本文作者:kaifamei

一種血液腫瘤測定試劑盒以及檢測方法與流程

更新時間:2025-12-25 07:55:26 0條評論

一種血液腫瘤測定試劑盒以及檢測方法與流程



1.本發明涉及醫療檢測技術領域,更具體地說,涉及一種血液腫瘤測定試劑盒以及檢測方法。


背景技術:

2.惡性腫瘤是我國發病率和死亡率較高的疾病。經過統計,我國惡性腫瘤每年發病率約為273.36/10萬,死亡率約為164.73/10萬。白血病作為血液腫瘤中一種常見類型,是一種預后較差、死亡率較高的造血系統惡性腫瘤,近年來我國白血病發病率呈上升趨勢。
3.在腫瘤的發生發展過程中細胞凋亡的減弱都起著非常重要的作用。多種凋亡相關分子調控了細胞凋亡的過程,抗凋亡與促凋亡因子的相對水平則決定了細胞的命運(生存或是死亡)。細胞凋亡是指細胞在環境變化后通過程序性化控制進行細胞死亡的一種方式。在免疫反應、發育、生殖細胞成熟等許多生理活動過程中起著關鍵性的作用。研究證明bcl-2蛋白質家族的改變與腫瘤的發生密切相關,其中bcl-2基因的重排就直接導致了某些淋巴瘤的發生,很多實體瘤的發生也與bcl-2家族基因的突變有一定的關系。因此,可通過檢測bcl-2蛋白質家族在白血病細胞系中的表達水平來判斷bcl-2蛋白質家族與抗腫瘤藥物敏感性是否存在相關性,這就需要用到測定試劑盒。
4.現有的試劑盒功能較為單一,只能夠對蛋白質測定試劑進行存放,在蛋白質測定過程中,需要人工使試管內部溶液搖勻,操作費時費力,使用很不方便,而且容易出現溶液混合不均勻的情況,使蛋白質的測定誤差較大。
5.針對上述技術問題,現有專利公告號:cn216944196u,公開了一種蛋白質測定試劑盒,通過將試管固定在試管固定架的內部,隨后啟動電機,電機的輸出軸通過帶動轉軸使凸輪旋轉,從而使凸輪擠壓試管固定架側面的側板,試管固定架受力向一側運動使復位彈簧壓縮,隨著凸輪的旋轉,試管固定架的一側不再受到凸輪的擠壓,在復位彈簧的作用下,試管固定架復位,如此循環,使試管固定架在第二容腔的內部快速晃動,使試管內部的溶液快速混合。
6.上述專利雖然能夠加快溶液的混合速度,但是,通過電機帶動凸輪旋轉來帶動試管晃動的方式,溶液只是在試管內來回晃動,混合效果較差,且在長期使用后,凸輪與試管固定架之間會發生磨損,不僅降低試管固定連架的晃動幅度,還降低試管固定架與凸輪的使用壽命。


技術實現要素:

7.本發明的目的在于提供一種血液腫瘤測定試劑盒以及檢測方法,以解決上述背景技術中提出的問題。
8.為解決上述問題,本發明采用如下的技術方案。
9.一種血液腫瘤測定試劑盒,包括試劑盒本體,試劑盒本體內部左右側壁靠近下端前側固定連接有底板,底板下方的試劑盒本體內底面固定連接有蓄電池,底板后側面固定
連接有第二隔板,第二隔板與試劑盒本體后側面直接滑動插接有廢液槽,底板上端面左右對稱固定連接有l形結構的第一隔板,試劑盒本體內部前側上端固定連接有管架,管架左右側兩側設有試劑槽,底板上方設有離心機構;離心機構包括固定連接在底板上端面靠近后側中心位置的盤式電機,盤式電機的輸出軸端部固定連接有驅動軸,驅動軸上端固定連接有第一圓盤,第一圓盤上端面靠近外沿位置環形等距開設有四個第一插孔。
10.進一步的,第一圓盤內部中心位置對應四個第一插孔開設有四個相互交叉呈十字形結構的第一圓孔,且四個第一插孔分別與對應位置的第一插孔連通,第一圓孔內滑動連接有第一活動塊,第一活動塊靠近對應位置第一插孔的一端均固定連接有圓弧形結構的夾板,第一圓孔內側面對應第一活動塊固定連接有第一夾板。
11.進一步的,第一活動塊環形外側面靠近第一插孔的一側滑動套設有第一固定套環,且第一固定套環環形外側面與第一圓孔內壁固定連接,第一活動塊環形外側面遠離第一固定套環的一側固定套設有第一活動套環,第一活動套環與第一固定套環之間通過彈簧彈性連接。
