一種發(fā)酵混合物中聚酮類化合物高效初分離方法
1.本發(fā)明涉及發(fā)酵的技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種發(fā)酵混合物中聚酮類化合物高效初分離方法。
背景技術(shù)：
2.黑曲霉為曲霉屬(aspergillus)的真菌，其代謝產(chǎn)物較為豐富，但主要是聚酮類化合物位置，包括萘并-γ-吡喃酮(naphto-γ-pyrones)和α-吡喃酮 (α-pyrones)等[28]。黑曲霉次生代謝產(chǎn)物生物活性廣泛，包括細(xì)胞毒[29]、tapdna聚合酶抑制[30]、抗hiv[31]、nfrd抑制[32]和抗糖尿病[33]等。
[0003]
現(xiàn)有技術(shù)中從黑曲霉中獲取了一定數(shù)量的次生代謝產(chǎn)物，但該類數(shù)量并不全面，通過全基因組分析發(fā)現(xiàn)，黑曲霉共有55個基因簇可編譯聚酮類次生代謝產(chǎn)物的合成，而過去發(fā)表的化合物僅僅是其中少于30％的基因簇調(diào)控產(chǎn)生，由此可見黑曲霉中尚有很多調(diào)控萘并-γ-吡喃酮類化合物合成的基因處于沉默狀態(tài)，而次生代謝產(chǎn)物(萘并-γ-吡喃酮類化合物)的具有較高的藥用價值，因此有必要提供一種能夠使黑曲霉產(chǎn)生更多次生代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)方法。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
[0004]
本發(fā)明的目的在于提供一種發(fā)酵混合物中聚酮類化合物高效初分離方法，用以實現(xiàn)提高產(chǎn)更多類型的次生代謝產(chǎn)物(萘并-γ-吡喃酮類化合物)的技術(shù)效果。
[0005]
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0006]
s1發(fā)酵
[0007]
將黑曲霉菌種進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)得到發(fā)酵物；
[0008]
所述步驟s1發(fā)酵中的具體操作方法如下：
[0009]
將大米、煙酰胺和水浸泡，浸泡時間為12小時，溫度為30℃；
[0010]
浸泡后在121℃條件下進(jìn)行滅菌30分鐘，放置冷卻，向其加入黑曲霉pdb 培養(yǎng)菌液進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度為25-35℃，培養(yǎng)時間為25-35天，得到固體發(fā)酵物待用；
[0011]
s2分離，
[0012]
得到的固體發(fā)酵物后，切成碎塊，加入乙醇提取一次，收集提取液，殘渣再拿乙醇提取一次，收集提取液并合并兩次提取液，再進(jìn)入蒸餾環(huán)節(jié)回收乙醇，剩下的殘余物，即目標(biāo)物的混合物用乙酸乙酯萃取1次，回收乙酸乙酯，濾液再用乙酸乙酯萃取2次，得到產(chǎn)物。
[0013]
本發(fā)明的有益效果是：本申請和常規(guī)的乙醇的循環(huán)萃取技術(shù)不同，因為常規(guī)的乙醇循環(huán)提取的對象是固體，相對簡單。此處s2中分離的是液體，因此需要采用本申請方案中的對乙酸乙酯被液體稀釋，降低循環(huán)提取的難度。
具體實施方式
[0014]
s1發(fā)酵
[0015]
將黑曲霉菌種進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)得到發(fā)酵物；
[0016]
所述步驟s1發(fā)酵中的具體操作方法如下：
[0017]
將大米、煙酰胺和水浸泡，浸泡時間為12小時，溫度為30℃；
[0018]
浸泡后在121℃條件下進(jìn)行滅菌30分鐘，放置冷卻，向其加入黑曲霉pdb 培養(yǎng)菌液進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度為25-35℃，培養(yǎng)時間為25-35天，得到固體發(fā)酵物待用；
[0019]
s2分離，
[0020]
得到的固體發(fā)酵物后，切成碎塊，加入乙醇提取一次，收集提取液，殘渣再拿乙醇提取一次，收集提取液并合并兩次提取液，再進(jìn)入蒸餾環(huán)節(jié)回收乙醇，剩下的殘余物，即目標(biāo)物的混合物用乙酸乙酯萃取1次，回收乙酸乙酯，濾液再用乙酸乙酯萃取2次，得到產(chǎn)物。
[0021]
以上所述，僅為本發(fā)明的具體實施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)所述以權(quán)利要求的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。
技術(shù)特征：
1.一種發(fā)酵混合物中聚酮類化合物高效初分離方法，其特征在于，包括以下步驟：s1發(fā)酵將黑曲霉菌種進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)得到發(fā)酵物；s2分離，得到的固體發(fā)酵物后，切成碎塊，加入乙醇提取一次，收集提取液，殘渣再拿乙醇提取一次，收集提取液并合并兩次提取液。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種發(fā)酵混合物中聚酮類化合物高效初分離方法，其特征在于，步驟s2分離中，再進(jìn)入蒸餾環(huán)節(jié)回收乙醇，剩下的殘余物，即目標(biāo)物的混合物用乙酸乙酯萃取1次，回收乙酸乙酯，濾液再用乙酸乙酯萃取2次，得到產(chǎn)物。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種發(fā)酵混合物中聚酮類化合物高效初分離方法，其特征在于，所述步驟s1發(fā)酵中的具體操作方法如下：將大米、煙酰胺和水浸泡，浸泡時間為12小時，溫度為30℃。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種發(fā)酵混合物中聚酮類化合物高效初分離方法，其特征在于，步驟s1發(fā)酵中，浸泡后在121℃條件下進(jìn)行滅菌30分鐘，放置冷卻，向其加入黑曲霉pdb培養(yǎng)菌液進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度為25-35℃，培養(yǎng)時間為25-35天，得到固體發(fā)酵物待用。
技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種發(fā)酵混合物中聚酮類化合物高效初分離方法，涉及發(fā)酵的技術(shù)領(lǐng)域，包括以下步驟：S1發(fā)酵，將黑曲霉菌種進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)得到發(fā)酵物；S2分離，得到的固體發(fā)酵物后，切成碎塊，加入乙醇提取一次，收集提取液。收集提取液。
