用于哺乳動物的補充動物飼料的制作方法
用于哺乳動物的補充動物飼料
1.相關申請的交叉引用
2.本技術要求于2020年2月18日提交的美國專利申請序列號62/977,990的優先權，其內容通過引用以其全文并入本文。
背景技術：
3.在為促進生長而優化的現代條件下飼養的哺乳動物接受含有高比例的蛋白質(通常為大豆或棉籽粕的形式)及高百分比的谷物諸如玉米或米洛(一種類型的高粱)的日糧。飼料添加劑已被用于改良農場動物(包括妊娠或泌乳哺乳動物)的健康和福祉。飼料是維持農場動物和從哺乳動物生產食物的相對昂貴的成本因素(典型地是成本的50％至70％)。因此，對哺乳動物的飼料轉化為食品(包括奶)的任何改良，或對哺乳動物的繁殖性能的提高，都可以直接提升食品生產商的盈利能力。
4.添加劑的使用并非沒有問題。抗生素在動物飼料中的廣泛使用促進了抗生素耐藥微生物的發展。由于越來越多的抗生素耐藥細菌出現在飼養場，并且抗生素耐藥細菌可能導致流行病，政府關于限制動物飼料中抗生素的使用面臨的壓力越來越大。
5.因此，對改良妊娠或泌乳哺乳動物的健康和福祉的新的、安全的、有效的方法有迫切和日益增加的需求。
技術實現要素：
6.本發明的特征在于用于以下的方法中的補充動物飼料：(i)改善亞臨床乳腺炎的一種或多種癥狀；(ii)減少亞臨床乳腺炎進展為完全臨床乳腺炎的頻率；(iii)減少哺乳動物初乳或奶中的細菌計數；(iv)減少哺乳動物的生理應激；(v)改良哺乳動物的繁殖性能；和/或(vi)改良哺乳動物后代健康。
7.在第一方面，本發明的特征在于一種哺乳動物的亞臨床乳腺炎的方法，該方法包括給該哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。在一些實施例中，該哺乳動物正在泌乳。在另外的實施例中，該哺乳動物正在哺育后代。該哺乳動物可以是牛、馬、狗、貓、綿羊、或豬。在一些實施例中，該哺乳動物是牛。在特定實施例中，該哺乳動物是奶牛。奶牛可以是荷斯坦牛(holstein cattle)、娟姍牛(jersey cattle)、瑞士褐牛(brown swiss cattle)、更賽牛(guernsey cattle)、愛爾夏牛(ayrshire cattle)、乳用短角牛、或紅白花荷斯坦牛(red and white holstein)。在其他實施例中，該哺乳動物是豬。在一些實施例中，該喂食是在從該哺乳動物收集奶之前的10天至30天(例如，從10天至15天、從10天至20天、從15天至20天、從15天至25天、從20天至25天、從20天至30天、或從25天至30天)。在其他實施例中，該喂食是在從該哺乳動物收集奶之前的30天至50天(例如，從30天至40天、從35天至45天、從40天至50天、從30天至35天、從35天至40天、從40天至45天、或從45天至50天)。在仍其他實施例中，該喂食是在從該哺乳動物收集奶之前的20天至45天(例如，從20天至30天、從25天至35天、從30天至40天、從35天至45天、從21天至42天、從21天至28天、或從28天至42天)。在一些實施例中，該喂食在從該哺乳動物收集奶期間進行。在一
些實施例中，該奶的保質期增加。在一些實施例中，該方法包括改善亞臨床乳腺炎的一種或多種癥狀。在特定實施例中，該方法包括減少(例如，20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或更多)該哺乳動物中亞臨床乳腺炎進展為完全臨床乳腺炎的頻率。
8.在另一個方面，本發明的特征在于一種改良哺乳動物后代健康的方法，該方法包括在該哺乳動物懷孕后給該哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。該哺乳動物可以是牛、馬、狗、貓、綿羊、或豬。在一些實施例中，該哺乳動物是豬。在一些實施例中，該喂食是在從該哺乳動物懷孕之前的10天至30天(例如，從10天至15天、從10天至20天、從15天至20天、從15天至25天、從20天至25天、從20天至30天、或從25天至30天)。在一些實施例中，該喂食在該后代的妊娠期期間進行。在一些實施例中，該方法進一步包括在該哺乳動物哺育該后代期間，繼續喂食該哺乳動物。在一些實施例中，從該懷孕哺乳動物向該后代的被動免疫轉移增強。在特定實施例中，該哺乳動物在懷孕之前或之后患有亞臨床乳腺炎或處于亞臨床乳腺炎的風險下。在特定實施例中，改良后代健康包括：(i)減少出生時死胎或木乃伊胎的數量；(ii)增加活后代從出生到斷奶的存活率；(iii)增加后代從出生到斷奶的體重增加；和/或(iv)減少后代從出生到斷奶的感染性疾病(例如，腹瀉)的發生率。與對照哺乳動物的后代相比，存活率的平均增加可以大于0.5％，優選大于1％、2％、3％、4％、或5％。與對照哺乳動物的后代相比，后代從出生到斷奶的體重增加的平均增加可以大于0.5％，優選大于1％、2％、3％、4％、或5％。與對照哺乳動物的后代相比，后代從出生到斷奶的感染性疾病(例如，腹瀉)的發生率的平均降低可以大于0.5％，優選大于1％、2％、3％、4％、或5％。
9.在另一個方面，本發明的特征在于一種減少泌乳哺乳動物的生理應激的方法，該方法包括在該哺乳動物泌乳期間給該哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。在一些實施例中，該哺乳動物正在哺育后代。該哺乳動物可以是牛、馬、狗、貓、綿羊、或豬。在一些實施例中，該哺乳動物是牛。在特定實施例中，該哺乳動物是奶牛。奶牛可以是荷斯坦牛、娟姍牛、瑞士褐牛、更賽牛、愛爾夏牛、乳用短角牛、或紅白花荷斯坦牛。在其他實施例中，該哺乳動物是豬。在一些實施例中，減少生理應激包括減少該哺乳動物的脂肪損失。在特定實施例中，該哺乳動物在泌乳期間患有亞臨床乳腺炎或處于亞臨床乳腺炎的風險下。
10.在另一個方面，本發明的特征在于一種在哺乳動物生下后代后改良該哺乳動物的繁殖性能的方法，該方法包括給該哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。該哺乳動物可以是牛、馬、狗、貓、綿羊、或豬。在一些實施例中，該哺乳動物是牛。在特定實施例中，該哺乳動物是奶牛。奶牛可以是荷斯坦牛、娟姍牛、瑞士褐牛、更賽牛、愛爾夏牛、乳用短角牛、或紅白花荷斯坦牛。在其他實施例中，該哺乳動物是豬。在一些實施例中，改良繁殖性能減少了該哺乳動物恢復發情所需的天數。在特定實施例中，該哺乳動物在其懷孕之前或之后患有亞臨床乳腺炎或處于亞臨床乳腺炎的風險下。
11.本發明的特征進一步在于一種減少哺乳動物初乳或奶中的細菌計數的方法，該方法包括給該哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。在一些實施例中，該哺乳動物正在泌乳。在另外的實施例中，該哺乳動物正在哺育后代。該哺乳動物可以是牛、馬、狗、貓、綿羊、或豬。在一些實施例中，該哺乳動物是牛。在特定實施例中，該哺乳動物是奶牛。奶牛可以是荷斯坦牛、娟姍牛、瑞士褐牛、更賽牛、愛爾夏牛、乳用短角牛、或紅白
花荷斯坦牛。在其他實施例中，該哺乳動物是豬。
12.在該哺乳動物正在泌乳的上述方法的特定實施例中，該方法可以包括給該哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料，其中該喂食是：(i)在從該哺乳動物收集奶之前的10天至30天(例如，從10天至15天、從10天至20天、從15天至20天、從15天至25天、從20天至25天、從20天至30天、或從25天至30天)；或(ii)在從該哺乳動物收集奶之前的30天至50天(例如，從30天至40天、從35天至45天、從40天至50天、從30天至35天、從35天至40天、從40天至45天、或從45天至50天；或(iii)在從該哺乳動物收集奶之前的20天至45天(例如，從20天至30天、從25天至35天、從30天至40天、從35天至45天、從21天至42天、從21天至28天、或從28天至42天)。在一些實施例中，該喂食在從該哺乳動物收集奶期間進行。在一些實施例中，該奶的保質期增加。
13.在該哺乳動物懷孕的上述方法的特定實施例中，該方法可以包括給該哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料，其中該喂食是：(i)在從該哺乳動物懷孕之前的10天至30天(例如，從10天至15天、從10天至20天、從15天至20天、從15天至25天、從20天至25天、從20天至30天、或從25天至30天)；或(ii)在從該哺乳動物懷孕之前的30天至50天(例如，從30天至40天、從35天至45天、從40天至50天、從30天至35天、從35天至40天、從40天至45天、或從45天至50天)；或(iii)在從該哺乳動物懷孕之前的20天至45天(例如，從20天至30天、從25天至35天、從30天至40天、從35天至45天、從21天至42天、從21天至28天、或從28天至42天)。在一些實施例中，該喂食在該哺乳動物的整個妊娠期期間進行(例如，與約115天的妊娠期同時喂食母豬)。在其他實施例中，該喂食至少持續該哺乳動物的妊娠期的前半段。在仍其他實施例中，該喂食至少持續該哺乳動物的妊娠期的后半段。在一些實施例中，所得到的后代健康得到改良。
14.在任何上述方法的特定實施例中，該動物主要(例如，80％或更多)被喂食補充有類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。采用這種方法，該動物飼料可以包含0.0001％至0.005％(w/w)(例如，0.0001％至0.003％(w/w)、0.0001％至0.001％(w/w)、0.0005％至0.003％(w/w)、0.0005％至0.001％(w/w)、0.001％至0.003％(w/w)、0.001％至0.005％(w/w)、或0.003％至0.005％(w/w))類胡蘿卜素-氧共聚物。該動物飼料可以包含0.0002％至0.001％(w/w)類胡蘿卜素-氧共聚物。在特定實施例中，該動物飼料包含0.0004％至0.001％(w/w)類胡蘿卜素-氧共聚物。