12.進一步的,四個第一圓孔的交叉位置處設有第一定位銷,第一定位銷上部呈錐形結構,且第一定位銷下部呈螺栓結構,第一圓盤上端面中心位置開設有供頂定位銷插入的第一銷孔,驅動軸上端面中心位置開設有與第一定位銷下部螺栓結構匹配的第一螺孔。
13.進一步的,第一圓盤環形外側面均勻固定連接有一圈輪齒,第一圓盤左右對稱設有第二圓盤,第二圓盤的環形外側面均勻固定連接有一圈與第一圓盤環形外側面輪齒嚙合的輪齒,第二圓盤下端面均固定連接有轉軸,轉軸下端與第一隔板上端面轉動連接;第二圓盤內部中心位置對應四個第二插孔開設有四個相互交叉呈十字形結構的第二圓孔,且四個第二插孔分別與對應位置的第二插孔連通,第二圓孔內滑動連接有第二活動塊,第二活動塊靠近對應位置第二插孔的一端均固定連接有圓弧形結構的夾板,第二圓孔內側面對應第二活動塊固定連接有第二夾板。
14.進一步的,第二活動塊環形外側面靠近第二插孔的一側滑動套設有第二固定套環,且第二固定套環環形外側面與第二圓孔內壁固定連接,第二活動塊環形外側面遠離第二固定套環的一側固定套設有第二活動套環,第二活動套環與第二固定套環之間通過彈簧彈性連接。
15.進一步的,四個第二圓孔的交叉位置處設有第二定位銷,第二定位銷上部呈錐形結構,且第二定位銷下部呈螺栓結構,第二圓盤上端面中心位置開設有供頂定位銷插入的第二銷孔,驅動軸上端面中心位置開設有與第二定位銷下部螺栓結構匹配的第二螺孔。
16.進一步的,盤式電機的輸出軸端部環形外側面固定套設有主錐齒輪,主錐齒輪左右對稱嚙合有副錐齒輪,副錐齒輪相互遠離的一側均固定連接有支桿,支桿環形外側面轉動套設有l形結構的吊板,吊板的水平部分分別與第一隔板固定連接,支桿相互遠離的一端均固定連接有扇葉。
17.進一步的,兩個第一隔板與扇葉對應位置處分別開設有貫穿至試劑盒本體外側的通風口,通風口內側均開設有貫穿至試劑盒本體前側的板槽,板槽內滑動連接有擋板,擋板前側面固定連接有推板;第一隔板豎直部分的內壁與試劑盒本體相對應的內壁上均豎直等距固定連接有
三組平行的架板,架板上搭設有載板,試劑盒本體前側面對應第一隔板內側與試劑盒本體形成的矩形空間開設有槽口,槽口下端面通過合頁鉸接有封板。
18.一種血液腫瘤測定試劑盒的檢測方法,包括以下步驟:s1:使用抗凝管采集受試者外周血10ml,與等體積pbs混勻后小心加于白細胞分離液液面上,將試管置于第一插孔內并夾緊,啟動盤式電機以1500r/min離心20min,隨后吸取中間云霧狀白細胞,加pbs后3000r/min離心10min,棄上清,加pbs洗滌沉淀,將細胞懸液轉移至1.5ml ep管中,再將ep管插入第二圓盤的第二插孔內并夾緊,以3000r/min離心20min,棄上清,獲得白細胞;s2:使用抗凝管采集受試者骨髓1ml,與等體積pbs混勻后小心加于白細胞分離液液面上,將試管置于第一插孔內并夾緊,啟動盤式電機以1500r/min離心20min,吸取中間云霧狀白細胞,加pbs后3000r/min離心10min,棄上清,加pbs洗滌沉淀,將細胞懸液轉移至1.5ml ep管中,再將ep管插入第二圓盤的第二插孔內并夾緊,以3000r/min離心20min,棄上清,獲得白細胞;s3:在第一隔板內的載板上放置培養皿,通過培養皿將白血病及淋巴瘤細胞培養至對數生長期,用不同抗腫瘤藥物處理24小時至72小時不等的時間,離心,pbs重懸清洗,棄盡上清,用pi和annexin
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重懸并染,并采用流式細胞儀進行檢測細胞凋亡比例;s4:采用流式細胞儀對s1和s2中得到的白細胞進行腫瘤細胞比例檢測,如果比例達到50%-90%則通過蛋白免疫印跡技術獲得bcl-2家族蛋白表達水平,通過bcl-2家族蛋白表達水平與s3中細胞凋亡比例的對比得到抗腫瘤藥物敏感性與bcl-2蛋白質家族表達水平的相關關系。
