替尼，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述合用芳香烴受體抑制劑和阿法替尼抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，其特征在于：所述芳香烴受體抑制劑為stem regenin 1。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述合用芳香烴受體抑制劑和阿法替尼抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，其特征在于：所述腫瘤細(xì)胞為肺癌細(xì)胞。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述合用芳香烴受體抑制劑和阿法替尼抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，其特征在于：所述sr1與阿法替尼的質(zhì)量比為1：2。5.一種合用芳香烴受體抑制劑sr1和阿法替尼肺癌藥物中的應(yīng)用。
技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種阿法替尼是表皮生長(zhǎng)因子受體突變陽性晚期非小細(xì)胞肺癌的一線藥物。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，SR1與阿法替尼聯(lián)合用藥對(duì)肺癌細(xì)胞的增殖發(fā)揮了協(xié)同抑制作用，為臨床肺癌提供了一種聯(lián)合用藥方法。肺癌提供了一種聯(lián)合用藥方法。
技術(shù)研發(fā)人員：崔大祥 崔明青
受保護(hù)的技術(shù)使用者：上海納米技術(shù)及應(yīng)用國(guó)家工程研究中心有限公司
技術(shù)研發(fā)日：2022.09.30
技術(shù)公布日：2022/11/25