15.在任何上述方法的其他實施例中，該動物主要(例如，80％或更多)被喂食未補充類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料，但每天至少接受補充有類胡蘿卜素-氧共聚物的單獨每日喂食。采用這種方法，該每日喂食可以包含含有0.01％至0.5％(w/w)(例如，0.01％至0.1％(w/w)、0.05％至0.2％(w/w)、0.075％至0.4％(w/w)、0.15％至0.4％(w/w)、或0.2％至0.5％(w/w))類胡蘿卜素-氧共聚物的高度補充動物飼料。該動物飼料可以包含0.02％至0.1％(w/w)類胡蘿卜素-氧共聚物。在特定實施例中，該動物飼料包含0.05％至0.1％(w/w)類胡蘿卜素-氧共聚物。例如，當這些哺乳動物是通過牧場放牧喂食的牛時，本發明的方法包括每天用該高度補充動物飼料喂食。
16.在另一個方面，本發明的特征在于一種生產巴氏殺菌奶的方法，該方法包括：(i)提供從哺乳動物獲得的奶，其中在從該哺乳動物收集奶之前的至少10天開始至30天(例如，從10天至15天、從10天至20天、從15天至20天、從15天至25天、從20天至25天、從20天至30
天、或從25天至30天)的期間，哺乳動物被喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料；以及(ii)使用低溫巴氏殺菌工藝加工該奶以生產該巴氏殺菌奶。在其他實施例中，在從該哺乳動物收集奶之前的至少30天開始至50天(例如，從30天至40天、從35天至45天、從40天至50天、從30天至35天、從35天至40天、從40天至45天、或從45天至50天)的期間，該哺乳動物被喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。在仍其他實施例中，在從該哺乳動物收集奶之前的至少20天開始至45天(例如，從20天至30天、從25天至35天、從30天至40天、從35天至45天、從21天至42天、從21天至28天、或從28天至42天)的期間，該哺乳動物被喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。在一些實施例中，該奶的保質期增加。在其他實施例中，該奶中的細菌計數減少。該哺乳動物可以是牛、馬、狗、貓、綿羊、或豬。在一些實施例中，該哺乳動物是牛。在特定實施例中，該哺乳動物是奶牛。奶牛可以是荷斯坦牛、娟姍牛、瑞士褐牛、更賽牛、愛爾夏牛、乳用短角牛、或紅白花荷斯坦牛。
17.定義
[0018]“動物”是指任何動物，包括但不限于綿羊、豬、牛、和鳥類。“哺乳動物”是指具有泌乳能力的動物，包括但不限于綿羊、豬、和牛。
[0019]
如本文使用的，“類胡蘿卜素”是指可以在植物、藻類、細菌和某些動物(諸如鳥類和貝類)中發現的具有萜類基團的天然存在的素。類胡蘿卜素包括作為碳氫化合物(即不含氧)的胡蘿卜素及其含氧衍生物(即葉黃素)。類胡蘿卜素的實例包括番茄紅素；β-胡蘿卜素；玉米黃質；海膽酮；異玉米黃質；蝦青素；角黃素；葉黃素；檸檬黃素；β-阿樸-8'-胡蘿卜素酸乙酯；羥基類胡蘿卜素，諸如別黃嘌呤、阿撲胡蘿卜醇、蝦紅素、蝦青素、辣椒紅素、辣椒玉紅素、胡蘿卜素二醇、胡蘿卜素三醇、胡蘿卜醇、隱黃質、癸異戊二烯黃素、表葉黃素、巖藻黃質、羥基胡蘿卜素酮、羥基海膽酮、羥基番茄紅素、葉黃素、番茄黃質、神經松質、八氫番茄紅素、植物氟烯、紫菌紅素乙、球形烯、環烯、紫黃質、和玉米黃質；和羧基類胡蘿卜素，諸如阿樸胡蘿卜素酸、13-阿樸-8'-胡蘿卜素酸、玄參紅酸、紅木素、羧基胡蘿卜素、藏花酸、二阿樸胡蘿卜素酸、鏈孢霉黃素、降紅木素、和番茄紅素酸。
[0020]
如本文使用的，“類胡蘿卜素-氧共聚物”是指通過與分子氧自發反應以其反應性雙鍵完全氧化的類胡蘿卜素，從而導致類胡蘿卜素與氧的共聚物作為主要產物。在一些實施例中，類胡蘿卜素-氧共聚物是通過使類胡蘿卜素與多達6摩爾至8摩爾當量氧或來自另一種氧化劑的當量氧反應而形成。這種反應產生大比例的聚合材料(即分子量大于1,000道爾頓的材料)。聚合物材料被認為是通過可以由多個雙鍵形成的各種氧化片段的許多可能的化學組合形成的。美國專利號5,475,006和u.s.s.n.08/527,039中描述了制備類胡蘿卜素-氧共聚物的方法，其中每個通過引用并入本文。
[0021]
如本文使用的，奶的“低溫巴氏滅菌”是指一種在55℃至65℃(例如，從55℃至60℃、從58℃至63℃、從60℃至65℃、從60℃至63℃、從61℃至64℃、從62℃至65℃、從62℃至64℃、或從62℃至65℃)的范圍內的溫度下將奶加熱足以把奶的總細菌計數減少50％，優選55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、或99％的時間段(例如，從10分鐘至1小時、從20分鐘至40分鐘、從30分鐘至1小時、從30分鐘至40分鐘、從40分鐘至1小時、從1小時至2小時、或從1小時至3小時)的方法。
[0022]
如本文使用的，哺乳動物中“改良后代健康”是指(i)減少出生時死胎或木乃伊胎的數量；(ii)增加活后代從出生到斷奶的存活率；(iii)增加后代從出生到斷奶的體重增
加；和/或(iv)減少后代從出生到斷奶的感染性疾病(例如，腹瀉)的發生率。該改良是與除了對照哺乳動物的飼料未補充類胡蘿卜素-氧聚合物之外在相同條件下飼養的相同物種、年齡和狀況(例如，懷孕前、妊娠或泌乳)的對照哺乳動物相比。與對照哺乳動物的后代相比，存活率的平均增加可以大于0.5％，優選大于1％、2％、3％、4％、或5％。與對照哺乳動物的后代相比，后代從出生到斷奶的體重增加的平均增加可以大于0.5％，優選大于1％、2％、3％、4％、或5％。與對照哺乳動物的后代相比，后代從出生到斷奶的感染性疾病(例如，腹瀉)的發生率的平均降低可以大于0.5％，優選大于1％、2％、3％、4％、或5％。
[0023]
如本文使用的，哺乳動物中“飼料攝入量”是指每只哺乳動物每日消耗的飼料(例如，千克/天)。
[0024]
如本文使用的，哺乳動物中“減少生理應激”是指以下中任一項：(i)減少哺乳動物的脂肪損失；(ii)減少心率；以及(iii)減少血壓。該改良是與除了對照哺乳動物的飼料未補充類胡蘿卜素-氧共聚物之外在相同條件下飼養的相同物種、年齡和狀況(例如，懷孕前、妊娠或泌乳)的對照哺乳動物相比。
[0025]
如本文使用的，與除了對照哺乳動物的飼料未補充類胡蘿卜素-氧共聚物之外在相同條件下飼養的相同物種、年齡和狀況的對照哺乳動物相比，哺乳動物“改良繁殖性能”是指(i)哺乳動物在較短時間內恢復發情；(ii)減少出生時小于正常的后代數量；和/或(iii)增加每窩后代數量。
[0026]
如本文使用的，“oxbc”是主要含有類胡蘿卜素-氧共聚物(例如，β-胡蘿卜素-氧共聚物)以及少量的許多小分子氧化分解產物的化合物，由多達6摩爾至8摩爾當量氧與β-胡蘿卜素反應形成。在一些實例中，oxbc作為商業產品oxc-β
tm
牲畜10％預混物施用。
[0027]
如本文使用的，術語“亞臨床乳腺炎”是指由不會在奶或乳房中產生可見變化的亞臨床乳房內感染導致的哺乳動物乳腺炎癥。盡管奶看起來正常，但在亞臨床感染的母牛通常會產生較少的奶，并且奶的質量將降低。
[0028]
如本文使用的，術語“亞臨床乳腺炎”是指(i)改善亞臨床乳腺炎的一種或多種癥狀，或(ii)減少亞臨床乳腺炎進展為完全臨床乳腺炎的頻率。使用本發明的方法患有亞臨床乳腺炎的哺乳動物，可以增加哺乳動物奶產生，改良哺乳動物奶質量，并且可以降低(例如，20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多)亞臨床乳房炎進展為完全臨床乳房病的風險。(i)改善亞臨床乳腺炎的一種或多種癥狀或(ii)減少亞臨床乳腺炎進展為完全臨床乳腺炎的頻率的效果是與除了對照哺乳動物的飼料未補充類胡蘿卜素-氧共聚物之外在相同條件下飼養的相同物種、年齡和狀況(例如，亞臨床乳腺炎的相同嚴重程度和狀態，例如，懷孕前、妊娠和/或泌乳)的對照哺乳動物相比。
[0029]
從以下詳細說明以及權利要求中，本發明的其他特征和優點將會是顯而易見的。
附圖說明
[0030]
圖1證明了實例2中oxbc對以下三個實驗組的泌乳奶牛的干物質攝入量(dmi)的影響：ctr2、t1、和t2。
[0031]
圖2證明了實例2中oxbc對以下三個實驗組的泌乳奶牛的奶產生的影響：ctr2、t1、和t2。
[0032]
圖3證明了研究期的天氣數據。t
max
＝24小時內的最高溫度；t
min
＝24小時內的最低
溫度；和precip＝24小時內的總沉淀。
[0033]
圖4是在開始喂食之前(d 0)以及21天和42天之后喂食oxbc或對照的母牛的四分體(quarter)的四分體水平scc的自然對數的小提琴圖。在小提琴圖中，開放圓代表中值，實心條代表四分位距，須代表該四分位距延伸1.5倍，并且陰影代表數據的核密度圖。
[0034]
圖5顯示了在開始喂食之前(d 0)以及21天和42天之后喂食oxbc(
·
)或對照(
△
)的母牛的四分體的四分體水平scc的自然對數的估計邊際平均值。
[0035]
圖6顯示了在用oxbc(
·
)或對照(
△
)飲食開始喂食后，在第21和第42天的scc《200,000個/ml的四分體的估計平均比例。
[0036]