19.相比于現有技術,本發明的優點在于:1.本方案通過將試管放入第一圓盤上的第一插孔內,在第一定位銷擰入第一螺孔內的過程中可同時帶動四個第一活動塊向外擴張,從而帶動夾板將試管夾緊,啟動盤式電機帶動第一圓盤以1500r/min的速度旋轉,試管內的溶液在離心力的作用下混合的更加均勻。
20.2.本方案通過將第一圓盤的直徑設置為第二圓盤的二倍,使得第一圓盤以1500r/min的速度旋轉時,第二圓盤能夠以3000r/min旋轉,從而保證盤式電機以恒定的輸出功率保持運行,可避免盤式電機變換功率以達到不同的轉速而導致盤式電機負荷過大,節約電能的同時延長盤式電機的壽命。
21.3.本方案可在第一隔板與試劑盒本體之間形成的矩形空腔內培養白血病及淋巴瘤細胞,當矩形空腔需要通風時,可拉動推板帶動擋板離開通風口,盤式電機工作過程中可帶動扇葉旋轉,從而對矩形空腔內部通風散熱,防止溫度過高造成培養的白血病及淋巴瘤細胞發生死亡。
附圖說明
22.圖1為本發明的整體結構立體圖;圖2為本發明試劑盒本體去蓋示意圖;圖3為本發明圖2中的試劑盒本體爆炸示意圖;圖4為本發明圖2中的圖試劑盒半剖示意圖;
圖5為本發明圖1中的a-a處剖面圖;圖6為本發明圖5中的b處放大圖;圖7為本發明圖5中的c處放大圖。
23.圖中標號說明:1、試劑盒本體;11、底板;12、蓄電池;13、第一隔板;14、盤式電機;15、驅動軸;16、轉軸;17、第二隔板;18、廢液槽;2、第一圓盤;21、第一插孔;22、第一夾板;23、第一定位銷;24、第一圓孔;25、第一活動塊;26、第一固定套環;27、第一活動套環;28、第一螺孔;29、第一銷孔;3、第二圓盤;31、第二插孔;32、第二夾板;33、第二定位銷;34、第二圓孔;35、第二活動塊;36、第二固定套環;37、第二活動套環;38、第二螺孔;39、第二銷孔;4、通風口;41、擋板;42、推板;43、封板;44、槽口;45、板槽;5、架板;51、載板;6、主錐齒輪;61、副錐齒輪;62、支桿;63、扇葉;64、吊板;7、試劑槽;8、管架。
具體實施方式
24.下面將結合本發明實施例中的附圖,對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述;顯然,所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例,而不是全部的實施例,基于本發明中的實施例,本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例,都屬于本發明保護的范圍。
25.請參閱圖1-7,一種血液腫瘤測定試劑盒,包括試劑盒本體1,試劑盒本體1內部左右側壁靠近下端前側固定連接有底板11,底板11下方的試劑盒本體1內底面固定連接有蓄電池12,底板11后側面固定連接有第二隔板17,第二隔板17與試劑盒本體1后側面直接滑動插接有廢液槽18,底板11上端面左右對稱固定連接有l形結構的第一隔板13,試劑盒本體1內部前側上端固定連接有管架8,管架8左右側兩側設有試劑槽7,底板11上方設有離心機構;離心機構包括固定連接在底板11上端面靠近后側中心位置的盤式電機14,盤式電機14的輸出軸端部固定連接有驅動軸15,驅動軸15上端固定連接有第一圓盤2,第一圓盤2上端面靠近外沿位置環形等距開設有四個第一插孔21,第一圓盤2內部中心位置對應四個第一插孔21開設有四個相互交叉呈十字形結構的第一圓孔24,且四個第一插孔21分別與對應位置的第一插孔21連通,第一圓孔24內滑動連接有第一活動塊25,第一活動塊25靠近對應位置第一