一種異石膽酸的用途
1.本發明涉及一種已知化合物―異石膽酸的用途。
背景技術：
2.膽汁酸是膽汁里的一個有效成分，是參與膽汁消化功能的重要成分之一。其含量變化在肝臟病診斷中具有重要的參考價值，已公開的文獻中披露膽汁酸具有抑制腫瘤的效果。另，中國發明專利申請202111019726.6公開膽石酸具有抗金葡菌mrsa和mssa、大腸埃希菌esbls+、大腸埃希菌esbls-和銅綠假單胞菌的抑菌活性。異石酸分子式為c
24h40
o3,結構式如下：
3.
技術實現要素：
4.本發明涉及異石膽酸的一種用途，即在制備抗緩癥鏈球菌atcc49456藥物中的應用。
5.緩癥鏈球菌屬于α-溶血性鏈球菌(亦稱甲型溶血性鏈球菌)，通常是人體口腔、消化道、生殖道等部位的正常菌之一，該菌是一種條件致病菌，可致中毒性休克綜合征，亞急性心內膜炎，前列腺炎等，此外，還可致肺炎、心包炎、腹膜炎、唾腺炎、口面部感染、牙源性感染、中耳炎、鼻竇炎等。據報道在發病豬體內分離到此病原菌，并且導致仔豬發病和死亡嚴重，說明緩癥鏈球菌對豬也是有致病性。在兒科常用抗生素中，緩癥鏈球菌對氨曲南、頭孢曲松、哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉維酸鉀均有不同程度耐藥，耐藥率達到42.3％-48.1％。這些抗生素目前仍然是兒童肺炎的常用藥物。細菌耐藥是全球問題，但相應的抗生素的開發則進展緩慢，形式非常嚴峻，因此迫切需要一種新的抗菌藥物或抗菌產品來抑制細菌。
6.本發明首次發現了異石膽酸具有抑制緩癥鏈球菌atcc49456的活性，實驗表明異石膽酸具有良好的抑制緩癥鏈球菌atcc49456的活性，是一種潛在的可代替現有抗生素抑制緩癥鏈球菌atcc49456的藥物。
附圖說明
7.圖1：異石膽酸濃度與緩癥鏈球菌生長抑制率關系圖。
8.圖2：氯霉素濃度與緩癥鏈球菌生長抑制率關系圖。
具體實施方式
9.本發明以下結合相關實驗詳細說明，實驗中采用微量肉湯二倍稀釋法對異石膽酸進行了體外抗菌活性測試，考察其對緩癥鏈球菌的抗菌活性，以對照品氯霉素進行實驗系統的評價。
10.(一)供試品及對照
11.1.1供試品
12.名稱：異石膽酸，市售商品
13.供試品臨用前用乙醇配制成最大濃度16.67mg/ml，依次對倍稀釋。
14.1.2對照品
15.名稱：氯霉素，市售品。
16.(二)測試菌株及其培養方法
17.2.1菌株：緩癥鏈球菌atcc49456
18.2.2菌種來源：購于北京百歐博偉生物技術有限公司。
19.2.3培養條件：todd-hewitt broth，37℃孵育24h-48h。
20.2.4菌種開啟接種并培養
21.用75％酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜內使用尖嘴鉗去除塑料蓋及鋁蓋。緩慢開啟膠塞，用75％酒精棉消毒瓶口部分，使用無菌吸管注入0.5ml液體培養基復溶凍干粉末，將懸液接種在培養基上，37℃培養24小時后，挑取單個菌落于液體培養基中在相同的培養條件下培養增菌。
22.2.5菌液工作液的準備
23.當od600值達到0.5左右(約108cfu/ml)，經thb肉湯梯度稀釋(0、10、100、1000、10000、100000、10000倍)后，取100μl菌懸液接種于固體培養基上，培養24h后計數活菌數，計算菌懸液濃度，再將此混懸菌液進行稀釋，使菌懸液最終濃度約為2
×
106cfu/ml。菌種操作均在無菌條件下進行，實驗完畢，所有耗材經滅菌再做丟棄處理。
24.(三)抑制50％受試菌所需最低抑菌濃度的測定(mic50)
25.3.1測試方法：采取微量肉湯稀釋法，進行mic50的測定。
26.實驗分為陽性對照組(即不含藥物的菌懸液)、陰性對照組(含溶媒乙醇的培養基)和實驗組(含不同濃度的異石膽酸菌懸液)。以上各組均設置3個平行組。將濃度為100μg/ml的異石膽酸實驗液按對倍稀釋溶于液體培養基中，使其終濃度為100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml、1.5625μg/ml、0μg/ml。濃度為2
×
106cfu
·
ml-1
菌懸液與各組藥液按比例1∶1各100μl，分別接種于無菌96孔板中，使菌懸液的終濃度為1
×
106cfu/ml(含105cfu/孔)，置于適當的培養條件下培養20h。同時設置對照品氯霉素，使其終濃度分別為32μg/ml、16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml、0μg/ml。培養結束后，在黑背景下進行肉眼觀察，平皿內未見細菌生長的最低藥物濃度即為異石膽酸的最低抑菌濃度(mic)。所有菌種的mic測定實驗重復3次。懸浮菌體測od600值，不同濃度的供試品及對照抑菌率的計算方法：抑菌率(％)＝1-(供試品od值—陰性對照od值)/(陽性對照od值—陰性對照od值)
×
100％。通過曲線擬合得函數計算而得mic50。
27.3.2結果判斷
28.本次試驗結果見表1，抑制率圖見圖1。當陽性對照孔(即不含藥物)內細菌明顯生
長，試驗才有意義。結果顯示，陽性對照孔(即不含藥物)內細菌正常生長，溶媒對照培養基孔無菌生長。對照品氯霉素對緩癥鏈球菌的mic值為4μg/ml，參見表2和圖2，符合美國臨床實驗室標準化委員會(national committee for clinical library standardization,nccls)2001年的《抗微生物藥物敏感試驗的執行標準：第十一版信息增刊》m100-s11中氯霉素對緩癥鏈球菌≤4μg/ml的標準，說明本實驗方法是可靠的。
29.統計結果表明：異石膽酸對受試的緩癥鏈球菌的mic50為12.52μg/ml。綜上所述，異石膽酸有良好的抑制緩癥鏈球菌活性。
30.表1：不同濃度異石膽酸對緩癥鏈球菌生長影響的吸光值測定
[0031][0032]
表2：不同濃度氯霉素對緩癥鏈球菌生長影響的吸光值測定
[0033]
技術特征：
1.異石膽酸在制備抗緩癥鏈球菌atcc49456藥物中的應用。
技術總結
本發明公開一種已知化合物―異石膽酸的用途，即在制備抗緩癥鏈球菌ATCC49456藥物中的應用。本發明首次發現了異石膽酸具有抑制緩癥鏈球菌ATCC49456的活性，實驗表明異石膽酸具有良好的抑制緩癥鏈球菌ATCC49456的活性，是一種潛在的可代替現有抗生素抑制緩癥鏈球菌ATCC49456的藥物。菌ATCC49456的藥物。
技術研發人員：王玉桂 王帥 鄒揚 郭愛疆 郭小臘
受保護的技術使用者：中國農業科學院蘭州獸醫研究所
技術研發日：2022.08.11
技術公布日：2022/11/25