圖7是開始喂食oxbc或對照飲食前后ln母牛水平(畜測試)scc的小提琴圖。
[0037]
圖8顯示了開始喂食oxbc(
·
)或對照(
△
)飲食前后ln母牛水平(畜測試)scc的估計邊際平均值。
[0038]
圖9顯示了喂食補充oxbc(實心橙條)或喂食對照飲食(交叉陰影藍條)的母牛在開始喂食前和開始喂食后進行的畜測試的估計邊際平均值(95％置信區間)每日奶產量(千克/母牛/天)。
[0039]
圖10是開始喂食oxbc或對照飲食前后母牛水平(畜測試)乳脂百分比的小提琴圖。
[0040]
圖11顯示了開始喂食oxbc(
·
)或對照(
△
)飲食前后母牛水平(畜測試)乳脂百分比的估計邊際平均值。
[0041]
圖12是開始喂食oxbc或對照飲食前后母牛水平(畜測試)乳蛋白百分比的小提琴圖。
[0042]
圖13顯示了開始喂食oxbc(
·
)或對照(
△
)飲食前后母牛水平(畜測試)乳蛋白百分比的估計邊際平均值。
具體實施方式
[0043]
本發明的特征在于通過給哺乳動物喂食包含類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料來哺乳動物(例如，牛、馬、狗、貓、綿羊、或豬)的亞臨床乳腺炎和減少其初乳或奶中的細菌計數的方法。本發明的特征還在于通過給哺乳動物喂食包含類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料來減少生理應激、改良繁殖性能、和改良后代健康的方法。
[0044]
已經證明，與無相比，抗微生物劑后亞臨床乳房內感染(例如，亞臨床乳腺炎)的細菌學治愈率提高(例如，亞臨床乳腺炎)(參見sol等人,journal of dairy science[乳業科學雜志],80,2803-2808(1997)；oliver等人,journal of dairy science[乳業科學雜志],87,2393-2400(2004)；deluyker等人journal of dairy science[乳業科學雜志],88,604-614(2005)；以及steele和mcdougall,new zealand veterinary journal[新西蘭獸醫學雜志],62,38-46(2014))。然而，用抗微生物劑亞臨床病例與相關奶渣的經濟學受到質疑(swinkels等人,new zealand veterinary journal[新西蘭獸醫學雜志],62,38-46(2005))，并且發展抗微生物劑耐藥性的風險增加的可能性表明，常規使用抗微生物劑亞臨床感染可能是不合理的(barlow,journal of mammary gland biology and neoplasia[乳腺生物學與腫瘤形成雜志],16,385-407(2009))。因此，替代性的非抗微生物劑方法是優選的。本發明的方法可以提供這種非抗微生物劑方法。
[0045]
類胡蘿卜素-氧共聚物的施用
[0046]
使用本發明的方法，將類胡蘿卜素-氧共聚物以有效哺乳動物的亞臨床乳腺炎和/或減少其初乳或奶中的細菌計數的量喂給哺乳動物。使用本發明的進一步方法，將類胡蘿卜素-氧共聚物以有效減少泌乳哺乳動物的生理應激的量喂給泌乳哺乳動物。使用本發明的其他方法，將類胡蘿卜素-氧共聚物喂給哺乳動物，以改良哺乳動物繁殖性能并且增加后代健康。
[0047]
對于類胡蘿卜素-氧共聚物，典型的劑量范圍從每天約5μg/kg至約50mg/kg體重。理想的是，給哺乳動物每天喂食5μg/kg和5mg/kg體重之間或5μg/kg和0.5mg/kg體重之間的劑量。要施用的類胡蘿卜素-氧共聚物的確切量可以取決于哺乳動物的物種、飲食和狀態(例如，懷孕前、妊娠或泌乳)等變量，以及類胡蘿卜素-氧共聚物是否與其他飼料補充劑組合。標準試驗(諸如實例中描述的那些)可以用于優化類胡蘿卜素-氧共聚物的劑量和劑量頻率。
[0048]
動物飼料
[0049]
本發明的動物飼料可以含有有效減少哺乳動物初乳或奶中細菌計數或減少鳥類蛋細菌計數的量的類胡蘿卜素-氧共聚物。本發明的動物飼料可以含有有效改良哺乳動物后代健康和/或改良哺乳動物的繁殖性能的量的類胡蘿卜素-氧共聚物。本發明的動物飼料可以含有有效減少泌乳哺乳動物的生理應激的量的類胡蘿卜素-氧共聚物。
[0050]
通常按照行業標準將動物飼料配制以提供營養。可以由各種不同的飼料成分配制飼料，這些成分是根據市場價格和可用性選擇的。因此，飼料的某些組分可能會隨著時間而變化。有關動物飼料配方和nrc指南的討論，請參見church,livestock feeds and feeding[牲畜飼料和喂食],o&b books,inc.,科瓦利斯市,俄勒岡州(1984)和feeds and nutrition digest[飼料和營養文摘],ensminger,oldfield和heineman編輯,ensminger publishing corporation,克洛維斯,加利福尼亞州(1990)，其中每個通過引用并入本文。
[0051]
傳統上基于蛋白質和能量需求對豬和其他動物飼料進行平衡，如果需要滿足其他需求則進行調整，這些需求將因哺乳動物的不同生長階段(例如，懷孕前、妊娠或泌乳)和哺乳動物的維持而變化。在某些喂食情況下，必須注意提供適當的氨基酸以及整體蛋白質含量。例如，喂食大量玉米的豬必須在飼料中提供足夠的賴氨酸。在大多數哺乳動物飲食中，谷物中的淀粉都滿足能量需求。也可以通過向飼料添加脂肪來滿足能量需求。含有類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料也可以配制用于牛、馬、狗、貓、綿羊、和鳥類等。
[0052]
可以根據需要向動物飼料添加其他成分，以促進哺乳動物健康和生長。成分包括但不限于糖、復合碳水化合物、氨基酸(例如，精氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、氨酸、纈氨酸、酪氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸鈉、甘氨酸、脯氨酸、絲氨酸和半胱氨酸等)、維生素(例如，硫胺、核黃素、吡哆醇、煙酸、煙酰胺、肌醇、氯化膽堿、泛酸鈣、生物素、葉酸、抗壞血酸和維生素a、b、k、d、e等)、礦物質、蛋白質(例如，肉粉、魚粉、液體或粉末雞蛋、魚可溶性物、乳清蛋白濃縮物)、油(例如，大豆油)、玉米淀粉、鈣、無機磷酸鹽、硫酸銅、和氯化鈉。本領域已知的任何藥物成分也可以添加到動物飼料中，包括但不限于抗生素和激素。有關動物飼料的維生素、礦物質和抗生素補充，請參見church,livestock feeds and feeding[牲畜飼料和喂食],o&b books公司,俄勒岡州科瓦利斯市(1984)。
[0053]
根據本發明可以使用本領域已知的任何動物飼料混合物，包括但不限于牧草，諸如果園草、梯牧草、高羊茅、黑麥草、苜蓿、紅豆草、三葉草和野豌豆；谷物飼料，諸如玉米、小麥、大麥高粱、小黑麥、黑麥、卡諾拉油菜和大豆、作物殘渣、谷物、豆類副產品和其他農業副產品。在要處理或保存所得到的飼料的情況下，在加工或保存之前，可以用類胡蘿卜素-氧共聚物處理飼料。理想的是，本發明的動物飼料包括菜籽粕、棉籽粕、大豆粕、或玉米粕。
[0054]
加工可包括干燥、青貯、切碎、顆粒化、切片、打包、軋制、回火、研磨、裂化、爆裂、擠壓、微粉化、烘烤、剝落、烹飪、和/或爆破。例如，通過首先混合進料組分，然后利用熱和壓力通過模具壓實和擠出飼料組分，從而產生顆粒化飼料。本發明的動物飼料可以如下所述顆粒化，例如，macbain,pelleting animal feed[動物飼料顆粒化],american feed manufacturers association[美國飼料制造商協會],阿靈頓,弗吉尼亞州(1974)，通過引用并入本文。
[0055]
在懷孕前、妊娠和/或泌乳期期間補充飲食
[0056]
本發明的方法(例如，用包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料喂食哺乳動物)可以用于改良妊娠或泌乳哺乳動物的健康和福祉。補充即將懷孕、正在妊娠和/或泌乳的哺乳動物的飲食的優點包括：(i)改善亞臨床乳腺炎的一種或多種癥狀；(ii)減少亞臨床乳腺炎進展為完全臨床乳腺炎的頻率；(iii)減少該哺乳動物初乳或奶中的細菌計數；(iv)減少該哺乳動物的生理應激；(v)改良該哺乳動物的繁殖性能；和(vi)改良該哺乳動物后代健康。
[0057]
改善亞臨床乳腺炎癥狀
[0058]
本發明的特征在于一種改善泌乳哺乳動物亞臨床乳腺炎的一種或多種癥狀的方法，其中該方法包括任選地在該哺乳動物泌乳期間，給該哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。例如，本發明的方法可用于患有亞臨床乳腺炎的哺乳動物，增加哺乳動物奶產生和/或改良哺乳動物奶產生質量。
[0059]
減少亞臨床乳腺炎進展為完全臨床乳腺炎
[0060]
本發明的特征在于一種減少泌乳哺乳動物中亞臨床乳腺炎進展為完全臨床乳腺炎的頻率的方法，其中該方法包括任選地在該哺乳動物泌乳期間，給該哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。例如，本發明的方法可以用于患有亞臨床乳腺炎的哺乳動物，將亞臨床乳腺炎進展為完全臨床乳腺炎的風險降低20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或更多。
[0061]
減少生理應激
[0062]