插孔21的一端均固定連接有圓弧形結構的夾板,第一圓孔24內側面對應第一活動塊25固定連接有第一夾板22;第一活動塊25環形外側面靠近第一插孔21的一側滑動套設有第一固定套環26,且第一固定套環26環形外側面與第一圓孔24內壁固定連接,第一活動塊25環形外側面遠離第一固定套環26的一側固定套設有第一活動套環27,第一活動套環27與第一固定套環26之間通過彈簧彈性連接,四個第一圓孔24的交叉位置處設有第一定位銷23,第一定位銷23上部呈錐形結構,且第一定位銷23下部呈螺栓結構,第一圓盤2上端面中心位置開設有供頂定位銷插入的第一銷孔29,驅動軸15上端面中心位置開設有與第一定位銷23下部螺栓結構匹配的第一螺孔28。
26.上述方案實施時,在試劑盒本體1的左右側面轉動連接有u形結構的提柄,通過提柄可方便對試劑盒本體1進行搬運,在試劑盒本體1上端配套設有盒蓋以對試劑盒本體1內部的部件進行防護,管架8上端面前側面開設有供膠頭滴管放出的管槽,以及若干個大小不
一的圓孔,圓孔內插設有不同規格的試管、抗凝管以及ep管,需要檢測時,打開盒蓋,取出管架8上的膠頭滴管、試管以及抗凝管,使用抗凝管采集受試者外周血10ml,用膠頭滴管吸取試劑槽7內等體積的pbs試劑與受試者外周血混勻后,使用膠頭滴管小心加于盛有白細胞分離液的試管內,且外周血與pbs混合液位于白細胞分離液的液面上方,使用抗凝管采集受試者骨髓1ml,用膠頭滴管吸取試劑槽7內等體積的pbs試劑與受試者骨髓混勻后,使用膠頭滴管小心加于盛有白細胞分離液的試管內,且骨髓與pbs混合液位于白細胞分離液的液面上方,兩種試樣各兩份,隨后將四個試管分別置于第一圓盤2上的四個第一圓孔24內,旋動第一定位銷23使得第一定位銷23下部的螺栓不斷進入第一螺孔28內,第一定位銷23的錐形上部在下降過程中會同時擠壓四個第一活動塊25,第一活動塊25相互靠近的一端均呈半球形結構,從而方便將四個第一活動塊25向外推動,四個第一活動塊25向外擴張時會帶動第一活動套環27一起移動,且第一活動塊25向外擴張的同時分別帶的第一夾板22對試管進行夾緊,從而壓縮第一活動套環27與第一固定套環26之間的彈簧,避免試管在離心過程中發生混動,隨后啟動盤式電機14帶動驅動軸15旋轉,進而帶動第一圓盤2旋轉,使得第一圓盤2以1500r/min的速度旋轉,試管內的溶液在離心力的作用下混合的更加均勻。
27.作為本發明的一種實施方式,參照圖2至圖7,第一圓盤2環形外側面均勻固定連接有一圈輪齒,第一圓盤2左右對稱設有第二圓盤3,第二圓盤3的環形外側面均勻固定連接有一圈與第一圓盤2環形外側面輪齒嚙合的輪齒,第二圓盤3下端面均固定連接有轉軸16,轉軸16下端與第一隔板13上端面轉動連接,第二圓盤3內部中心位置對應四個第二插孔31開設有四個相互交叉呈十字形結構的第二圓孔34,且四個第二插孔31分別與對應位置的第二插孔31連通,第二圓孔34內滑動連接有第二活動塊35,第二活動塊35靠近對應位置第二插孔31的一端均固定連接有圓弧形結構的夾板,第二圓孔34內側面對應第二活動塊35固定連接有第二夾板32;第二活動塊35環形外側面靠近第二插孔31的一側滑動套設有第二固定套環36,且第二固定套環36環形外側面與第二圓孔34內壁固定連接,第二活動塊35環形外側面遠離第二固定套環36的一側固定套設有第二活動套環37,第二活動套環37與第二固定套環36之間通過彈簧彈性連接,四個第二圓孔34的交叉位置處設有第二定位銷33,第二定位銷33上部呈錐形結構,且第二定位銷33下部呈螺栓結構,第二圓盤3上端面中心位置開設有供頂定位銷插入的第二銷孔39,驅動軸15上端面中心位置開設有與第二定位銷33下部螺栓結構匹配的第二螺孔38。