本發明的特征在于一種減少泌乳哺乳動物的生理應激的方法，其中該方法包括在該哺乳動物泌乳期間給該哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。泌乳導致哺乳動物的生理應激(例如，體重減輕)。減少泌乳哺乳動物的生理應激增加了哺乳動物的健康和福祉。在一個實例中，通過母豬的背部脂肪厚度(例如，背部脂肪的mm)監測泌乳母豬的生理應激。
[0063]
改良繁殖性能并且改良后代健康
[0064]
本發明的特征在于一種在哺乳動物生下后代后改良該哺乳動物的繁殖性能的方法，其中該方法包括在該哺乳動物泌乳期間給該哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。通過斷奶后哺乳動物恢復發情的速度、出生時小于正常的后代數量、
或每窩后代數量來測量繁殖性能。
[0065]
例如，對于母豬而言，改良繁殖性能是指母豬在斷奶后7天(例如，6天、5天、4天、3天、2天、或1天)內恢復發情。還通過出生時弱仔豬數量和每窩仔豬總數來測量繁殖性能。出生時弱仔豬是出生時體重《0.7kg的仔豬。后代的死亡率也表明了繁殖性能。后代可以是活胎或死胎。
[0066]
減少奶中的細菌計數
[0067]
本發明的特征在于一種減少哺乳動物初乳或奶中的細菌計數的方法，其中該方法包括給該哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。降低奶中的總細菌計數可以增加奶的保質期。
[0068]
巴氏殺菌奶的補充飲食
[0069]
本發明的特征進一步在于一種從哺乳動物生產巴氏殺菌奶的方法，其中給該哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料，并且使用低溫巴氏殺菌工藝加工該奶。
[0070]
奶是細菌生長的絕佳媒介。奶的巴氏殺菌典型地包括在高溫(例如，70℃至75℃)下加熱奶約15秒(例如，約5秒、約10秒、約20秒、約25秒、或約30秒)。低溫巴氏殺菌是在低溫(例如，55℃至65℃)下加熱奶的過程。在低溫巴氏殺菌中，將奶加熱約20分鐘(例如，約10分鐘、約15分鐘、約25分鐘、或約30分鐘)。
[0071]
與生奶相比，巴氏殺菌奶增加了奶的安全性并且增加了奶的保質期。
[0072]
實例
[0073]
提出以下實例向本領域普通技術人員提供可以如何使用、制造以及評價本文所述的組合物和方法的描述，并且旨在純粹是本發明的示例，而非旨在限制本發明人認為的本發明的范圍。
[0074]
實例1.經產母豬妊娠和泌乳期間飲食oxbc的影響
[0075]
進行了以下實例，以調查在經產母豬妊娠和泌乳期間飲食oxbc補充對生產力和免疫狀態的影響。
[0076]
材料
[0077]
妊娠或泌乳母豬
[0078]
在妊娠第85天，總共150頭經產母豬(landrace
×
yorkshire)，范圍從第3胎到第8胎，根據胎次、歷史繁殖性能和預計分娩日期隨機分配到3個飲食，每個50頭母豬。對照組(ctr1)的動物接受了基礎飲食，沒有補充劑；低劑量oxbc組(s1)的動物接受了補充4mg/kg oxbc的基礎飲食；以及高劑量oxbc組(s2)的動物接受了補充8mg/kg oxbc的基礎飲食。3種實驗飲食沒有一個補充藥物。喂食試驗從妊娠第85天到泌乳第21天(斷奶)進行。
[0079]
斷奶后7天，記錄泌乳母豬的體重增加和發情率。在妊娠第85天和第110天以及泌乳第21天，用母豬背部脂肪測量儀(瑞恩(renco)，美國)測量母豬的背部脂肪厚度。還記錄了泌乳期間母豬的平均每日飼料攝入量。
[0080]
飲食
[0081]
為滿足或超過妊娠和泌乳母豬的nrc(2012)要求而配制的基礎商業化玉米-大豆粕飲食(表1)用作組1的基礎飲食(對照飲食)。對于組2和3，將oxbc分別以4ppm或8ppm添加到基礎飲食中。通過飼料施用的oxbc是商業預混物產品oxc-βtm牲畜10％。將oxbc
以玉米為代價添加到基礎飲食中。從妊娠第85天至第112天，母豬都被圈養在妊娠欄(gestation stall)中，并且每天提供3.0kg的飼料。在產前2天，母豬被運送到產仔箱，并且被隨意喂食，直到泌乳第21天斷奶。
[0082]
表1.基礎飲食的組成
[0083][0084]
*
預混物每千克飲食提供以下：va(維生素a)12000iu、vd(維生素d)3000iu、ve(維生素e)90iu、vk(維生素k)4.0mg、vb1(維生素b1)3.0mg、vb2(維生素b2)10mg、vb6(維生素b6)4mg、vb
12
(維生素b
12
)40μg、煙酸40mg、泛酸20mg、葉酸4mg、生物素0.45mg；cu(硫酸銅)125mg、fe(硫酸亞鐵)150mg、i(碘酸鈣)0.25mg、zn(硫酸鋅)100mg、mn(硫酸錳)40mg、se(亞硒酸鈉)0.25mg。
[0085]
表2.基礎飲食的營養含量
[0086]
營養計算水平de(可消化能)3420kcal/kgcp(粗蛋白)17.9％ca(鈣)1.02％總磷0.79％可用的磷0.55％鹽(氯化鈉)0.41％lys(賴氨酸)0.96％met(蛋氨酸)+cys(半胱氨酸)0.57％thr(蘇氨酸)0.66％trp(氨酸)0.23％
[0087]
方法
[0088]
統計分析
[0089]
對于實驗數據，除母豬發情率外，使用spss 21.0(spss公司，芝加哥市，伊利諾伊州，美國)的單向方差分析程序確定之間是否存在顯著差異。當發現總體差異時，使用lsd多范圍檢驗來確定平均值之間的差異。使用卡方檢驗分析母豬發情率。結果表示為平均值和sem，但母豬發情率以百分比表示。
[0090]
概率《0.05被認為是顯著的，概率》0.05并且《0.10被認為是之間的趨勢。
[0091]
母豬生產力-后代
[0092]
從分娩(出生)到斷奶測量并記錄后代的以下標準：出生數量(總正常活后代(出生體重大于0.7kg；無出生缺陷)、死胎、木乃伊胎、弱活后代(出生體重小于0.7kg；無出生缺陷)、或活畸形后代(一種或多種出生缺陷)。記錄每個單獨仔豬的出生體重，并且計算每窩仔豬的平均出生體重。還記錄了斷奶仔豬數量、斷奶前仔豬存活率和仔豬腹瀉率。
[0093]
在斷奶時(泌乳第21天)，記錄斷奶仔豬數量、腹瀉發生率和每個單獨仔豬體重。還測量了每窩仔豬平均體重、仔豬平均每日增重、和仔豬存活率。
[0094]
血液樣品
[0095]
從來自每種飲食的10頭母豬(n＝10)的子集中收集血液樣品。隨機選擇母豬，在性交后85天，以及產后0天、14天和21天通過耳靜脈穿刺收集血液(10ml)。在每個時間段對相同子集母豬進行放血。
[0096]
在所有4個時間點(性交后85天(“妊娠第85天”)和產后0天(“泌乳第0天”)、14天(“泌乳第14天”)和21天(“泌乳第21天”)處理母豬血液獲得白細胞吞噬活性。使用流式細胞儀使用吞噬測試試劑盒并且按照以下的程序測定白細胞吞噬活性：leonard等人,effect of maternal fish oil and seaweed extract supplementation on colostrum and milk composition,humoral immune response,and performance of suckled piglets[補充母體魚油和海藻提取物對初乳和奶成分、體液免疫反應、和哺乳仔豬性能的影響].journal of animal science[動物科學雜志],88,2988-2997(2010)。
[0097]
初乳和奶樣品
[0098]
從選擇用于血樣血液取樣收集的相同母豬收集初乳和奶。肌肉內注射20iu催產素后，產后12小時內、泌乳第14天和泌乳第18天，從功能性腺體收集初乳。每次收集大約30ml。評估泌乳第14天的初乳和奶的體細胞計數、營養成分、免疫球蛋白水平、和細胞因子水平。使用流式細胞儀(賽默飛世爾(thermo fisher)，美國)測量初乳和奶中體細胞計數。
[0099]
通過gc-ms測量泌乳第18天奶中oxbc含量。在泌乳第14天，通過elisa測量初乳和奶中的scd14(可溶性cd14)、細胞因子(tnfα、il-8、il-18)、白三烯b4、igm、iga、和igg水平。
[0100]
還測定了初乳和奶的營養成分，包括脂肪、蛋白質和乳糖。
[0101]
結果
[0102]
妊娠或泌乳母豬
[0103]
泌乳期間平均每日飼料攝入量、妊娠第110天和泌乳第21天的背部脂肪厚度、和泌乳期間背部脂肪厚度減少在之間沒有統計學顯著差異(表3)。然而，adfi和背部脂肪厚度都存在劑量依賴性趨勢。在整個喂食期間，在母豬中沒有發現食欲不足和臨床疾病的跡象。
[0104]
表3.經產母豬的妊娠晚期和泌乳期間飲食oxbc補充對哺乳期間飼料攝入量和母豬背脂肪厚度的影響
[0105][0106][0107]
母豬生產力-后代
[0108]
出生和發情率
[0109]
oxbc不影響每窩出生、活產、死產和木乃伊以及畸形仔豬總數。相比對照組ctr1，有較少的弱仔豬和增加的每窩出生體重的趨勢，并且s1和s2組發情率趨勢分別高5％和6％。
[0110]
表4.經產母豬的妊娠晚期和泌乳期間飲食oxbc補充對后代的影響
[0111] ctr1s1s2p值母豬總數505050 每窩總出生數11.40
±
0.3711.48
±
0.3111.25
±
0.330.907每窩活產仔數10.60
±
0.3310.55
±
0.2810.58
±
0.330.995每窩弱仔豬**數0.40
±
0.100.35
±
0.080.27
±
0.090.689每窩死胎和木乃伊胎數0.67
±
0.160.77
±
0.170.56
±
0.140.630每窩畸形仔豬數0.12
±
0.050.16
±
0.070.17
±
0.070.852初生窩重，kg16.45
±
0.4617.10
±
0.3516.97
±