28.基于上述實施例,本方案實施時,待第一圓盤2以1500r/min的速度旋轉20min后關閉盤式電機14,旋出第一定位銷23,使得四個第一活動塊25失去限位,四個第一活動塊25在彈簧的作用下發生回彈,從而帶動第一活動塊25端部的第一夾板22回彈,使得試管松弛,進而方便取出試管,使用膠頭滴管吸取含有外周血的試管內溶液中間云霧狀白細胞至新的試管內,在新的試管內加pbs后,將新的試管置于左側第二圓盤3的第二插孔31內,使用膠頭滴管吸取含有骨髓的試管內的溶液中間云霧狀白細胞至新的試管內,在新的試管內加pbs后,將新的試管置于右側第二圓盤3上的第二插孔31內,隨后分別將第二定位銷33擰入對應位置轉軸16上端的第二螺孔38內,同理,第二定位銷33擰入第二螺孔38的過程中會帶動四個第二活動塊35向外擴張,從而帶動第二活動塊35端部的第二夾板32將試管夾緊,防止試管在離心的過程中發生晃動,隨后啟動盤式電機14使得第一圓盤2繼續以1500r/min的速度旋
轉,由于第一圓盤2的直徑是第二圓盤3的兩倍,從而使第二圓盤3以3000r/min的速度旋轉,待第二圓盤3離心10min后,關閉盤式電機14,旋出第二定位銷33,使得第二活動塊35失去限位,第二定位銷33在第二活動套環37與第二固定套環36之間彈簧的彈力作用下發生回彈,從而帶動第二活動塊35端部的第二夾板32回彈,使得試管松弛,方便將試管分別從第二插孔31中取出,將左側試管中的上清液通過膠頭滴管吸取至廢液槽18內,隨后加pbs洗滌沉淀,將細胞懸液通過膠頭滴管轉移至1.5ml ep管中,最后再將ep管重新插入左側第二圓盤3上的第二插孔31內,將右側試管中的上清液通過膠頭滴管吸取至廢液槽18內,隨后加pbs洗滌沉淀,將細胞懸液通過膠頭滴管轉移至1.5ml ep管中,最后再將ep管重新插入左側第二圓盤3上的第二插孔31內,再次啟動盤式電機14使得第二圓盤3繼續以3000r/min的速度旋轉,待第二圓盤3離心20min后關閉盤式電機14,將左側ep管取出后通過膠頭滴管將上清液吸取至廢液槽18內,獲得白細胞,將右側管取出后通過膠頭滴管將上清液吸取至廢液槽18內,獲得白細胞,最后采用流式細胞儀對外周血和骨髓樣本中富集的白細胞進行腫瘤細胞比例檢測,如果比例達到50%-90%則通過蛋白免疫印跡技術獲得bcl-2家族蛋白表達水平,盤式電機14在檢測過程中始終保持恒定的輸出功率,可避免盤式電機14變換功率以達到不同的轉速而導致盤式電機14負荷過大,節約電能的同時延長盤式電機14的壽命,且廢液槽18的設置方便了廢液的集中收集,在第一圓盤2和第二圓盤3上方設有蓋板,用以對第一圓盤2環形外側面以及第二圓盤3環形外側面上的輪齒進行遮蓋。
29.作為本發明的一種實施方式,參照圖2至圖5,盤式電機14的輸出軸端部環形外側面固定套設有主錐齒輪6,主錐齒輪6左右對稱嚙合有副錐齒輪61,副錐齒輪61相互遠離的一側均固定連接有支桿62,支桿62環形外側面轉動套設有l形結構的吊板64,吊板64的水平部分分別與第一隔板13固定連接,支桿62相互遠離的一端均固定連接有扇葉63;兩個第一隔板13與扇葉63對應位置處分別開設有貫穿至試劑盒本體1外側的通風口4,通風口4內側均開設有貫穿至試劑盒本體1前側的板槽45,板槽45內滑動連接有擋板41,擋板41前側面固定連接有推板42;第一隔板13豎直部分的內壁與試劑盒本體1相對應的內壁上均豎直等距固定連接有三組平行的架板5,架板5上搭設有載板51,試劑盒本體1前側面對應第一隔板13內側與試劑盒本體1形成的矩形空間開設有槽口44,槽口44下端面通過合頁鉸接有封板43。
30.基于上述實施例,本方案實施時,在試劑盒本體1使用的過程中,可將裝有白血病及淋巴瘤細胞的培養皿置于第一隔板13與試劑盒本體1之間形成的矩形空腔內的載板51上進行培養,在第一隔板13豎直部分的內壁與試劑盒本體1相對應的內壁上均豎直等距固定連接有三組平行的架板5,可對載板51的位置進行調節,從而適應不同大小的培養皿,在白血病及淋巴瘤細胞培養至對數生長周期的過程中,當白血病及淋巴瘤細胞需要通風散熱時,可通過拉動推板42以帶動擋板41離開通風口4,盤式電機14運行過程中會帶動主錐齒輪6旋轉,從而同時帶動兩個副錐齒輪61旋轉,進而帶動支桿62旋轉,使得兩個扇葉63同步旋轉,使得矩形空腔內的空氣得以流動,從而防止白血病及淋巴瘤細胞溫度過高發生死亡,當白血病及淋巴瘤細胞培養至對數生長周期時,打開封板43,抽出載板51,用不同抗腫瘤藥物處理培養皿內的細胞24小時至72小時不等的時間,離心,pbs重懸清洗,棄盡上清,用pi和annexin
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重懸并染,并采用流式細胞儀進行檢測細胞凋亡比例,通過bcl-2家族蛋白表達水平與s3中細胞凋亡比例的對比得到抗腫瘤藥物敏感性與bcl-2蛋白質家族表達水平的
相關關系。
31.一種血液腫瘤測定試劑盒的檢測方法,包括以下步驟:s1:使用抗凝管采集受試者外周血10ml,與等體積pbs混勻后小心加于白細胞分離液液面上,將試管置于第一插孔21內并夾緊,啟動盤式電機14以1500r/min離心20min,隨后吸取中間云霧狀白細胞,加pbs后3000r/min離心10min,棄上清,加pbs洗滌沉淀,將細胞懸液轉移至1.5ml ep管中,再將ep管插入第二圓盤3的第二插孔31內并夾緊,以3000r/min離心20min,棄上清,獲得白細胞;s2:使用抗凝管采集受試者骨髓1ml,與等體積pbs混勻后小心加于白細胞分離液液面上,將試管置于第一插孔21內并夾緊,啟動盤式電機14以1500r/min離心20min,吸取中間云霧狀白細胞,加pbs后3000r/min離心10min,棄上清,加pbs洗滌沉淀,將細胞懸液轉移至1.5ml ep管中,再將ep管插入第二圓盤3的第二插孔31內并夾緊,以3000r/min離心20min,棄上清,獲得白細胞;s3:在第一隔板13內的載板51上放置培養皿,通過培養皿將白血病及淋巴瘤細胞培養至對數生長期,用不同抗腫瘤藥物處理24小時至72小時不等的時間,離心,pbs重懸清洗,棄盡上清,用pi和annexin
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重懸并染,并采用流式細胞儀進行檢測細胞凋亡比例;s4:采用流式細胞儀對s1和s2中得到的白細胞進行腫瘤細胞比例檢測,如果比例達到50%-90%則通過蛋白免疫印跡技術獲得bcl-2家族蛋白表達水平,通過bcl-2家族蛋白表達水平與s3中細胞凋亡比例的對比得到抗腫瘤藥物敏感性與bcl-2蛋白質家族表達水平的相關關系。
32.工作原理:需要檢測時,打開盒蓋,取出管架8上的膠頭滴管、試管以及抗凝管,使用抗凝管采集受試者外周血10ml,與等體積pbs混勻后,使用膠頭滴管小心加于盛有白細胞分離液的試管內,且外周血與pbs混合液位于白細胞分離液的液面上方,使用抗凝管采集受試者骨髓1ml,與等體積pbs混勻后,使用膠頭滴管小心加于盛有白細胞分離液的試管內,且骨髓與pbs混合液位于白細胞分離液的液面上方,兩種試樣各兩份,隨后將試管分別置于第一圓盤2上的四個第一圓孔24內,旋動第一定位銷23使得第一定位銷23下部的螺栓不斷進入第一螺孔28內,第一定位銷23的錐形上部在下降過程中會同時擠壓四個第一活動塊25,第一活動塊25向外擴張的同時分別帶的第一夾板22對試管進行夾緊,從而壓縮第一活動套環27與第一固定套環26之間的彈簧,避免試管在離心過程中發生混動,隨后啟動盤式電機14帶動驅動軸15旋轉,進而帶動第一圓盤2旋轉,使得第一圓盤2以1