0.530.580個體出生體重，kg1.47
±
0.031.51
±
0.031.53
±
0.030.421斷奶后7天內母豬發情率(％)85.790.791.70.886
[0112]
**弱仔豬是指出生時《0.70kg的仔豬。
[0113]
斷奶
[0114]
表5顯示了飲食oxbc補充有助于提高斷奶時的窩重和仔豬個體重量，增加斷奶前存活率并且降低腹瀉率。
[0115]
表5.經產母豬的妊娠晚期和泌乳期間飲食oxbc補充對后代的影響
[0116][0117][0118]
血液樣品
[0119]
如表6所述，母豬全血中的中性粒細胞吞噬活性不受飲食oxbc補充的影響。
[0120]
無論飲食如何，中性粒細胞吞噬活性在妊娠第85天最高，在分娩時降至最低，并且在泌乳第14天和泌乳第21天反彈至較高值。
[0121]
表6.經產母豬的妊娠晚期和泌乳期間飲食oxbc補充對母豬全血中性粒細胞吞噬活性的影響
[0122] ctr1s1s2p值母豬總數101010 妊娠第85天91.14
±
1.9690.88
±
2.8690.35
±
1.180.849分娩70.40
±
2.9775.08
±
2.8874.87
±
2.160.404泌乳第14天80.34
±
3.4380.67
±
3.3883.39
±
3.190.477泌乳第21天84.80
±
2.7485.41
±
2.1886.40
±
1.660.879
[0123]
初乳和奶樣品
[0124]
體細胞計數(scc)
[0125]
如表7和表8所述，盡管經產母豬的初乳和奶中營養成分和體細胞計數(scc)的差異并沒有上升到統計學顯著的高度，但仍有增加％脂肪和降低scc的趨勢。在泌乳第14天，隨著飲食oxbc水平增加，奶中乳糖濃度有增加的趨勢(p＝0.071)。
[0126]
表7.經產母豬的妊娠晚期和泌乳期間飲食oxbc補充對母豬初乳營養成分和體細胞計數(scc)的影響
[0127]
[0128][0129]
表8.經產母豬的妊娠晚期和泌乳期間飲食oxbc補充對母豬第14天奶營養成分和體細胞計數(scc)的影響
[0130] ctr1s1s2p值母豬總數101010 脂肪，％4.96
±
0.405.64
±
0.315.30
±
0.160.300固體脂肪，％11.40
±
0.3210.81
±
0.2511.10
±
0.230.195蛋白質，％3.86
±
0.104.02
±
0.114.13
±
0.080.173乳糖，％5.67
±
0.135.93
±
0.126.09
±
0.110.071scc，
×
106/ml4.03
±
0.303.52
±
0.333.34
±
0.320.300
[0131]
免疫球蛋白水平
[0132]
表9和表10顯示了妊娠晚期和泌乳期間飲食oxbc補充對經產母豬初乳和奶中免疫球蛋白濃度的影響。在泌乳第14天oxbc補充飲食顯著提高了初乳免疫球蛋白水平，包括奶中igm、iga和igg(p《0.05)，以及igm(p《0.05)和igg水平(p＝0.052)。關于劑量反應，s2組在泌乳第14天初乳中的igm、iga和igg水平和泌乳第14天奶中的igg和igm水平高于s1組。
[0133]
表9.經產母豬的妊娠晚期和泌乳期間飲食oxbc補充對母豬泌乳第14天初乳免疫球蛋白水平的影響
[0134] ctr1s1s2p值母豬總數101010 igm，mg/ml2.55
±
0.35b4.38
±
0.52a4.52
±
0.42a0.005iga，mg/ml2.39
±
029b4.34
±
0.40a5.11
±
0.52a0.001igg，mg/ml26.91
±
2.09b28.97
±
1.89
ab
33.22
±
1.62a0.024
[0135]
表10.經產母豬的妊娠晚期和泌乳期間飲食oxbc補充對母豬第14天奶免疫球蛋白水平的影響
[0136] ctr1s1s2p值母豬總數101010 igm，mg/ml0.024
±
0.005b0.051
±
0.010a0.057
±
0.011a0.023iga，mg/ml0.26
±
0.060.34
±
0.070.29
±
0.080.764igg，mg/ml1.26
±
0.121.70
±
0.292.02
±
0.300.052
[0137]
細胞因子水平
[0138]
如表11和表12所示，妊娠晚期和泌乳期間飲食oxbc補充降低了初乳中的tnf-α和il8水平，以及奶中的tnf-α和il18水平(p《0.05)，而在泌乳第14天，其傾向于增加奶中的scd14水平(p＝0.055)。關于劑量反應，與喂食4mg/kg oxbc飼料的母豬相比，喂食8mg/kg的
oxbc飲食的母豬在泌乳第14天的初乳中tnf-α、il8水平在數量上降低，奶中tnf-α水平降低，并且奶中scd14水平增加，但兩個oxbc組之間的這些指標沒有統計學差異(p》0.05)。
[0139]
表11.經產母豬的妊娠晚期和泌乳期間飲食oxbc補充對母豬初乳細胞因子水平的影響
[0140] ctr1s1s2p值母豬總數101010 tnf-α，ng/ml0.34
±
0.13a0.10
±
0.03b0.08
±
0.02b0.044il8，pg/ml1079.06
±
113.80a982.27
±
68.81
ab
605.46
±
67b0.001il18，pg/ml97.39
±
14.25109.09
±
7.0878.52
±
16.820.338scd14，ng/ml15.36
±
1.3518.90
±
2.6725.43
±
9.350.185ltb4，ng/ml1.40
±
0.360.98
±
0.151.10
±
0.350.498
[0141]
表12.經產母豬的妊娠晚期和泌乳期間飲食oxbc補充對母豬奶細胞因子水平的影響
[0142][0143][0144]
oxbc水平
[0145]
通過測量葛讓酸含量測量oxbc含量。在泌乳第18天，收集了10頭母豬/的30ml奶/母豬。然而，葛讓酸測量的最低奶需求為200ml。因此，混合了來自10頭母豬的相同體積(20ml)以獲得足夠的體積(200ml)進行單個測量。ctr1組、s1組和s2組奶中的葛讓酸含量分別為5.99ng/ml、7.69ng/ml、和11.02ng/ml。ctr1、s1和s2組奶中oxbc含量的相應計算水平分別為0.30mg/ml、0.38mg/ml、和0.55mg/ml。
[0146]
結論
[0147]
在整個喂食期間，在母豬沒有發現食欲不振和臨床疾病的跡象。斷奶時的窩重和仔豬個體重量增加，表明妊娠晚期和泌乳期間oxbc補充飲食提高了經產母豬的泌乳性能。改良的機制可以通過改良的免疫球蛋白水平和初乳和奶的促炎因子水平降低來解釋。因此，妊娠晚期和泌乳期間的飲食oxbc補充對經產母豬的免疫狀態顯示出有益的影響，這將支持其哺育后代的健康。
[0148]
實例2.飲食oxbc對泌乳奶牛的乳腺炎的影響
[0149]
進行了以下研究，以調查飲食oxbc補充預防或減少奶牛的乳腺炎的能力。
[0150]
材料
[0151]
選擇三十頭患有臨床乳腺炎的泌乳荷斯坦奶牛(體重：655.3
±
81.9kg)進行試驗。在開始試驗之前，使母牛適應10天，以便有足夠的時間確定基線體細胞計數(scc)。將母牛平等地分到三個飲食組之一(每個組10只動物)：對照、低劑量oxbc、和高劑量oxbc。
[0152]
每個組的基礎飲食是全混合日糧(tmr)。對照組(ctr2)的動物接受了基礎飲食，沒有補充劑或藥物；低劑量oxbc組(t1)的動物接受了補充30ppm oxbc的基礎飲食；以及高劑量oxbc組(t2)的動物接受了補充60ppm oxbc的基礎飲食。研究期持續45天，包括10天的適應期。
[0153]
方法
[0154]
每頭母牛都有耳標以識別。所有動物均按照農場的標準操作程序(sop)進行管理，包括疫苗接種、健康干預、飲食配方和飼料來源。
[0155]
評估標準包括以下內容：每天測定各組動物的干物質攝入量(dmi)；每2天記錄每只動物產奶的總重量(kg)(奶產量)；以及測量每周從每只動物收集的奶樣品的體細胞計數(scc)、細菌總數(tbc)、和蛋白質、脂肪和乳糖含量。
[0156]
對獲得的數據進行sas的glm程序(版本9.4；賽仕軟件研究所(sas institute)，美國)。duncan顯著差異檢驗程序用于確定平均值之間的差異。在p≤0.05宣稱有顯著性。
[0157]
結果
[0158]
干物質攝入量(dmi)
[0159]
ctr2組的dmi為18.48千克/天，而t1組和t2組的dmi分別為17.96千克/天和18.07千克/天。
[0160]
奶產生
[0161]
如圖2所示，ctr2組和t1組或t2組之間沒有觀察到顯著差異。從第5天至第25天，奶產生略有增加。然而，奶產生從第27天降低。
[0162]
奶中脂肪、蛋白質和乳糖。體細胞計數(scc)。
[0163]
表13示出了oxbc對奶中脂肪、蛋白質和乳糖的量以及體細胞計數(scc)的影響。除第28天和第35天的蛋白質含量(p《0.05)外，三組(ctr2、t1、和t2)之間未觀察到顯著差異(p》0.05)。t1組的乳蛋白含量高于ctr2組和t2組。盡管各組間無統計學顯著差異，但t1組的scc傾向于低于ctr2和t2組。
[0164]
表13.oxbc對奶含量和scc的影響。
[0165]
天含量ctr2t1t2semp值0脂肪，％4.834.965.030.520.960蛋白質，％3.693.523.490.160.620乳糖，％4.514.814.660.130.260scc，
×
1000/ml38404050400911520.997脂肪，％3.843.683.320.440.667蛋白質，％3.813.643.440.140.177乳糖，％4.664.914.940.090.067scc，