500r/min的速度旋轉,試管內的溶液在離心力的作用下混合的更加均勻;待第一圓盤2以1500r/min的速度旋轉20min后關閉盤式電機14,旋出第一定位銷23,取出試管,使用膠頭滴管吸取含有外周血的試管內溶液中間云霧狀白細胞至新的試管內,在新的試管內加pbs后,將新的試管置于左側第二圓盤3的第二插孔31內,使用膠頭滴管吸取含有骨髓的試管內的溶液中間云霧狀白細胞至新的試管內,在新的試管內加pbs后,將新的試管置于右側第二圓盤3上的第二插孔31內,隨后分別將第二定位銷33擰入對應位置轉軸16上端的第二螺孔38內,同理,第二定位銷33擰入第二螺孔38的過程中會帶動四個第二活動塊35向外擴張,從而帶動第二活動塊35端部的第二夾板32將試管夾緊,防止試管在離心的過程中發生晃動,隨后啟動盤式電機14使得第一圓盤2繼續以1500r/min的速度旋轉,由于第一圓盤2的直徑是第二圓盤3的兩倍,從而使第二圓盤3以3000r/min的速度旋轉,
待第二圓盤3離心10min后,關閉盤式電機14,分別取出左右兩側的試管,將左側試管中的上清液通過膠頭滴管吸取至廢液槽18內,隨后加pbs洗滌沉淀,將細胞懸液通過膠頭滴管轉移至1.5ml ep管中,最后再將ep管重新插入左側第二圓盤3上的第二插孔31內,將右側試管中的上清液通過膠頭滴管吸取至廢液槽18內,隨后加pbs洗滌沉淀,將細胞懸液通過膠頭滴管轉移至1.5ml ep管中,最后再將ep管重新插入左側第二圓盤3上的第二插孔31內,再次啟動盤式電機14使得第二圓盤3繼續以3000r/min的速度旋轉,待第二圓盤3離心20min后關閉盤式電機14,將左側ep管取出后通過膠頭滴管將上清液吸取至廢液槽18內,獲得白細胞,將右側管取出后通過膠頭滴管將上清液吸取至廢液槽18內,獲得白細胞,最后采用流式細胞儀對外周血和骨髓樣本中富集的白細胞進行腫瘤細胞比例檢測,如果比例達到50%-90%則通過蛋白免疫印跡技術獲得bcl-2家族蛋白表達水平,盤式電機14在檢測過程中始終保持恒定的輸出功率,可避免盤式電機14變換功率以達到不同的轉速而導致盤式電機14負荷過大,節約電能的同時延長盤式電機14的壽命,且廢液槽18的設置方便了廢液的集中收集;在試劑盒本體1使用的過程中,可將裝有白血病及淋巴瘤細胞的培養皿置于第一隔板13與試劑盒本體1之間形成的矩形空腔內的載板51上進行培養,在白血病及淋巴瘤細胞培養至對數生長周期的過程中,當白血病及淋巴瘤細胞需要通風散熱時,可通過拉動推板42以帶動擋板41離開通風口4,盤式電機14運行過程中會帶動主錐齒輪6旋轉,從而同時帶動兩個副錐齒輪61旋轉,進而帶動支桿62旋轉,使得兩個扇葉63同步旋轉,使得矩形空腔內的空氣得以流動,從而防止白血病及淋巴瘤細胞溫度過高發生死亡,當白血病及淋巴瘤細胞培養至對數生長周期時,打開封板43,抽出載板51,用不同抗腫瘤藥物處理培養皿內的細胞24小時至72小時不等的時間,離心,pbs重懸清洗,棄盡上清,用pi和annexin
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重懸并染,并采用流式細胞儀進行檢測細胞凋亡比例,通過bcl-2家族蛋白表達水平與s3中細胞凋亡比例的對比得到抗腫瘤藥物敏感性與bcl-2蛋白質家族表達水平的相關關系。
33.以上所述,僅為本發明較佳的具體實施方式;但本發明的保護范圍并不局限于此。任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明揭露的技術范圍內,根據本發明的技術方案及其改進構思加以等同替換或改變,都應涵蓋在本發明的保護范圍內。


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