×
1000/ml26071659246110220.7514脂肪，％4.424.333.790.390.47
biotechnology[生物技術趨勢],27,486-493)。
[0175]
總之，補充30ppm oxbc可顯著提高乳蛋白含量，并且導致奶scc降低，而補充60ppm的oxbc對scc無顯著影響。此外，補充30ppm和60ppm oxbc均減少了奶的tbc。
[0176]
實例3-飲食oxbc對泌乳奶牛畜中亞臨床乳腺炎的的影響
[0177]
進行了以下研究，以進一步調查飲食oxbc補充對奶牛乳腺炎的能力。
[0178]
陰性對照干預研究
[0179]
該陰性對照干預研究是使用來自位于新西蘭北島的4個商業奶畜來進行的。
[0180]
根據最近一次畜(dhia)測試中scc》200,000個細胞/毫升并且在采樣前14天內沒有使用抗微生物劑或非甾體類抗炎藥的記錄來選擇母牛。檢查了母牛的乳頭末端，并且從每個單獨四分體收集了用于細菌學和scc測定的奶樣品。
[0181]
scc》200,000個細胞/毫升并且從中分離出細菌的四分體入組。將母牛按年齡(2歲與》2歲)分段，按畜測試scc進行排序，然后在連續成對的母牛中隨機分配喂食0.5kg顆粒化谷基飼料，該飼料包含或不包含3g oxbc預混物。本研究中使用的oxbc是商業產品oxc-β
tm
牲畜10％。牧主每天評估母牛，對臨床乳腺炎癥狀明顯的母牛進行微生物學培養取樣，并且按照正常農場方案進行。在開始后21和42天，對入組四分體進行細菌學和scc重新取樣。
[0182]
與對照喂食的母牛相比，在母牛飲食中以oxc-β
tm
牲畜10％的形式摻入oxbc 42天增加了細菌治愈率(例如，消退亞臨床乳腺炎并且減少臨床乳腺病的風險)。這些影響被解釋為補充oxbc的母牛的免疫功能改良的結果。通過補充oxbc提供足夠水平的免疫支持β-胡蘿卜素共聚物有助于免疫系統在oxbc組中以最佳水平發揮作用。再次注意到，oxbc已被證明沒有抗微生物活性，因此細菌感染數量的減少并不是由于產品的任何直接抗微生物活性引起的。
[0183]
材料和方法
[0184]
動物階段的開始
[0185]
動物的選擇和取樣發生在畜測試后6天和15天之間。一旦獲得微生物學和scc結果，就開始喂食，并且將母牛分配給。
[0186]
動物
[0187]
每頭母牛都由一個單獨的管理編號(“母牛編號”)進行識別，該編號在每個畜中都是唯一的。通過塑料耳標進行識別。此外，所有研究動物均具有終身身份和電子識別(eid)標簽。不需要適應環境。母牛接受在畜中實施的正常預防性健康計劃。表15顯示了研究中母牛的納入標準。
[0188]
表15.納入標準
[0189][0190]
畜
[0191]
畜基于以下入組：
[0192]
■
存在個體母牛識別系統，并且愿意允許電子訪問母牛記錄；
[0193]
■
愿意遵循實驗方案；
[0194]
■
畜測試(dhia)數據可用；以及
[0195]
■
愿意記錄所有動物健康事件(代謝紊亂、乳腺炎、跛行、胎盤滯留、和子宮感染)以及動物健康的細節。
[0196]
動物環境、喂食和管理
[0197]
這些母牛是在新西蘭乳業管理系統上進行管理的，即在牧場上管理，而不是圈養。母牛主要被喂食黑麥草/白三葉草牧場草地。補充喂食是由牧主或管理者酌情決定的，但是兩個組中的母牛的管理方式使他們可以平等地獲得任何補充飼料(參見表17)。水可以隨意使用。
[0198]
圖3給出了研究期間ruakura氣象站(lat-37.7739，長175.3052)的日最高和最低溫度以及24小時降雨量。該數據來自niwa(美國國家水與大氣研究所(national instituted of water and atmospheric research))。
[0199]
母牛受到畜正常的飼養、健康和管理實踐的約束，但伴隨療法與上面和下面確定的療法一致的情況除外。母牛被分組管理，母牛未入組研究。該研究中入組母牛按照研究地點的正常實踐擠奶，每天兩次。
[0200]
研究結束時，研究中的所有母牛都保留在原始畜中。
[0201]
程序
[0202]
牧主和工作人員對動物被分配的組是致盲的。技術人員每天到農場進行喂食，飼料用顏編碼，并且沒有按類型標記。農場表同樣地進行顏編碼。因此，提供飼料的技術人員、牧主或他們的工作人員都不知道分配。
[0203]
樣品被分配了一個唯一的標識符，使得實驗室工作人員(lic，cognosco)不知道動物的身份或組。
[0204]
臨床乳腺炎的診斷由農場主、管理者和/或工作人員負責。由于這些個體是致盲的，臨床乳腺炎診斷不應出現偏差。
[0205]
在畜中，將母牛按年齡(2歲或》2歲)分段，按先前的畜測試scc進行排序，然后隨機分配到2個組。
[0206]
母牛數據通過從電子數據庫(mindapro，lic，紐斯泰德，漢密爾頓，新西蘭)下載數據并且加載到專用數據庫(access，微軟，華盛頓州，美國)中來獲得。隨機化后，創建了起草用于初步取樣的母牛清單，并且提供給牧主/管理者。
[0207]
這些母牛被交給經過訓練的研究技術人員，并且評估了乳頭末端評分(mein等人,evaluation of bovine teat condition in commercial dairy herds:1.non-infectious factors[對商業奶畜中牛乳頭狀況的評估：1.非感染性因素].(2001))。在此時間點排除了那些具有嚴重乳頭末端損傷的動物(評分＝“非常粗糙”)。此外，評估了抗微生物劑和nsaid的電子和農場記錄，并且排除了前14天的任何母牛。
[0208]
初步取樣
[0209]
在無菌乳頭末端準備后，從每個四分體的每頭選定母牛收集兩份奶樣品(約5ml和約25ml)。這些樣品在4℃下保存，并且在收集后24小時內進行微生物學處理，并且在收集后72小時內提交四分體水平scc測定。
[0210]
確認有一個或多個四分體感染的母牛(即存在公認的細菌乳房內感染且四分體水平scc》200,000個細胞/毫升)被納入研究中，并且隨機分配給上述。
[0211]
[0212]
分配給oxbc組的母牛每天喂食約0.5kg的含有oxbc的谷物濃縮物顆粒持續42天。對照組每天喂食約0.5kg不含oxbc的谷物濃縮物持續42天。
[0213]
谷物濃縮物顆粒由商業飼料廠(seales winslow，莫林斯維爾，新西蘭)配制和混合。該顆粒含有25％小麥、25％玉米、30％棕櫚粕、8％布羅爾(broll)、4％干酒糟、8％糖蜜、和0.02％甜味劑(魯瑪甜(rumasweet))。飲食包括0.6％的oxc-β
tm
牲畜10％預混物。因此，給動物每天每頭母牛喂食大約3g oxc-β
tm
牲畜10％商品，相當于每頭母牛每天0.3g oxbc活性物。
[0214]
通過將適當的飼料類型放入擠奶室中的個體母牛飼料箱中進行喂食。這是由研究技術人員每天訪問每個農場時進行的。飼料是用一個接在柱子上的量筒運送的，這樣技術人員就可以在擠奶室中站在母牛后面，將飼料運送到母牛前面的飼料槽中。為了便于識別研究動物，用兩種不同顏的“尾漆”標記母牛，這兩種顏對應于飼料類型。在喂食的每一天，分別記錄喂食給每只入組動物的飼料運送。此外，還記錄了對每只動物是否消耗飼料和未消耗飼料的目視評估。通過在每天喂食之前和之后稱量飼料袋，計算每個畜中每天運送給每組的飼料質量，以反復核對是否運送了適當的飼料質量。表16給出了飼料的每日攝入量的估計平均值(
±
標準差(sd))。
[0215]
表16.以千克/母牛/天提供對照和含有oxbc的乳制品顆粒的每日平均量(喂食時)
[0216][0217]
取樣后程序和觀察
[0218]
在開始后的第21天和第42天，在針對微生物學和scc進行無菌乳頭末端準備后，從每個入組四分體收集四分體水平奶樣品。
[0219]
微生物學由莫林斯維爾anexafvc的經過訓練的技術人員進行。根據美國國家乳腺炎委員會(national mastitis council,usa)推薦的程序進行微生物學。簡而言之，將10μl奶涂在含有0.1％菊粉(fort richard，奧克蘭，新西蘭)的5％血瓊脂板的四分體上，并且在37℃下孵育48小時。
[0220]
基于菌落形態、革蘭氏染和過氧化氫酶反應確定細菌屬。用凝結酶試驗測試了革蘭氏陽性、過氧化氫酶陽性分離株，以將cns與金黃葡萄球菌(s.aureus)區分開。通過七葉苷反應、camp測試以及在菊粉和sf肉湯中的生長評估革蘭氏陽性、過氧化氫酶陰性。在macconkeys瓊脂、三鐵糖、檸檬酸鹽上對大腸菌進行傳代培養，并進行運動性測試。如果使用常規的生化測試不清楚分離株的身份，則提交分離株進行maldi tof測試。使用從專用數據庫中生成的唯一樣品標識號來識別樣品。
[0221]
在某些情況下，從奶樣品中分離出2種不同的細菌物種。這些是單獨報告的，并且用于分析新的乳房內感染率。然而，在報告中，當與次要病原體(例如，凝固酶陰性葡萄球菌(staphylococcus)(cns)或棒狀桿菌屬(corynebacterium)物種)結合分離時，它們被編碼為混合主要感染(即，主要病原體(例如，金黃葡萄球菌(staphylococcus aureus)、乳房鏈球菌(streptococcus uberis)、停乳鏈球菌(streptococcus dysgalactiae))，或在存在2種不同的次要病原體的情況下，被編碼為混合次要感染。
[0222]
在lic實驗室(riverlea，哈密爾頓)使用熒光光學方法(foss，希勒羅德，丹麥)測定scc。結果被轉發給cognosco，作為逗號分隔變量(csv)文件，這些文件已加載到專用數據庫中
[0223]
研究期間沒有發生不良事件。正如預期的那樣，如下所述，在研究過程中對許多動物進行了臨床疾病的(例如，乳腺炎和跛行)。在研究過程中，沒有動物表現出全身性疾病，因此任何入組動物都沒有發生其他獸醫訪問。
[0224]
研究期間伴隨療法
[0225]
在動物福利被認為有風險的情況下施用含有抗生素或非甾體抗炎藥(nsaid)的產品。記錄所有的原因和類型。評估每種對研究結果的影響。
[0226]
在研究期間，沒有入組動物死亡或安樂死，因此沒有進行尸檢。
[0227]
從研究中去除母牛的原因
[0228]
開始喂食后第35天，一頭母牛在擠奶過程中受傷。由于這種傷害，在研究的第35天
和第42天之間，這頭母牛無法被帶到擠奶室。因此，這頭母牛在這段時間內沒有被喂食適當的飼料，在并且在第42天沒有取樣。無法確定該母牛的四分體的細菌學和scc，并且該母牛被排除在最終分析之外。
[0229]
結果
[0230]
這項研究的實驗單元是四分體。
[0231]
基于在先前的畜測試中scc升高，總共選擇了267頭母牛進行初步評估和取樣。其中，227頭進行奶取樣。其余的40頭沒有取樣，因為它們已經被剔除、沒有出現、在初步評估時被診斷患有臨床乳腺炎、或者乳頭末端很粗糙。七十一頭母牛沒有符合四分體水平入組標準的四分體(即，四分體水平scc》200,000個細胞/毫升并且培養時存在細菌)，并且沒有入組。因此，156頭母牛的一個或多個四分體符合入組標準，并且在年齡分段后被分配給飼料。
[0232]
分別有77頭與79頭母牛以及135個四分體與129個四分體被分配給對照和喂養組(表17)。最初取樣后，但在開始喂食前，三頭母牛被診斷患有臨床乳腺炎。在開始喂食之前，這些母牛被排除在研究之外。
[0233]
兩頭母牛在入組后用全身性抗微生物劑跛行(一頭在組，一頭在對照組，兩頭都只有一個入組四分體)。入組后，共有5頭母牛和7個四分體被診斷患有臨床乳腺炎：來自對照組的4頭母牛和6個四分體；和來自組的1頭母牛和1個四分體。
[0234]
表17.被選擇并且入組研究評估的母牛的宿命口服補充oxbc對亞臨床乳腺炎的影響
[0235][0236]
結果變量
[0237]
關鍵結果變量是細菌治愈率。細菌治愈率被定義為在開始前存在的細菌未從d 21或d 42樣品中分離出來的情況下發生的。細菌治愈被定義為即使在后取樣時識別出不同細菌物種也會發生。在開始喂食42天內被診斷患有臨床乳腺炎的入組四分體被定義
為細菌治愈率失敗。在四分體的奶樣品被定義為受污染(n＝3)時，或者在由于動物未出現而未采集樣品(n＝1)時，則無法定義四分體后的狀態，并且因此細菌治愈被編碼為空。
[0238]
還分析了四分體和母牛水平scc、奶產量、和臨床乳腺炎發病率。
[0239]
統計設計和分析
[0240]
采用卡方分析針對分類變量評估分配給兩個組的動物的平衡，分類變量包括畜、年齡組(分類為小母牛(初產)與母牛(經產))、品種(將≥12/16的荷蘭牛分類為荷蘭牛，否則為雜交牛或娟姍牛)、以及開始喂食時產奶天數(分類為15天-60天、61天-75天、76天-90天、≥91天))；以及開始喂食前的畜測試中母牛水平scc自然對數的單向方差分析。
[0241]
多變量模型用于評估效應(即，oxbc與無oxbc補充(對照))。建模過程中考慮了潛在的混雜變量，包括年齡(即初產與經產)、品種(荷蘭牛與其他)、先前四分體水平scc、四分體位置(即后腺體與前腺體)、開始喂食時產奶天數(dim)以及乳房內感染類型(分類為主要與次要)。使用卡方分析(用于分類變量)或邏輯回歸(對于連續變量)，對所測試的細菌治愈率的每個潛在的解釋變量進行初步雙變量分析。然后將那些相關的變量(p《0.2)用于手動正向逐步建模過程。在最終模型中保留的顯著的(即p《0.05)或被去除的變量導致組效應的系數變化超過20％。對于細菌治愈率，最終模型是混合效應二元邏輯回歸模型，其中包括母牛作為隨機效應。由于相對較少的母牛入組了多個四分體，試圖創建3水平模型(即畜中的母牛中的四分體)導致模型無法收斂。請注意，由于沒有初產動物符合一個畜的入組標準(speldhurst)，因此包括年齡在內的模型也無法收斂。因此，該變量從建模中刪除。對于初步邏輯回歸模型，使用hosmer lemeshow測試、鏈路測試以及通過在納入/排除變量時評估bic的變化來評估模型擬合。數據報告為效應的優勢比(or)以及估計邊際平均值和95％置信區間。
[0242]
四分體水平scc數據是在多水平重復測量廣義線性回歸建模之前轉換的自然對數(ln)，該模型的腺體嵌套在牛中嵌套的母牛中。固定效應包括組和相對于喂食開始的天數(即d 0、21、42)。與天數相互作用強制納入模型。估計邊際平均值來自最終模型，并且使用成對比較且使用bonferroni校正對組的邊際平均值和天進行配對比較。
[0243]
使用邏輯回歸分析了開始喂食后42天內臨床乳腺炎診斷的發生率，計算標準誤差按畜聚類。
[0244]
四分體水平scc還被記錄為《200,000個細胞/毫升或≥200,000個細胞/毫升，然后使用多水平重復測量邏輯回歸模型分析了該分類變量，該模型的腺體嵌套在畜中嵌套的母牛中。固定效應包括組和相對于喂食開始的天數(即d 21、42)。注：根據設計，研究中僅包括scc》200,000個細胞的四分體，因此根據定義，所有四分體的scc大于第0天。與天數相互作用強制納入模型。估計邊際平均值來自最終模型，并且使用bonferroni校正對組的邊際平均值和天進行配對比較。
[0245]
使用多水平重復測量廣義線性回歸模型分析了來自臨開始前以及期間或恰期后下一次畜測試的母牛復合(畜測試)scc、奶產量(千克/母牛/天)和奶固體(即，乳脂和乳蛋白千克總和/母牛/天)。對scc進行自然對數轉換以進行分析。固定效應包括以及測試是在喂食開始之前還是之后。與時間相互作用強制納入模型。將其他解釋性變量(例如，初產與經產；編碼為荷蘭牛與其他的品種；畜測試中的dim)提供給模型，并且包括顯著的(p《0.05)和/或導致系數變化》20％的變量。估計邊際平均值來
喂食時dim15-60d2024440.81 61-75d181937
??
76-90262147
??
91+d121325 [0256]
描述性微生物學
[0257]
在開始喂食前(第0天)和開始喂食后d 21和d 42，次要病原體(即cns和棒狀桿菌屬物種)是最常見的分離株(表21)。
[0258]
表20顯示了按相對于開始喂食的天數計的分配給具有oxbc(對照)或含有添加的oxbc的補充飼料的母牛的四分體的細菌診斷。d 0是開始喂食前的四分體水平樣品結果，而d 21和42是開始喂食后收集的樣品。
[0259]
表20.細菌診斷
[0260][0261]1混合主要感染是主要病原體(即金黃葡萄球菌、停乳鏈球菌或乳房鏈球菌)和次要病原體(即cns或棒狀桿菌屬物種)均可從中分離的奶樣品
[0262]2混合次要感染是從中分離出兩個次要病原體(即cns或棒狀桿菌屬物種)的奶樣品
[0263]
細菌治愈率
[0264]
初步雙變量模型發現細菌治愈率與、年齡、dim、前后腺、畜和四分體水平scc之間存在關聯。品種和前細菌學物種與細菌學治愈率在雙變量水平上無關。
[0265]
在最終模型中，僅組保留在模型中。與來自喂食對照飼料的母牛的四分體相比，喂食oxbc的母牛中有更多四分體經受細菌感染治愈(來自oxbc喂食與對照喂食的母牛的四分體分別為13.9(95％ ci 4.1-23.7)％和與6.9(95％ ci 4.8-9.1)％；p＝0.02；優勢比＝2.18(95％ci 1.14-4.17))。
[0266]
四分體水平scc
[0267]
對于四分體水平ln scc，不存在(p＝0.34)或天數(p＝0.12)的效應，也不存
在與天數相互作用(p＝0.17)(圖4和圖5)。
[0268]
(p＝0.56)或天(0.64)對scc《200,000個細胞/毫升的四分體比例沒有影響。然而，存在與天數相互作用(p＝0.05；圖6)。已消退的四分體相對于未消退的四分體更多(9/52(17.3％)與43/463(9.3％))具有scc《200,000個細胞/毫升的趨勢(p＝0.07)。
[0269]
臨床乳腺炎發病率
[0270]
在開始喂食后42天內，喂食oxbc的母牛中患有臨床乳腺炎的四分體與對照喂食的母牛的四分體相比較少，[1/129(0.78(精確二項95％ ci 0.02-4.24)％)]與6/135[4.44(精確二項95％ ci 1.65-9.42)％)]。喂食oxbc的母牛的四分體與喂食對照飲食的母牛的四分體相比的乳腺炎診斷優勢比為0.17(95％ ci 0.03-0.82)。組中被診斷患有乳腺炎的一頭母牛的四分體是在開始喂食后41天被診斷出。這頭母牛長期感染金黃葡萄球菌。
[0271]
母牛水平奶質量和產量
[0272]
開始喂食后，母牛水平(畜測試)scc下降(p《0.001)，但不存在效應(p＝0.66)，也不存在與時間相互作用(p＝0.56；圖7和圖8)。
[0273]
奶產量不受oxbc喂食的影響(oxbc與對照喂食組的母牛分別為22.9(95％ ci 21.0-24.8)與23.1(95％ ci 21.2-25.1)千克/母牛/天；p＝0.71)。奶產量在后產生記錄較低(后與前畜測試分別為21.0(95％ ci 19.0-22.9)與25.0(95％ ci 23.1-27.0)千克/母牛/天；p《0.001)。不存在與時間相互作用(p＝0.84；圖6)。與雜交牛或娟姍牛相比，荷蘭牛產生更多的奶(荷蘭牛與其他品種分別為24.4(95％ ci 22.4-26.4)與22.3(95％ ci 20.3-24.2)千克/母牛/天；p＝0.005)，并且初產動物比經產動物產生較少的奶(初產與經產母牛分別為19.2(95％ ci 16.5-21.8)與23.4(95％ ci 21.6-25.3)千克/母牛/天；p《0.001)。
[0274]
乳脂百分比不受oxbc喂食的影響[oxbc與對照喂食組的母牛分別為4.72(95％ ci 4.49-4.96)％與4.54(95％ ci 4.41-4.89)％；p＝0.41；圖7a]。乳脂百分比在后產生記錄較低[后與前畜測試分別為4.60(95％ ci 4.36-4.82)％與4.78(95％ ci 4.54-5.01)％；p＝0.04]。不存在與時間相互作用(p＝0.68；圖7b)。與雜交牛或娟姍牛相比，荷蘭牛的乳脂百分比較低[荷蘭牛與其他品種分別為4.55(95％ ci 4.30-4.80)％與4.76(95％ ci 4.53-5.00)％；p＝0.05]。
[0275]
乳蛋白百分比不受oxbc喂食的影響[oxbc與對照喂食組的母牛分別為3.71(95％ ci 3.64-3.78)％與3.71(95％ ci 3.65-3.78)％；p＝0.92；圖8a]。乳蛋白百分比在后產生記錄較低[后與前畜測試分別為3.66(95％ ci 3.59-3.72)％與3.77(95％ ci 3.70-3.83)％]；p＝0.003]。不存在與時間相互作用(p＝0.83；圖8b)，并且不存在品種效應(p＝0.80)。
[0276]
討論
[0277]
這項對照隨機干預研究證明，相對于對照喂食的母牛，有亞臨床乳房內感染的泌乳奶牛口服補充oxbc導致細菌感染的治愈率提高，并且隨后的臨床乳腺炎風險減少。oxbc補充對四分體或母牛水平scc或奶產量均無影響。
[0278]
總共分別分配了135個和129個四分體給(oxbc)和對照組。對照組細菌治愈率僅為7％，而組為14％。當前研究中更嚴格的入組標準可能導致選擇更顯著的亞臨床感
染進行研究，并且可能在對照組中產生了較低的細菌治愈率。
[0279]
細菌感染的消退與較低的四分體水平scc相關。然而，盡管喂食oxbc的母牛的四分體的消退率較高，但飼料組之間的四分體或母牛水平scc沒有差異。還值得注意的是，在第42天，不到20％的已消退的四分體的scc《200,000個細胞/毫升，這說明盡管細菌病原體明顯清除，但乳腺仍存在長期炎癥。
[0280]
結論是，泌乳奶牛口服補充oxbc導致有亞臨床乳腺炎的四分體的細菌治愈率和隨后的臨床乳腺炎發病率高于喂食沒有額外oxbc的對照飲食的母牛的四分體。oxbc對奶產量或成分沒有影響。
[0281]
其他實施例
[0282]
雖然本發明已結合其特定實施例予以描述，但應理解其能夠進行進一步修改，并且希望本技術涵蓋通常遵循本發明的原則并且包括與本發明的偏差的本發明的任何變化、用途或改造，這些偏差在本發明所屬技術的己知或常規實踐范圍內，并且可以適用于如上闡明并且在權利要求范圍內出現的基本特征。其他實施例在權利要求中。
技術特征：
1.一種哺乳動物的亞臨床乳腺炎的方法，所述方法包括給所述哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。2.如權利要求1所述的方法，其中該哺乳動物正在泌乳和/或哺育后代。3.如權利要求1或2所述的方法，其中該哺乳動物是牛、馬、狗、貓、綿羊、或豬。4.如權利要求3所述的方法，其中該哺乳動物是奶牛。5.如權利要求4所述的方法，其中該奶牛選自荷斯坦牛、娟姍牛、瑞士褐牛、更賽牛、愛爾夏牛、乳用短角牛、和紅白花荷斯坦牛。6.如權利要求3所述的方法，其中該哺乳動物是豬。7.如權利要求1至6中任一項所述的方法，其中該喂食是在從該哺乳動物收集奶之前的10天至50天。8.如權利要求1至7中任一項所述的方法，其中該喂食在從該哺乳動物收集奶期間進行。9.如權利要求1至8中任一項所述的方法，其中該方法包括改善亞臨床乳腺炎的一種或多種癥狀。10.如權利要求1至8中任一項所述的方法，其中該方法包括減少該哺乳動物中亞臨床乳腺炎進展為完全臨床乳腺炎的頻率。11.一種改良哺乳動物后代健康的方法，所述方法包括在該哺乳動物懷孕后給所述哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。12.如權利要求11所述的方法，其中該哺乳動物選自牛、馬、狗、貓、綿羊、和豬。13.如權利要求12所述的方法，其中該哺乳動物是豬。14.如權利要求11至13中任一項所述的方法，其中該喂食從該哺乳動物懷孕之前的10天至30天開始。15.如權利要求11至13中任一項所述的方法，其中該喂食在該后代的整個妊娠期進行。16.如權利要求14或15所述的方法，該方法進一步包括在該哺乳動物哺育該后代期間，繼續喂食該哺乳動物。17.如權利要求11至16中任一項所述的方法，其中從該懷孕哺乳動物向該后代的被動免疫轉移增強。18.如權利要求11至16中任一項所述的方法，其中該哺乳動物在懷孕之前或之后患有亞臨床乳腺炎或處于亞臨床乳腺炎的風險下。19.一種減少泌乳哺乳動物的生理應激的方法，所述方法包括在該哺乳動物泌乳期間給所述哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。20.如權利要求19所述的方法，其中該哺乳動物正在哺育后代。21.如權利要求19或20所述的方法，其中該哺乳動物是牛、馬、狗、貓、綿羊、或豬。22.如權利要求21所述的方法，其中該哺乳動物是奶牛。23.如權利要求22所述的方法，其中該奶牛選自荷斯坦牛、娟姍牛、瑞士褐牛、更賽牛、愛爾夏牛、乳用短角牛、和紅白花荷斯坦牛。24.如權利要求21所述的方法，其中該哺乳動物是豬。25.如權利要求19至24中任一項所述的方法，其中減少生理應激包括減少該哺乳動物的脂肪損失。
26.如權利要求19至24中任一項所述的方法，其中該哺乳動物在泌乳期間患有亞臨床乳腺炎或處于亞臨床乳腺炎的風險下。27.一種在哺乳動物生下后代后改良該哺乳動物的繁殖性能的方法，所述方法包括給所述哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。28.如權利要求27所述的方法，其中該哺乳動物選自牛、馬、狗、貓、綿羊、或豬。29.如權利要求28所述的方法，其中該哺乳動物是奶牛。30.如權利要求29所述的方法，其中該奶牛選自荷斯坦牛、娟姍牛、瑞士褐牛、更賽牛、愛爾夏牛、乳用短角牛、和紅白花荷斯坦牛。31.如權利要求28所述的方法，其中該哺乳動物是豬。32.如權利要求27至31中任一項所述的方法，其中改良繁殖性能減少了該哺乳動物恢復發情所需的天數。33.如權利要求27至32中任一項所述的方法，其中該哺乳動物在其懷孕之前或之后患有亞臨床乳腺炎或處于亞臨床乳腺炎的風險下。34.一種減少哺乳動物初乳或奶中的細菌計數的方法，所述方法包括給所述哺乳動物喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。35.如權利要求34所述的方法，其中該哺乳動物正在泌乳和/或哺育后代。36.如權利要求34或35所述的方法，其中該哺乳動物是牛、馬、狗、貓、綿羊、或豬。37.如權利要求36所述的方法，其中該哺乳動物是奶牛。38.如權利要求37所述的方法，其中該奶牛選自荷斯坦牛、娟姍牛、瑞士褐牛、更賽牛、愛爾夏牛、乳用短角牛、和紅白花荷斯坦牛。39.如權利要求36所述的方法，其中該哺乳動物是豬。40.如權利要求34至39中任一項所述的方法，其中該喂食是在從該哺乳動物收集奶之前的10天至50天。41.如權利要求34至40中任一項所述的方法，其中該喂食在從該哺乳動物收集奶期間進行。42.如權利要求40或41所述的方法，其中該奶的保質期增加。43.如權利要求34至42中任一項所述的方法，其中該哺乳動物患有亞臨床乳腺炎或處于亞臨床乳腺炎的風險下。44.如權利要求1至43中任一項所述的方法，其中該動物飼料包含0.0001％至0.005％(w/w)類胡蘿卜素-氧共聚物。45.一種生產巴氏殺菌奶的方法，所述方法包括：(i)提供從哺乳動物獲得的奶，其中在從該哺乳動物收集奶之前的至少10天開始至30天的期間，該哺乳動物被喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料；以及(ii)使用低溫巴氏殺菌工藝加工該奶以生產所述巴氏殺菌奶。46.如權利要求45所述的方法，其中在從該哺乳動物收集奶之前的至少30天開始至50天的期間，該哺乳動物被喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。47.如權利要求46所述的方法，其中在從該哺乳動物收集奶之前的至少35天開始至45天的期間，該哺乳動物被喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。48.如權利要求45所述的方法，其中在從該哺乳動物收集奶之前的至少21天開始至42
天的期間，該哺乳動物被喂食包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。49.如權利要求45至48中任一項所述的方法，其中該奶的保質期增加。50.如權利要求45至48中任一項所述的方法，其中該奶中的細菌計數減少。
技術總結
本發明的特征在于用于以下的方法中的包含有效量的類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料：(i)改善亞臨床乳腺炎的一種或多種癥狀；(ii)減少亞臨床乳腺炎進展為完全臨床乳腺炎的頻率；(iii)減少哺乳動物初乳或奶中的細菌計數；(iv)減少哺乳動物的生理應激；(v)改良哺乳動物的繁殖性能；和/或(vi)改良哺乳動物后代健康。本發明的特征還在于一種從哺乳動物生產巴氏殺菌奶的方法，該哺乳動物已被喂食補充有類胡蘿卜素-氧共聚物的動物飼料。氧共聚物的動物飼料。氧共聚物的動物飼料。
